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基于CaMK4介导的细胞骨架重排探讨解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr狼疮小鼠足细胞损伤的影响

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中华中医药杂志 2024年第5期39卷 2357-2362页

作者：宋子瑜李莹黄硕范永升田丰源浙江中医药大学附属第一医院杭州310018 浙江中医药大学杭州310053 浙江中医药大学附属第二医院杭州310005

目的:从CaMK4介导的足细胞细胞骨架重排探讨解毒祛瘀滋肾方治疗狼疮性肾炎(LN)足细胞损伤的作用机制。方法:将8只C57BL/6小鼠设为对照组,24只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型组、激素组、解毒祛瘀滋肾方组,每组8只。对照组和模型组灌胃蒸馏... 详细信息

目的:从CaMK4介导的足细胞细胞骨架重排探讨解毒祛瘀滋肾方治疗狼疮性肾炎(LN)足细胞损伤的作用机制。方法:将8只C57BL/6小鼠设为对照组,24只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型组、激素组、解毒祛瘀滋肾方组,每组8只。对照组和模型组灌胃蒸馏水,激素组灌胃强的松(5mg/kg)混悬液,解毒祛瘀滋肾方组灌胃解毒祛瘀滋肾方(36g/kg)水煎剂,连续干预8周。ELISA检测小鼠血清抗双链DNA抗体、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,全自动生化仪检测小鼠尿蛋白水平;HE染色观察肾脏病理改变;RT-PCR法检测肾脏Ssh1、Limk1、Cfl1 mRNA表达;免疫荧光染色法观察肾脏nephrin、synaptopodin、F-actin、G-actin、CaMK4表达。培养小鼠肾足细胞系(MPC-5),采用R848干预后,给予空白或解毒祛瘀滋肾方含药血清处理12 h,CCK-8法检测细胞活力;TUNEL法检测细胞凋亡,Fluo-4钙离子探针检测细胞内钙离子富集,免疫荧光染色法观察CaMK4表达。结果:体内实验中,与模型组比较,解毒祛瘀滋肾方组小鼠的血清抗双链DNA抗体、TNF-α和IL-6水平显著降低(P实验中,与空白组比较,R848诱导细胞凋亡增多,胞内钙离子大量富集(P<0.01),CaMK4表达增加;解毒祛瘀滋肾方含药血清干预可减少细胞凋亡,减少内钙离子富集(P<0.01),下调细胞CaMK4表达。结论:解毒祛瘀滋肾方可能通过调控CaMK4的足细胞细胞骨架重排,改善LN中肾脏足细胞损伤,缓解SLE病情。

关键词：解毒祛瘀滋肾方狼疮性肾炎足细胞细胞骨架钙离子信号

浙江省“互联网+中医护理服务”人才培养模式的构建与应用

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中华护理杂志 2024年第8期59卷 980-986页

作者：姚斌莲徐敏叶梦华陈晓洁叶富英汪永坚林娟英倪斐琳张晓兰浙江中医药大学附属第一医院(浙江省中医院)护理部杭州市310006 浙江中医药大学附属第一医院(浙江省中医院)副院长办公室杭州市310006 浙江中医药大学附属第一医院(浙江省中医院)血液内科杭州市310006 浙江中医药大学附属第一医院(浙江省中医院)乳腺外科杭州市310006 浙江中医药大学附属第一医院(浙江省中医院)神经内科杭州市310006

目的构建浙江省“互联网+中医护理服务”人才培养模式,并评价其应用效果。方法采用文献回顾结合专家会议法,构建浙江省“互联网+中医护理服务”人才培养模式。选取浙江省63所中医及中西医结合医院的63名护士,开展为期45 d的理论培训和9 ... 详细信息

目的构建浙江省“互联网+中医护理服务”人才培养模式,并评价其应用效果。方法采用文献回顾结合专家会议法,构建浙江省“互联网+中医护理服务”人才培养模式。选取浙江省63所中医及中西医结合医院的63名护士,开展为期45 d的理论培训和9 d的临床技能培训,培训后通过理论知识、中医护理技能、情景居家案例考核、学员满意度及实践成果对培养效果进行评价。结果构建的人才培养模式课程内容包括理论学习、技能培训和应急居家管理及相对应的考核方案。经过系统培训,63名护士均顺利通过考核,理论成绩为(92.24±3.64)分,技能考核成绩为(97.13±2.53)分,情景居家案例考核成绩为(95.78±3.02)分,考核“优秀”55名(87.30%),考核“良好”8名(12.70%),学员对该项目的整体模块设计满意度评分为(4.93±0.23)分,共开展415例次“互联网+中医护理服务”。结论浙江省“互联网+中医护理服务”人才培养模式适用性强,培训成效显著,可为其他地区“互联网+中医护理服务”的实施提供借鉴。

