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奶牛乳房炎5种致病菌多重PCR检测方法的建立与应用

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动物医学进展 2025年第1期46卷 48-55页

作者：王雪容张宇张海森杨王浩靳亚平陈华涛西北农林科技大学动物医学院/农业农村部动物生物技术重点实验室陕西杨凌712100

为建立一种能快速检测奶牛乳房炎主要病原菌(大肠埃希氏菌、无乳链球菌、肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌)的多重PCR检测方法,根据大肠埃希氏菌phoA基因、无乳链球菌ef-tu基因、肺炎克雷伯氏菌Khe基因、金黄色葡萄球菌Nu... 详细信息

为建立一种能快速检测奶牛乳房炎主要病原菌(大肠埃希氏菌、无乳链球菌、肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌)的多重PCR检测方法,根据大肠埃希氏菌phoA基因、无乳链球菌ef-tu基因、肺炎克雷伯氏菌Khe基因、金黄色葡萄球菌Nuc基因和肠炎沙门氏菌invA基因设计特异性引物,优化PCR反应体系与反应程序并进行特异性试验,同时分别构建含病原菌基因的pMD-19T重组质粒进行灵敏性试验。结果显示,多重PCR反应的最适引物工作浓度为0.8μmol/L,最适退火温度为59.6℃,最佳延伸时间为40 s,最合适的循环数为30次;优化后的多重PCR反应体系可扩增出5种目标病原菌的特异性条带;5种病原菌PCR检测灵敏度可达到5 copies/μL。进一步利用该多重PCR反应体系对采集的108份乳房炎乳样进行检测,检测结果显示,108份样本的阳性检出率为77.8%,大肠埃希氏菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和肠炎沙门氏菌的检出率分别为23.1%、8.3%、34.3%、8.3%、5.6%。结果表明,建立了一种具有良好特异性和灵敏性的多重PCR检测方法,在临床生产实践中可用于快速鉴定奶牛乳房炎的致病菌,为奶牛乳房炎的诊断、防控与流行病学调查提供了方法基础。

关键词：奶牛乳房炎病原菌多重PCR

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西安地区犬和猫肿瘤流行现状与防治对策

动物医学进展 2025年第1期46卷 128-134页

作者：白佳秀吕子颖段学鹏韩永荣郭抗抗吕长荣西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 海南大学热带农林学院海南海口570228 西北农林科大西安动物医院陕西西安710065

通过对西北农林科大西安动物医院4年7个月共收治的西安地区7399例(犬4813例,猫2586例)犬和猫病例中308例肿瘤的分析,发现犬、猫肿瘤发病率分别为5.96%和0.81%;最常发的肿瘤有乳腺肿瘤、恶性淋巴瘤、脂肪瘤、肥大细胞瘤与肛周腺瘤。犬发... 详细信息

通过对西北农林科大西安动物医院4年7个月共收治的西安地区7399例(犬4813例,猫2586例)犬和猫病例中308例肿瘤的分析,发现犬、猫肿瘤发病率分别为5.96%和0.81%;最常发的肿瘤有乳腺肿瘤、恶性淋巴瘤、脂肪瘤、肥大细胞瘤与肛周腺瘤。犬发病品种以贵宾犬、牧羊犬与金毛犬居多,分别占24.64%、12.56%和11.59%;小型犬发病率最高,占51.57%。老龄犬多发,但9岁以下犬发病率也高达33.45%。发病季节集中在冬春季节。发病部位以乳腺和皮肤最多,分别占29.27%和21.95%。雌性犬、猫发病率分别为58.19%和42.86%,雄性犬、猫发病率分别为41.81%和57.14%;未绝育雌性犬、猫更易发生乳腺肿瘤与泌尿生殖道肿瘤,未去势雄性犬、猫更易发生肛周肿瘤。组织活检与组织病理学结果显示良性肿瘤占58.51%,恶性肿瘤占41.49%。

关键词：肿瘤犬猫流行现状防治对策

藏西北绒山羊子宫内膜容受性相关基因和可变剪接事件的综合分析

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中国组织工程研究 2025年第7期29卷 1429-1436页

作者：德吉索朗达魏宇辰王斌阿旺措吉仁青措姆崔久增张磊巴贵西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏自治区拉萨市850009 西北农林科技大学动物医学院陕西省杨凌示范区712100 西北农林科技大学动物科技学院陕西省杨凌示范区712100

背景:藏西北绒山羊子宫内膜容受性是胚胎植入的关键因素,目前对于藏西北绒山羊子宫内膜容受性相关基因表达及可变剪接的认识还未明确。目的:分析并挖掘藏西北绒山羊子宫内膜容受性相关的基因和可变剪接事件。方法:在妊娠第5天和第15天(... 详细信息

