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基于丝素蛋白的可注射水凝胶在肌肉再生工程的应用

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丝绸 2023年第2期60卷 42-48页

作者：李艾元施心雨刘梦斐李诚宣智宏岳万福浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300

针对丝素蛋白水凝胶可注射性较差、机械性能不稳定、无法植入细胞等问题,文章制作了一种新型的可注射丝素蛋白水凝胶。通过弱碱法脱去蚕丝的丝胶蛋白,经过溶解、透析、离心、过滤后获得丝素蛋白溶液,利用磷脂诱导丝素蛋白溶液形成水凝... 详细信息

针对丝素蛋白水凝胶可注射性较差、机械性能不稳定、无法植入细胞等问题,文章制作了一种新型的可注射丝素蛋白水凝胶。通过弱碱法脱去蚕丝的丝胶蛋白,经过溶解、透析、离心、过滤后获得丝素蛋白溶液,利用磷脂诱导丝素蛋白溶液形成水凝胶。将水凝胶和细胞通过注射的方式植入湖羊耳部,分别在1、6、11 d取出水凝胶—肌肉细胞生长样品,通过Masson染色研究了水凝胶的降解规律和肌肉再生的过程。结果表明:这种基于丝素蛋白的新型水凝胶凝胶时间可控,制备简单,具有可注射性。水凝胶可以植入细胞,并且细胞在水凝胶中形成新的肌肉组织,说明这种基于丝素蛋白的新型水凝胶可以用作肌肉再生工程。进一步梳理丝素蛋白水凝胶的制备过程和切片结果发现:水凝胶制作简单,细胞在水凝胶中可以增殖分化,只需要注射就可以进入动物体内,在动物体内还可以降解。最终结果表明:基于丝素蛋白的水凝胶可以用肌肉组织再生工程,磷脂诱导的方式使水凝胶具备可注射性。

关键词：水凝胶自凝结磷脂丝素蛋白 β折叠

丝素蛋白对斑马鱼高血脂模型的降血脂作用探究

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丝绸 2022年第7期59卷 14-19页

作者：李艾元施心雨刘梦斐李诚岳万福游卫云浙江农林大学动物科技学院·动物医学院杭州311300

为了探究丝素蛋白对斑马鱼高血脂模型是否具有抑制作用,从而拓展丝素蛋白在人类医药领域的作用,文章通过建立斑马鱼幼苗高血脂模型,并用组织染色与免疫荧光染色对模型进行检验与分析,最后脱水染色的结果通过图像软件ImageJ和SPSS 22.0... 详细信息

为了探究丝素蛋白对斑马鱼高血脂模型是否具有抑制作用,从而拓展丝素蛋白在人类医药领域的作用,文章通过建立斑马鱼幼苗高血脂模型,并用组织染色与免疫荧光染色对模型进行检验与分析,最后脱水染色的结果通过图像软件ImageJ和SPSS 22.0进行比较分析。结果表明:随着培养基中蛋黄粉质量分数提高,斑马鱼尾脂荧光强度逐渐提高,斑马鱼高血脂症状加剧,可以建立高血脂模型。通过综合比较分析,实验造模选择含0.1%蛋黄粉的培养基。斑马鱼幼苗的高血脂模型在丝素蛋白溶液质量浓度为1.0μg/mL时,丝素蛋白中的限制性氨基酸对斑马鱼高血脂降低最明显。最后通过与市面上的降血脂药物(辛伐他汀)在同种质量浓度下比较,验证了各个质量浓度的丝素蛋白对斑马鱼高血脂模型均有抑制作用。丝素蛋白通过降低斑马鱼血浆中脂质水平来抑制高血脂,未来可用于降血脂药物替代或者作为辅药添加。

关键词：丝素蛋白降血脂作用人类医药斑马鱼高血脂模型

烟酰胺单核苷酸(NMN)对小鼠C2C12细胞成肌分化的影响

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农业生物技术学报 2022年第4期30卷 695-703页

作者：沈龙仙王丽婷汪涵杨松柏李向臣赵阿勇周晓龙浙江农林大学动物科技学院/动物医学院

烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide, NMN)具备多种生物学功能，对心脑疾病、老年退行性疾病、神经退行性疾病、抗衰老等具有治疗作用。经NMN处理后的骨骼肌对衰老相关的转录变化有显著的预防作用，但NMN对骨骼肌增殖分化有何... 详细信息

烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide, NMN)具备多种生物学功能，对心脑疾病、老年退行性疾病、神经退行性疾病、抗衰老等具有治疗作用。经NMN处理后的骨骼肌对衰老相关的转录变化有显著的预防作用，但NMN对骨骼肌增殖分化有何作用尚不明确。为深入了解NMN对细胞成肌分化的影响、丰富肌肉生长发育的机制，本研究以小鼠(Mus musculus)成肌细胞(mouse myoblasts) C2C12为模型，将不同浓度的NMN (0, 0.1, 1和2μg/mL)应用于2%马血清(horse serum, HS)诱导分化的C2C12。采用CCK-8 (Cell Counting Kit-8)法检测NMN处理后C2C12细胞的活力；通过2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(2’,7’-dichlorodi-hydrofluorescein diacetate, DCFH-DA)和四氯四乙基苯并咪唑碳菁碘(5,5’,6,6’-tetrechloro-1,1’,3,3’-tetraethyl benzimidazol carbocyanine iodide, JC-1)两种荧光探针，分别对细胞进行染色，检测NMN对C2C12细胞线粒体膜电位和活性氧(reactive oxygen species, ROS)的影响；利用Western blot及免疫荧光技术检测肌细胞分化标记因子肌生成素(myogenin, MyoG)、肌分化因子1 (myogenic differentiation 1,MyoD1)表达和肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MYH)的蛋白表达水平。结果显示，0、0.1、1和2μg/mL的NMN对C2C12细胞没有毒性作用，并且一定浓度的NMN在一定时间内可以促进细胞活力，提高线粒体膜电位，上调成肌分化相关蛋白MyoG、MyoD1和MYH的表达。上述研究结果表明，一定浓度的NMN在一定时间内可以促进C2C12细胞成肌分化。本研究丰富了NMN的生理作用，为后续NMN在畜牧产业的应用提供新的参考基础。

关键词：烟酰胺单核苷酸(NMN) C2C12细胞成肌分化肌肉特异性基因

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不同日龄湖羊羔羊瘤胃上皮细菌的差异

浙江农林大学学报 2023年第3期40卷 673-679页

作者：纪雯雯云燕王翀茅慧玲浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江杭州311300

【目的】比较不同日龄湖羊Ovis aries羔羊瘤胃上皮细菌多样性及菌群组成差异,为幼龄反刍动物早期断奶提供理论依据。【方法】选用10只出生体质量相近的初生湖羊羔羊,分别于日龄30 d (D30)和45 d (D45)各屠宰5只以获得瘤胃上皮组织,对其... 详细信息

【目的】比较不同日龄湖羊Ovis aries羔羊瘤胃上皮细菌多样性及菌群组成差异,为幼龄反刍动物早期断奶提供理论依据。【方法】选用10只出生体质量相近的初生湖羊羔羊,分别于日龄30 d (D30)和45 d (D45)各屠宰5只以获得瘤胃上皮组织,对其进行测序及微生物多样性分析。【结果】D45组羔羊瘤胃上皮细菌的操作分类单元(OTU)个数显著多于D30组羔羊(P<0.05),Chao1指数D45组有增加的趋势(P=0.07)。与D45组相比,D30组羔羊瘤胃细菌弯曲杆菌属Campylobacter和肠单胞菌Intestinimonas的相对丰度显著降低(P<0.05),拟杆菌属Bacteroides和小杆菌属Dialister的相对丰度有降低的趋势(P=0.083);而萨顿氏菌属Suttonella、脱硫弧菌属Desulfobulbus和单胞菌属Brachymonas的相对丰度显著增加(P<0.05),琥珀酸菌属Succiniclasticum有增加的趋势(P=0.083)。相关性分析发现:萨顿氏菌属与瘤胃挥发性脂肪酸含量呈正相关(P<0.05),拟杆菌属、琥珀酸菌属、瘤胃球菌属Ruminococcus和奇异菌属Atopobium与瘤胃乳头长度呈负相关(P<0.01),琥珀酸菌属与瘤胃乳头宽度呈正相关(P<0.01)。【结论】不同日龄羔羊的瘤胃上皮细菌定植存在差异,这些菌群参与瘤胃挥发性脂肪酸代谢及瘤胃乳头发育。图7表2参32。

关键词：日龄湖羊羔羊瘤胃上皮瘤胃细菌

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饲养模式对肉鸡腿骨健康及抗氧化性能的影响

中国畜牧杂志 2023年第6期59卷 316-320页

作者：颜菲菲王亚玲刘梦琪陈肇铭赵阿勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江杭州311300

本试验旨在探讨饲养模式对肉鸡腿骨尺寸、骨密度、骨强度、骨组织细胞因子含量以及抗氧化性能的影响。饲喂200只7日龄混合性别的817白羽肉鸡,随机分为笼养组和地养组,每组设置10个重复,每个重复10只鸡。试验期42 d,试验结束后采集肉鸡... 详细信息