关键词：互联网+ 中医护理学人才培养护理教育

中风醒脑液通过抑制神经元铁死亡发挥抗脑出血损伤的作用机制研究

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中国中药杂志 2024年第17期49卷 4723-4733页

作者：李孟英郭建文邵翀羽泮智勇陈天杭周科峰周惠芬万海同浙江中医药大学第一附属医院浙江杭州310006 浙江中医药大学生命科学学院浙江杭州310053 浙江中医药大学基础医学院浙江杭州310053 全省中医心脑血管病重点实验室浙江杭州310053 广州中医药大学第二附属医院省部共建中医湿证国家重点实验室广东广州510120 广州中医药大学第二附属医院脑病中心广东广州510120

中风醒脑液在临床上已被用于治疗脑出血。然而,目前对中风醒脑液的药理作用尚不明确。探讨中风醒脑液的药理作用对指导脑血管疾病的治疗至关重要。向大鼠右侧尾状核注射Ⅶ型胶原酶建立体内脑出血模型。将SD大鼠随机分成5组,用Bederson... 详细信息

中风醒脑液在临床上已被用于治疗脑出血。然而,目前对中风醒脑液的药理作用尚不明确。探讨中风醒脑液的药理作用对指导脑血管疾病的治疗至关重要。向大鼠右侧尾状核注射Ⅶ型胶原酶建立体内脑出血模型。将SD大鼠随机分成5组,用Bederson评分法评估大鼠术后的神经功能缺损情况。核磁共振成像(MRI)用于评估脑出血的体积。苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织病理改变,透射电镜(TEM)观察脑组织超微结构变化。流式细胞术测定活性氧(ROS)水平。免疫荧光双染法检测脑组织血肿周围神经元中铁转运蛋白标记物谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达。Western blot法检测脑出血后RNA解旋酶和ATP酶1(UPF1)、铁泵蛋白(FPN)、酰基辅酶A连接酶4(ACSL4)、环氧化酶2(COX2)、GPX4、NADPH氧化酶1(NOX1)和胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白(SLC7A11)的表达。与模型组相比,中风醒脑液治疗5 d后大鼠神经功能障碍明显减轻,血肿体积减小,脑出血病理损伤减轻;与此同时,Fe^(2+)和氧化应激水平显著降低,抑制铁死亡的蛋白表达量显著增加。综上,中风醒脑液可通过显著抑制神经元铁死亡改善大鼠脑出血的预后,为中风醒脑液的临床应用提供了有价值的指导。中风醒脑液的抗铁死亡作用可能与促进膜转运蛋白SLC7A11和FPN的表达有关。

关键词：脑出血铁死亡中风醒脑液神经元死亡

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陈学奇应用清热化瘀法治疗痛经经验

中华中医药杂志 2024年第8期39卷 4140-4143页

作者：林淼慧严航林运霞陈学奇(指导) 浙江中医药大学第三临床医学院杭州310053 浙江中医药大学附属第三医院杭州310000 浙江中医药大学附属第二医院杭州310005

文章总结了陈学奇教授应用清热化瘀法治疗痛经的临证经验。陈学奇教授基于多年临床经验,从“热”的角度出发认识痛经,认为该病属本虚标实,以“气血不足、肾虚”为发病基础,“热”为关键病因,“瘀热互结”为主要病机。治疗时以扶正补虚... 详细信息

文章总结了陈学奇教授应用清热化瘀法治疗痛经的临证经验。陈学奇教授基于多年临床经验,从“热”的角度出发认识痛经,认为该病属本虚标实,以“气血不足、肾虚”为发病基础,“热”为关键病因,“瘀热互结”为主要病机。治疗时以扶正补虚、益气补血养肾为基础,善用“清热化瘀”大法通络止痛,并结合周期治疗,兼以调和气血、顾护脾胃,助患者气血调畅,通而不痛,疗效颇丰,改善了患者的生活质量,并为临床辨治痛经提供了新的思路。