背景:藏西北绒山羊子宫内膜容受性是胚胎植入的关键因素,目前对于藏西北绒山羊子宫内膜容受性相关基因表达及可变剪接的认识还未明确。目的:分析并挖掘藏西北绒山羊子宫内膜容受性相关的基因和可变剪接事件。方法:在妊娠第5天和第15天(分别代表容受前子宫内膜组和容受性子宫内膜组),分别随机选取3只藏西北绒山羊,采集子宫内膜组织,苏木精-伊红染色观察组织形态,免疫组织化学检测子宫内膜容受性标志蛋白白血病抑制因子、血管内皮生长因子的表达水平;提取子宫内膜组织总RNA,质量检测合格后进行转录组测序,寻找差异表达的mRNA、长链非编码RNA、环状RNA和miRNA,进行功能预测,并分析与子宫内膜容受性相关的可变剪接mRNA和长链非编码RNA。结果与结论:(1)与容受前子宫内膜组比较,容受性子宫内膜组子宫内膜组织中白血病抑制因子和血管内皮生长因子蛋白的表达水平明显升高;(2)测序结果显示,差异表达基因多为mRNA和长链非编码RNA,包括250个上调的mRNA、193个上调的长链非编码RNA、135个下调的mRNA和123个下调的长链非编码RNA,显著富集于Wnt、Hedgehog和Hippo信号通路;(3)可变剪接事件分析显示有8个差异表达的可变剪接转录本,均为mRNA分子,其中2个下调、6个上调,与血管内皮生长因子受体信号、细胞运动和胚胎发育有关。

关键词：藏西北绒山羊子宫内膜容受性转录组测序差异表达基因可变剪接白血病抑制因子血管内皮生长因子

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中草药防治犊牛腹泻的研究现状

动物医学进展 2025年第1期46卷 113-117页

作者：王德志文鹏杨海峰刘永军尹文吴晨晨宁夏博瑞科技有限公司宁夏银川750011 宁夏农垦乳业股份有限公司宁夏银川750004 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

犊牛腹泻作为新生犊牛常见病,也是导致犊牛死亡的主要病因,严重危害牛养殖业的发展。因此,降低腹泻发病率对牛群健康和牧场收益具有重要意义。当前主要以抗菌药物来治疗犊牛腹泻,但大量使用抗菌药物加重了细菌耐药性和抗菌药物残留,危... 详细信息

犊牛腹泻作为新生犊牛常见病,也是导致犊牛死亡的主要病因,严重危害牛养殖业的发展。因此,降低腹泻发病率对牛群健康和牧场收益具有重要意义。当前主要以抗菌药物来治疗犊牛腹泻,但大量使用抗菌药物加重了细菌耐药性和抗菌药物残留,危害公共卫生及食品安全。中草药具有抗菌消炎、提高机体免疫力,逐渐成为治疗疾病的热点,并取得了良好的治疗效果,相比于抗菌药物等西药,毒性低、成本低、对环境造成的危害较小。论文主要综述了犊牛腹泻病原流行情况、中草药在抗菌、抗病毒、抗寄生虫方面的研究及中草药对犊牛腹泻的预防和防治作用,为中草药在犊牛腹泻的应用中提供进一步参考价值。

关键词：中草药犊牛犊牛腹泻

基于GWAS对348份玉米种质资源的籽粒容重性状的分析

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中国农业大学学报 2025年第1期 14-27页

作者：周洋陈小央李燕张天宇韩庆辉王晓敏骆遥何军光赵光武浙江农林大学现代农学院义乌玉米科技小院浙江省种子管理总站浙江新安化工集团股份有限公司

为深入挖掘玉米籽粒容重的相关优势基因，以348份包含普通玉米、甜玉米、糯玉米、爆裂玉米等遗传多样性丰富的玉米自交系为关联群体进行全基因组关联分析（Genome-Wide Association Study, GWAS），分别对2022年浙江东阳、2022和2023年... 详细信息

为深入挖掘玉米籽粒容重的相关优势基因，以348份包含普通玉米、甜玉米、糯玉米、爆裂玉米等遗传多样性丰富的玉米自交系为关联群体进行全基因组关联分析（Genome-Wide Association Study, GWAS），分别对2022年浙江东阳、2022和2023年海南乐东收获的自交系种子进行容重测定和全基因组关联分析，分析不同品种玉米籽粒容重性状差异，挖掘容重相关位点和控制容重的候选基因。结果表明：浙江东阳和海南乐东的玉米籽粒容重性状指标的频率分布呈单峰型曲线，符合正态分布。利用SNP标记全基因组关联分析，以阈值P>8.7筛选出与玉米籽粒容重性状显著相关的SNP位点，2022年浙江东阳地区筛选出SNP位点146个，2022年海南乐东地区筛选出261个，2023年海南乐东地区筛选出705个，重叠SNP位点共67个，最终在相关SNP位点附近筛选出候选基因14个。其中，同时在浙江东阳（2022年）、海南乐东（2022和2023年）不同环境下均检测到的SNP S3＿219692500位于Zm00001d044129(Shrunken2)基因区域，该基因为玉米甜度控制基因，即该基因突变后产生超甜玉米，籽粒皱缩，玉米容重下降。