本试验旨在探讨饲养模式对肉鸡腿骨尺寸、骨密度、骨强度、骨组织细胞因子含量以及抗氧化性能的影响。饲喂200只7日龄混合性别的817白羽肉鸡,随机分为笼养组和地养组,每组设置10个重复,每个重复10只鸡。试验期42 d,试验结束后采集肉鸡的左腿胫骨和股骨测定骨骼尺寸、骨密度和骨强度,并采集右腿胫骨骨骺和肝脏样品,分别用于测定细胞因子和抗氧化性能。结果显示:两组肉鸡之间的腿骨尺寸和骨面积没有显著差异,但是地养组肉鸡股骨和胫骨的骨矿含量相对于笼养组肉鸡有上升趋势(0.05

关键词：饲养模式肉鸡骨骼质量细胞因子抗氧化

犬源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及对头孢菌素类药物的耐药性分析

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黑龙江畜牧兽医 2023年第23期 71-76,133,134页

作者：叶慧雯陈鸣远黄海钊郑恩沛张凌麒周彬张红海南大学动物科技学院海口570228 浙江农林大学动物科技学院杭州311300

为了探究犬源肺炎克雷伯菌对头孢菌素类药物的耐药情况,试验对从海南省12个市县公园中采集的357份新鲜犬粪便拭子,采用分离培养初筛、形态学观察、药敏试验及PCR扩增16S rRNA、耐药基因检测及接合转移试验等方法对细菌特性进行研究。结... 详细信息

为了探究犬源肺炎克雷伯菌对头孢菌素类药物的耐药情况,试验对从海南省12个市县公园中采集的357份新鲜犬粪便拭子,采用分离培养初筛、形态学观察、药敏试验及PCR扩增16S rRNA、耐药基因检测及接合转移试验等方法对细菌特性进行研究。结果表明:共鉴定得到9株耐药性肺炎克雷伯菌,其中8株呈现多重耐药性,对氨苄西林、复方新诺明和头孢曲松的耐药率为88.9%,对庆大霉素、环丙沙星、头孢吡肟、左氧氟沙星、阿米卡星也呈不同程度的耐药(22.2%~55.6%);耐药基因blaCTX-M、blaTEM、blaSHV、blaCTX-M-14、blaCTX-M-15的检出率分别为100%、66.7%、55.6%、33.3%、44.4%,未检出blaCTX-M-2、blaCTX-M-64和blaCTX-M-123基因;分离菌株能通过接合途径发生耐药基因的水平传递。说明排泄于公园环境的犬粪便含有耐头孢菌素类药物的肺炎克雷伯菌,绝大多数菌株为多重耐药菌株,且其耐药基因可能会在动物、环境和人之间相互传播,存在潜在的公共健康风险。

关键词：肺炎克雷伯菌接合试验多重耐药耐药基因头孢菌素类药物

乙型脑炎病毒感染PK15细胞的lncRNA差异表达谱分析

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畜牧兽医学报 2022年第1期53卷 272-281页

作者：朱静静戴政列汪涵李向臣赵阿勇周晓龙杨松柏浙江农林大学动物科技学院·动物医学院临安311300

旨在分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染猪肾上皮细胞PK15后的lncRNA差异表达谱,探究宿主lncRNA在JEV感染和宿主防御中的潜在功能。本研究中利用JEV感染PK15细胞,感染36 h,收集细胞,同时设立未感染对照组,每组3个... 详细信息

旨在分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染猪肾上皮细胞PK15后的lncRNA差异表达谱,探究宿主lncRNA在JEV感染和宿主防御中的潜在功能。本研究中利用JEV感染PK15细胞,感染36 h,收集细胞,同时设立未感染对照组,每组3个生物学重复。提取细胞总RNA,构建cDNA文库后进行高通量测序,筛选出差异表达lncRNA。通过对差异表达lncRNA与mRNA的位置关系以及序列相似性预测顺式和反式作用的靶基因,将预测的靶基因进行GO和KEGG分析。最后随机选出9个差异表达lncRNAs,利用实时荧光定量PCR(quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)技术进行表达验证。结果表明,本研究中共鉴定出856个差异表达lncRNAs,其中452个lncRNAs显著上调表达,404个lncRNAs显著下调表达。GO分析发现,lncRNA的靶基因主要富集于先天性免疫反应;KEGG通路分析发现lncRNA的靶基因显著富集于肿瘤坏死因子、Toll样受体和NF-κB等信号通路。通过qRT-PCR验证发现,定量结果和测序结果基本一致。本研究为进一步探究lncRNA参与宿主免疫反应调控JEV复制奠定了理论基础。

关键词：猪乙型脑炎病毒先天免疫反应 PK15细胞高通量测序

单核细胞增多性李斯特菌氨基肽酶Lmo1711体外表达及其酶活分析

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生物工程学报 2018年第5期34卷 685-693页

作者：何展王航韩笑马天天杭奕俞慧飞卫芳芳孙静杨永春程昌勇宋厚辉浙江农林大学动物科技学院浙江临安311300

对单核细胞增多性李斯特菌(简称单增李斯特菌)lmo1711基因编码的氨基肽酶进行克隆表达与纯化,并研究该重组蛋白的体外酶学特性。首先通过生物信息学分析预测Lmo1711与氨基肽酶家族成员的亲缘关系及关键活性位点的保守性。利用SWISS-MODE... 详细信息