关键词：痛经清热化瘀临证经验陈学奇中医药

何氏育麟方通过调控PI3K/Akt信号通路对卵巢储备功能下降大鼠颗粒细胞的影响

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中成药 2024年第7期46卷 2382-2389页

作者：王如烨章勤方晓红浙江中医药大学附属杭州市中医院浙江杭州310000

目的探讨何氏育麟方含药血清对卵巢储备功能减退(DOR)大鼠卵巢颗粒细胞线粒体功能及凋亡的影响。方法分离并培养DOR大鼠卵巢颗粒细胞,设置对照组1、模型组1[环磷酰胺(CTX)含药血清]、阳性组1(CTX含药血清+补佳乐含药血清)、育麟方组1(CT... 详细信息

目的探讨何氏育麟方含药血清对卵巢储备功能减退(DOR)大鼠卵巢颗粒细胞线粒体功能及凋亡的影响。方法分离并培养DOR大鼠卵巢颗粒细胞,设置对照组1、模型组1[环磷酰胺(CTX)含药血清]、阳性组1(CTX含药血清+补佳乐含药血清)、育麟方组1(CTX含药血清+育麟方含药血清)和对照组2(LY294002)、模型组2(LY294002+CTX含药血清)、阳性组2(LY294002+CTX含药血清+补佳乐含药血清)、育麟方组2(LY294002+CTX含药血清+育麟方含药血清)。应用流式细胞术、荧光探针、RT-qPCR、Westernblot技术分别检测细胞活力、细胞周期及凋亡率、线粒体膜电位,以及ATP水平,PI3K、AktmRNA表达,PI3K、p-Akt/Akt、PIP2、PIP3、CytC、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与模型组比较,育麟方组颗粒细胞活力及线粒体膜电位、ATP水平升高(P<0.01),凋亡率降低(P<0.01),PI3K、AktmRNA表达及p-Akt/Akt、PIP2、PIP3表达升高(P<0.05,P<0.01),同时伴随下游促凋亡蛋白CytC、Bax表达降低(P<0.05,P<0.01)及抑凋亡蛋白Bcl-2表达升高(P<0.01)。结论育麟方可能通过调控线粒体依赖性PI3K/Akt信号通路改善DOR大鼠卵巢颗粒细胞线粒体功能,抑制颗粒细胞凋亡。

关键词：何氏育麟方卵巢储备功能减退细胞凋亡线粒体 PI3K/Akt信号通路

丙型病毒性肝炎供者器官在实体器官移植中的应用现状与展望

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器官移植 2024年第3期15卷 390-397页

作者：秦旨文张武浙江中医药大学杭州310000 树兰(杭州)医院肝胆胰外科

丙型病毒性肝炎供者器官作为一种边缘性器官已经被应用于实体器官移植中,在有效缓解器官短缺现况的同时,也面临着一些挑战,如丙型肝炎病毒(HCV)传播。但随着直接抗病毒药物的出现和应用,丙型病毒性肝炎的治愈逐渐成为现实,这也为丙型病... 详细信息

丙型病毒性肝炎供者器官作为一种边缘性器官已经被应用于实体器官移植中,在有效缓解器官短缺现况的同时,也面临着一些挑战,如丙型肝炎病毒(HCV)传播。但随着直接抗病毒药物的出现和应用,丙型病毒性肝炎的治愈逐渐成为现实,这也为丙型病毒性肝炎患者成为器官移植供者奠定了基础。目前,在抗病毒药物的辅助治疗下,丙型病毒性肝炎供者实体器官移植取得了一定的疗效。因此,本文总结丙型病毒性肝炎供者肾脏、心脏、肺脏及肝脏等移植的研究现状,就丙型病毒性肝炎供者在实体器官移植中的应用情况及抗病毒药物辅助治疗的安全有效性做一综述,探究丙型病毒性肝炎供者在实体器官移植中可行性,以期为扩大器官移植供体池提供参考,减少终末期疾病患者器官移植的等待时间。

关键词：丙型病毒性肝炎丙型肝炎病毒边缘供者实体器官移植直接抗病毒药物持续病毒学应答病毒血症供者短缺

环抱锁定接骨板系统固定Vancouver B1型股骨假体周围骨折的生物力学实验研究

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中华创伤骨科杂志 2024年第6期26卷 533-537页

作者：储小兵金敏伟董睿浙江中医药大学附属第一医院(浙江省中医院)骨科杭州310006

目的:探讨自主研发的环抱锁定接骨板系统固定Vancouver B1型股骨假体周围骨折的生物力学性能。方法:取美国Sawbone公司生产的成人股骨假骨材料3根,其中3403型号2根、3447型号1根。模拟Vancouver B1型股骨假体周围骨折,然后应用自主研发... 详细信息