关键词：玉米籽粒容重(KTW) 全基因组关联分析(GWAS) 候选基因

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丝素蛋白水凝胶支架的制备及其性能

纺织学报 2022年第6期43卷 44-48,56页

作者：李艾元施心雨岳万福游卫云浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江杭州311300

为探究丝素蛋白水凝胶材料的制备条件及其生物相容性,以二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)和脱胶丝素蛋白(SF)构成可控水凝胶体系,通过磷脂和SF链之间的静电和疏水作用,使SF链向β折叠结构转变获得SF水凝胶支架,分析了其细胞增殖率、细胞分化... 详细信息

为探究丝素蛋白水凝胶材料的制备条件及其生物相容性,以二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)和脱胶丝素蛋白(SF)构成可控水凝胶体系,通过磷脂和SF链之间的静电和疏水作用,使SF链向β折叠结构转变获得SF水凝胶支架,分析了其细胞增殖率、细胞分化率、动物体内支架细胞肌肉生长速度和降解速度等。结果表明:DMPG浓度越高,SF水凝胶支架凝胶时间越短,添加15 mmol/L的DMPG使SF水凝胶支架的凝胶时间由原来的7 d缩短至10 min;DMPG诱导的SF水凝胶支架无细胞毒性,其中DMPG浓度为10 mmol/L时细胞增殖率最高,将该水凝胶注射入湖羊耳部皮下,其中载有湖羊肌肉卫星细胞的SF水凝胶支架在湖羊耳部生长出肌肉;SF水凝胶支架具有优异的生物相容性,随着其在动物体内时间的增加,支架逐渐降解消失,暴露出其中的肌肉组织。

关键词：组织工程丝素蛋白水凝胶细胞增殖分化脱胶方法蚕丝血管化生物相容性

酵母培养物对黄羽肉鸡生长性能、免疫功能和盲肠微生物区系的影响

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动物营养学报 2022年第12期34卷 7701-7710页

作者：赵桂玲牛玉张瑞强代兵杨彩梅浙江农林大学动物科技学院•动物医学院杭州311300

本试验旨在研究饲粮添加不同水平酵母培养物对黄羽肉鸡生长性能、免疫功能和盲肠微生物区系的影响。选取1日龄黄羽肉鸡公雏360只,随机分为3个组,每组8个重复,每个重复15羽。对照组(YC_(0)组)饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加100... 详细信息

本试验旨在研究饲粮添加不同水平酵母培养物对黄羽肉鸡生长性能、免疫功能和盲肠微生物区系的影响。选取1日龄黄羽肉鸡公雏360只,随机分为3个组,每组8个重复,每个重复15羽。对照组(YC_(0)组)饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加1000(YC_(1000)组)和2000 mg/kg(YC_(2000)组)酵母培养物。试验期70 d。结果表明:1)与YC_(0)组相比,YC_(1000)组黄羽肉鸡70日龄平均体重显著提高(P<0.05),1-70日龄料重比(F/G)显著降低(P<0.05)。2)与YC_(0)组相比,YC_(1000)组和YC_(2000)组黄羽肉鸡血清免疫球蛋白A和免疫球蛋白Y含量显著提高(P<0.05),血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α含量显著降低(P<0.05),血清白细胞介素-10(IL-10)含量显著提高(P<0.05);且与YC_(2000)组相比,YC_(1000)组血清IL-1β含量显著降低(P<0.05),血清IL-10含量显著提高(P<0.05)。3)与YC_(0)组相比,YC_(1000)组和YC_(2000)组黄羽肉鸡血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶活性和总抗氧化能力(T-AOC)均显著提高(P<0.05),血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05);且与YC_(2000)组相比,YC_(1000)组血清GSH-Px、T-SOD活性和T-AOC显著提高(P<0.05),血清MDA含量显著降低(P<0.05)。4)与YC_(0)组相比,YC_(2000)组黄羽肉鸡盲肠微生物Chao指数和Shannon指数显著提高(P<0.05),YC_(1000)组盲肠迷踪菌门(Elusimicrobiota)相对丰度显著提高(P<0.05),YC_(1000)组和YC_(2000)组盲肠拟杆菌属(Bacteroides)相对丰度显著降低(P<0.05);与YC_(2000)组相比,YC_(1000)组盲肠理研菌科RC9肠道群(Rikenellaceae_RC9_gut_group)相对丰度显著提高(P<0.05)。综上所述,饲粮添加酵母培养物能够降低黄羽肉鸡F/G,增强血清免疫和抗氧化功能,降低盲肠拟杆菌属相对丰度,提高盲肠理研菌科RC9肠道群相对丰度,且以添加1000 mg/kg效果为佳。