对单核细胞增多性李斯特菌(简称单增李斯特菌)lmo1711基因编码的氨基肽酶进行克隆表达与纯化,并研究该重组蛋白的体外酶学特性。首先通过生物信息学分析预测Lmo1711与氨基肽酶家族成员的亲缘关系及关键活性位点的保守性。利用SWISS-MODEL模拟预测该蛋白的空间结构;构建Lmo1711原核表达载体并转化入E.coli Rosetta中,诱导表达重组目的蛋白,并利用镍离子亲和层析方法纯化目的蛋白;以氨基酸-对硝基苯胺偶联物为底物,Lmo1711通过水解底物N端氨基酸残基产生游离对硝基苯胺单体,405 nm处检测吸光值对该产物进行检测从而分析Lmo1711的酶学特性。在此基础上系统研究Lmo1711对不同氨基酸残基底物的催化特异性,及不同金属离子对该酶活性的影响。经原核表达纯化获得49.3 kDa的重组Lmo1711蛋白,与预测分子量一致;生物信息学分析推测Lmo1711属于M29氨基肽酶家族,且存在保守关键氨基酸活性位点(Glu250、Glu316、His345、Tyr352、His378、Asp380);酶活分析显示,Lmo1711具有较强的氨基肽酶活性,针对不同底物的结合和催化能力差异较大,对亮氨酸残基的亲和程度最高;Lmo1711氨基肽酶活性具有金属离子依赖性,Co^(2+)、Cd^(2+)、Zn^(2+)等多种金属离子均能显著增强其活性,其中Co^(2+)的激活效应最显著。本试验首次发现并证实,单增李斯特菌Lmo1711属于M29氨基肽酶家族成员,具有较强的催化活性,且对金属离子具有不同程度的依赖性。

关键词：单核细胞增多性李斯特菌 M29家族氨基肽酶酶学特性金属离子

饲养模式对肉鸡盲肠菌群、短链脂肪酸、单胺类物质含量及其代谢的影响

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中国畜牧杂志 2023年第1期59卷 302-309页

作者：王亚玲孟双双陈肇铭颜菲菲赵阿勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江杭州311300 浙江农林大学动物福利研究所浙江杭州311300

本试验旨在探究饲养模式对肉鸡盲肠菌群、短链脂肪酸含量、下丘脑单胺类物质及其相关基因表达量的影响。试验饲喂200只7日龄健康817肉鸡,随机分为笼养组和地养组,每组10个重复,每个重复10只鸡。笼养组饲喂于笼养肉鸡笼中,饲养密度为20.4... 详细信息

本试验旨在探究饲养模式对肉鸡盲肠菌群、短链脂肪酸含量、下丘脑单胺类物质及其相关基因表达量的影响。试验饲喂200只7日龄健康817肉鸡,随机分为笼养组和地养组,每组10个重复,每个重复10只鸡。笼养组饲喂于笼养肉鸡笼中,饲养密度为20.4只/m^(2),地养组饲喂于铺设5~8 cm稻壳作为垫料的地面,饲养密度为10只/m^(2)。试验期42 d。于50日龄每组随机选取10只肉鸡进行采样并测定。结果显示:在门水平,2组肉鸡盲肠的优势菌群相同,地养组肉鸡盲肠变形菌门相对丰度高于笼养组(P<0.05);在属水平,阿利斯泰尔菌属为笼养组肉鸡的优势菌属,地养组的优势菌属则为瘤胃菌科的Ruminococcaceae UCG-014属,且相对丰度较笼养组增加(P<0.05),而Ruminiclostridium 5属的相对丰度则降低(P<0.05);2组肉鸡盲肠菌群的多样性和丰富度没有显著差异;与笼养组相比,地养组肉鸡盲肠内容物的丙酸含量增加(P<0.05),丁酸含量增加(P<0.01),乙酸无显著差异;2组肉鸡的下丘脑单胺类物质(包括5-羟色胺、多巴胺、肾上腺素和去甲肾上腺素)及相关代谢产物含量未发现显著差异,下丘脑5-羟色胺受体和中缝核5-羟色胺、5-羟色胺转运蛋白以及合成限速酶的基因表达量也没有显著差异;但地养组肉鸡下丘脑细胞因子IL-6和IL-10的mRNA表达量高于笼养组(P<0.05)。以上结果说明,饲养模式影响肉鸡盲肠菌群组成及其代谢产物短链脂肪酸含量,同时对下丘脑炎症相关细胞因子起到调节作用。

关键词：饲养模式肉鸡肠道菌群短链脂肪酸单胺类物质