目的:探讨自主研发的环抱锁定接骨板系统固定Vancouver B1型股骨假体周围骨折的生物力学性能。方法:取美国Sawbone公司生产的成人股骨假骨材料3根,其中3403型号2根、3447型号1根。模拟Vancouver B1型股骨假体周围骨折,然后应用自主研发的环抱锁定接骨板系统固定。在力学实验机上,模拟人体直立状态下的力学负载状态,顺序进行压缩试验(加载力为50~500 N,位移控制加速度为5 mm/min)、压缩疲劳试验(加载条件为50~500 N正弦波力值,频率为5 Hz,循环加载250次)、扭转试验(1°/min~15°/min的扭角加速度顺时针转动加载扭矩)及扭转破坏试验等。结果:压缩试验结果显示:样本1、样本2及样本3的位移分别为0.83、0.45、0.41 mm,所有样本的环抱锁定接骨板系统无异常变化。压缩疲劳试验结果显示:样本1、样本2及样本3的位移分别为(0.70±0.05)、(0.44±0.01)、(0.42±0.02)mm,最大位移变化<0.13 mm,所有样本的环抱锁定接骨板系统无异常变化。扭转试验中4°内扭转结果:样本1、样本2及样本3的最大扭矩分别为4.73、7.82、7.37 N·m。扭转破坏试验中样本1在股骨远端接骨板的第一个螺钉处发生骨折断裂,极限扭矩为28.18 N·m;样本2抱钩开始滑动的扭矩为16.00 N·m,抱钩断裂内固定失效的极限扭矩为18.74 N·m;样本3抱钩开始滑动的扭矩为20.49 N·m,抱钩断裂内固定失效的极限扭矩为24.82 N·m。结论:自主研发的Vancouver B1型股骨假体周围骨折环抱锁定接骨板系统在仿真Sawbone假骨模型模拟人体直立负重的力学测试中达到了所需的力学强度。

关键词：股骨骨折内固定器生物力学假体周围骨折环抱锁定接骨板

运脾解毒通络祛湿方靶向IRE1α/XBP1/PDK1抑制CD4^(+)T细胞中枢迁移改善CIA小鼠中枢敏化的机制研究

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中华中医药杂志 2024年第5期39卷 2166-2173页

作者：姜月蓬马晓郑孟佳赵小萱于捷金艳温成平浙江中医药大学基础医学院中医临床基础研究所杭州310053 浙江中医药大学附属杭州市中医院杭州310007 浙江中医药大学附属第二医院杭州310005

目的:探究运脾解毒通络祛湿方通过靶向肌醇需要酶1α(IRE1α)/X-box结合蛋白1(XBP1)/丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)抑制CD4^(+)T细胞中枢迁移改善胶原诱导关节炎(CIA)小鼠中枢敏化的疗效机制。方法:32只雄性DBA/1小鼠经适应性喂养后随机分为4... 详细信息

目的:探究运脾解毒通络祛湿方通过靶向肌醇需要酶1α(IRE1α)/X-box结合蛋白1(XBP1)/丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)抑制CD4^(+)T细胞中枢迁移改善胶原诱导关节炎(CIA)小鼠中枢敏化的疗效机制。方法:32只雄性DBA/1小鼠经适应性喂养后随机分为4组:空白组、CIA组、中药组、西药组,每组8只。向小鼠尾部2次注射胶原佐剂以构建CIA模型。初次免疫后,各药物组连续42 d接受相应药物治疗。自初次免疫后28 d起每周观察并记录各组小鼠痛阈及关节炎症评分情况。干预结束后分离与收集外周血、脊髓组织。此外,利用磁珠分选术收集空白组、CIA组及中药组脾脏CD4^(+)T细胞,并且将空白组随机分为:空白组与IRE1α激动剂组,其中IRE1α激动剂组予以毒胡萝卜素(Thapsigargin)1μmol/L处理24 h。采用ELISA法检测各组小鼠血清白细胞介素(IL)1β、IL-6的含量;免疫荧光检测各组小鼠脊髓背角CD4、cFos、IBA1及IRE1α/XBP1/PDK1通路相关蛋白荧光强度;乳酸试剂盒检测各组脊髓背角组织乳酸含量;此外,应用免疫荧光检测各组CD4^(+)T细胞IRE1α/XBP1/PDK1通路相关蛋白荧光强度,乳酸试剂盒检测各组CD4^(+)T细胞乳酸含量,Transwell实验观察各组CD4^(+)T细胞迁移能力。结果:与CIA组比较,中药组小鼠机械痛阈与热痛阈均显著升高(P实验表明:与空白组比较,CIA组、IRE1α激动剂组CD4^(+)T细胞IRE1α、XBP1、PDK1表达水平显著增加(P<0.01,P<0.05),乳酸浓度显著升高(P<0.01,P<0.05),CD4^(+)T细胞迁移能力显著增强(P<0.05)。与CIA组比较,中药组IRE1α、XBP1、PDK1表达水平显著下降(P<0.01,P<0.05),细胞乳酸浓度显著下降(P<0.05),CD4^(+)T细胞迁移能力显著减弱(P<0.05)。结论:运脾解毒通络祛湿方可通过靶向IRE1α/XBP1/PDK1,抑制CD4^(+)T细胞向糖酵解重编程,减少CD4^(+)T细胞中枢迁移,从而改善CIA小鼠中枢敏化。