关键词：酵母培养物黄羽肉鸡免疫功能炎症因子抗氧化功能盲肠微生物区系

基于丝素蛋白的可注射水凝胶在肌肉再生工程的应用

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丝绸 2023年第2期60卷 42-48页

作者：李艾元施心雨刘梦斐李诚宣智宏岳万福浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300

针对丝素蛋白水凝胶可注射性较差、机械性能不稳定、无法植入细胞等问题,文章制作了一种新型的可注射丝素蛋白水凝胶。通过弱碱法脱去蚕丝的丝胶蛋白,经过溶解、透析、离心、过滤后获得丝素蛋白溶液,利用磷脂诱导丝素蛋白溶液形成水凝... 详细信息

针对丝素蛋白水凝胶可注射性较差、机械性能不稳定、无法植入细胞等问题,文章制作了一种新型的可注射丝素蛋白水凝胶。通过弱碱法脱去蚕丝的丝胶蛋白,经过溶解、透析、离心、过滤后获得丝素蛋白溶液,利用磷脂诱导丝素蛋白溶液形成水凝胶。将水凝胶和细胞通过注射的方式植入湖羊耳部,分别在1、6、11 d取出水凝胶—肌肉细胞生长样品,通过Masson染色研究了水凝胶的降解规律和肌肉再生的过程。结果表明:这种基于丝素蛋白的新型水凝胶凝胶时间可控,制备简单,具有可注射性。水凝胶可以植入细胞,并且细胞在水凝胶中形成新的肌肉组织,说明这种基于丝素蛋白的新型水凝胶可以用作肌肉再生工程。进一步梳理丝素蛋白水凝胶的制备过程和切片结果发现:水凝胶制作简单,细胞在水凝胶中可以增殖分化,只需要注射就可以进入动物体内,在动物体内还可以降解。最终结果表明:基于丝素蛋白的水凝胶可以用肌肉组织再生工程,磷脂诱导的方式使水凝胶具备可注射性。

关键词：水凝胶自凝结磷脂丝素蛋白 β折叠

单增李斯特菌溶血素O的PEST序列激活ERK1/2磷酸化的作用

同方期刊数据库博看期刊评论

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微生物学报 2020年第2期60卷 349-358页

作者：马天天杭奕陶旗俞晓蓉祝艺然宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江杭州311300

[目的]本研究旨在构建单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)溶血素O(Listeriolysin O,LLO)的关键结构域PEST序列(包含S44、S48和T51关键磷酸化位点)突变体,并针对其生物学功能展开研究。[方法]以李斯特菌... 详细信息

[目的]本研究旨在构建单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)溶血素O(Listeriolysin O,LLO)的关键结构域PEST序列(包含S44、S48和T51关键磷酸化位点)突变体,并针对其生物学功能展开研究。[方法]以李斯特菌参考菌株EGD-e为模板扩增编码LLO的hly基因,克隆至pET30a(+)原核表达载体,在此基础上利用氨基酸突变技术获得表达PEST突变体(LLO△PEST、LLOS44A、LLOS48A和LLOT51A)的重组质粒,转入*** Rosetta感受态细胞中,诱导表达重组蛋白经镍离子亲和层析纯化后进行SDS-PAGE分析。利用红细胞裂解试验检测重组蛋白的溶血活性,并通过Western blotting检测重组突变蛋白刺激Caco-2细胞后对MAPK关键信号分子ERK1/2磷酸化水平变化的影响。[结果]结果显示,本研究成功获得重组LLO及其突变体蛋白LLO△PEST、LLOS44A、LLOS48A和LLOT51A。在pH5.5和7.4条件下,LLO△PEST、LLOS44A、LLOS48A和LLOT51A均具有和LLO相当的溶血活性,说明PEST序列缺失或突变并不影响LLO的膜裂解活性。研究进一步发现,重组LLO及其突变蛋白刺激Caco-2细胞后均能激活ERK1/2的磷酸化。[结论]研究表明LLO的关键结构域PEST序列对于维持该蛋白的膜裂解能力及穿孔活性并非必需,且该结构域的缺失不影响李斯特菌在感染宿主时依赖LLO介导ERK1/2磷酸化的生物学过程。本研究将为进一步探索细菌感染过程中PEST序列对于LLO发挥生物学功能的潜在作用及分子机制奠定基础。

关键词：单核细胞增多性李斯特菌溶血素O PEST序列膜裂解活性 ERK1/2磷酸化