关键词：类风湿关节炎中枢敏化 CD4^(+)T细胞中枢迁移内质网应激运脾解毒通络祛湿方

不明原因复发性流产着床窗口期子宫内膜细胞衰老的分子机制及补肾活血法的干预作用

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中国实验方剂学杂志 2024年第19期30卷 106-115页

作者：赵小萱马景丁心逸赵宏利浙江中医药大学附属杭州市中医院杭州310007 浙江中医药大学第三临床医学院杭州310053

目的:该研究旨在通过生物信息学、机器学习及动物实验的整合研究策略探究不明原因复发性流产(URSA)着床窗口期(WOI)子宫内膜细胞衰老的分子机制及补肾活血法的干预作用。方法:通过基因表达综合(GEO)数据库平台获取包含健康育龄妇女及URS... 详细信息

目的:该研究旨在通过生物信息学、机器学习及动物实验的整合研究策略探究不明原因复发性流产(URSA)着床窗口期(WOI)子宫内膜细胞衰老的分子机制及补肾活血法的干预作用。方法:通过基因表达综合(GEO)数据库平台获取包含健康育龄妇女及URSA患者着床窗口期子宫内膜的微阵列基因集。利用R语言的“limma”包筛选URSA差异表达基因(DEGs)。利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)获取与URSA最相关模块基因,并进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。通过人类基因数据库(GeneCards)与在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库获取细胞衰老相关基因集。利用韦恩图在线制图软件筛选“URSA DEGs、最相关模块基因与细胞衰老相关基因”的交集基因。而后利用检索相互作用基因/蛋白质的搜索工具(STRING)对交集基因进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析,并通过Cytohubba筛选关键基因。此外,通过最小绝对值选择与收缩算子(LASSO)回归与随机森林算法筛选URSA细胞衰老诊断基因。最后,构建URSA小鼠模型,并随机分为模型组,补肾活血组及阿司匹林组,每组6只;另取6只正常妊娠小鼠作为空白组。补肾活血组给予寿胎丸合当归散配方颗粒药液(12.35 g·kg^(-1))灌胃,阿司匹林组以阿司匹林肠溶片(0.011 mL·g^(-1))灌胃。空白组、模型组给予等量蒸馏水灌胃。于发现阴道栓的第1天记为妊娠第1天(GD1)开始,连续每日给药,于GD5给药12 h后处死,收集子宫内膜组织样本。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和免疫荧光检测细胞衰老相关诊断基因在URSA小鼠着床窗口期子宫内膜组织的表达及补肾活血法的干预作用。结果:纳入GSE165004微阵列基因集进行生物信息学分析。根据R语言的“limma”包筛选出URSA DEGs 585个(P实验证实,与空白组比较,模型组GSN的mRNA水平和荧光强度明显升高(P<0.05),CCND2、RBBP8和LPAR1的mRNA和荧光强度明显减低(P<0.05)。与模型组比较,补肾活血组GSN表达水平明显下降(P<0.05),CCND2、LPAR1和RBBP8的表达水平明显上升(P<0.05)。结论:URSA着床窗口期子宫内膜细胞衰老与多个基因的调节相关,补肾活血法可作用于多个细胞衰老相关靶点,这可能是其改善URSA子宫内膜容受性的关键机制。

关键词：不明原因复发性流产着床窗口期细胞衰老补肾活血法机器学习