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羊肠道病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

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中国动物传染病学报 2024年

作者：王勤欧云文何博刘俐君达州职业技术学院开江县动物疫病预防控制中心达州市动物疫病预防控制中心

为了建立一种快速的羊肠道病毒（CEV）抗体间接ELISA检测方法，试验采用原核表达系统对VP1蛋白进行体外表达，利用纯化后的重组蛋白建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示：VP1蛋白以包涵体形式表达，Western blot检测表明重组蛋白具有... 详细信息

为了建立一种快速的羊肠道病毒（CEV）抗体间接ELISA检测方法，试验采用原核表达系统对VP1蛋白进行体外表达，利用纯化后的重组蛋白建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示：VP1蛋白以包涵体形式表达，Western blot检测表明重组蛋白具有良好的反应活性，建立的间接ELISA方法检测BDV、BVDV、GPV、ORF、SPA阳性血清均为阴性，对CEV阳性血清的最低检出效价可达1︰25 600，与IFA方法的符合率为93.33%（28/30），检测四川地区816份羊血清样品的CEV阳性感染率达7.72%（63/816）。表明建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性、准确性和临床适用性，可用于CEV临床抗体检测及流行病学调查。

关键词：羊肠道病毒 VP1蛋白原核表达间接ELISA 抗体检测

沙门菌感染IPEC-J2细胞前后上清液外泌体鉴定及其m6A相关蛋白表达和转录组分析

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中国畜牧兽医 2024年第11期 5086-5096页

作者：张新国淮安市淮阴区动物疫病预防控制中心

【目的】探究外泌体在沙门菌感染猪小肠上皮细胞（IPEC-J2细胞）过程中的作用及分子调控机制。【方法】利用间接免疫荧光试验观察沙门菌感染前后IPEC-J2细胞中沙门菌抗体分布水平，用超速离心法提取沙门菌感染IPEC-J2细胞上清液中的外... 详细信息

【目的】探究外泌体在沙门菌感染猪小肠上皮细胞（IPEC-J2细胞）过程中的作用及分子调控机制。【方法】利用间接免疫荧光试验观察沙门菌感染前后IPEC-J2细胞中沙门菌抗体分布水平，用超速离心法提取沙门菌感染IPEC-J2细胞上清液中的外泌体，并通过透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析测定外泌体粒径、Western blotting检测外泌体标记蛋白分子（CD9、CD63、CD81、TSG101）进行外泌体鉴定；利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测N6-甲基腺嘌呤（m6A）相关蛋白表达，同时结合转录组测序筛选上清液外泌体差异表达基因。【结果】间接免疫荧光试验结果显示，感染组IPEC-J2细胞中可观察到大量沙门菌分布，表明沙门菌可感染IPEC-J2细胞；透射电镜和外泌体粒径分析结果显示，IPEC-J2细胞分泌的外泌体为双层膜的囊泡，直径为30～150 nm; Western blotting结果显示，C-J2细胞分泌的外泌体存在CD9、CD63、CD81和TSG101特异性标记蛋白。沙门菌感染后外泌体中m6A修饰相关基因表达检测发现，ALKBH5、YTHDC2及YTHDF1基因的mRNA和蛋白表达均显著或极显著上调（P<0.05;P<0.01）。转录组测序结果显示，沙门菌感染IPEC-J2细胞前后外泌体中存在1 524个差异表达基因，包括842个下调基因和682个上调基因。GO功能富集分析表明，沙门菌感染主要影响免疫系统过程、细胞连接和酶调节剂活性等生物过程；KEGG通路富集分析表明，其与IgA生产的肠道免疫网络、T细胞受体信号通路和Toll样受体信号通路等密切相关。【结论】本研究成功分离和鉴定了沙门菌感染IPEC-J2细胞上清液中的外泌体，并且表明外泌体中m6A修饰可介导免疫信号通路来调控沙门菌感染宿主细胞，该研究可为今后深入探究外泌体对猪肠道沙门菌感染的分子机制提供理论参考。

关键词：猪沙门菌外泌体小肠上皮细胞转录组

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日粮中添加复合益生菌对西门塔尔犊牛生长性能、血清指标及瘤胃发酵性能的影响

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中国饲料 2024年第13期 76-79页

作者：陈敏艳安加俊贾培龙陕西省动物疫病预防控制中心陕西西安710016 咸阳市动物疫病预防控制中心陕西咸阳713899

为研究日粮中添加复合益生菌对西门塔尔犊牛生长性能、血清指标及瘤胃发酵性能的影响,试验选取体重相近、70日龄的健康西门塔尔牛犊牛共18头,随机分为对照组、试验I组、试验II组。试验I组和II组分别在基础日粮基础上,额外添加1.5 g和3 ... 详细信息

为研究日粮中添加复合益生菌对西门塔尔犊牛生长性能、血清指标及瘤胃发酵性能的影响,试验选取体重相近、70日龄的健康西门塔尔牛犊牛共18头,随机分为对照组、试验I组、试验II组。试验I组和II组分别在基础日粮基础上,额外添加1.5 g和3 g益生菌,试验60 d。结果表明:(1)试验II组犊牛平均日增重较对照组提高了18.31%(P 0.05)。(2)血液生化指标中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、胆固醇和甘油三酯各组之间差异不显著(P> 0.05);试验II组Ig G和IL-6等免疫指标较对照组分别提高了26.08%和20.17%(P 0.05)。(3)试验II组瘤胃氨态氮和丁酸含量较对照组分别提高了49.85%和45.17%,乙酸含量降低了34.24%(P 0.05)。以上结果表明,犊牛日粮中添加复合益生菌能够促进犊牛的生长性能,提高免疫功能和瘤胃发酵功能。本试验中,以添加3 g/(头·d)的复合益生菌较适宜。

关键词：犊牛复合益生菌生长性能免疫瘤胃发酵

2010—2021年甘肃省山羊传染性胸膜肺炎流行病学调查分析

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中国兽医杂志 2024年第9期60卷 47-55页

作者：康新华韩庆彦毋艳萍柴刚王亮甘肃省动物疫病预防控制中心甘肃兰州730046 兰州市城关区动物疫病预防控制中心甘肃兰州730031

为了解甘肃省山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)的流行情况,本试验采用流行病学调查方法对全省2010—2021年羊群CCPP的发病情况进行了调查,并从地区、物种、季节、性别、年龄、养殖规模、疫点类型和是否采取治疗措施方面对数据进行了统计分析。... 详细信息

为了解甘肃省山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)的流行情况,本试验采用流行病学调查方法对全省2010—2021年羊群CCPP的发病情况进行了调查,并从地区、物种、季节、性别、年龄、养殖规模、疫点类型和是否采取治疗措施方面对数据进行了统计分析。调查结果显示,2010—2021年全省CCPP平均发病率为8.15%(11 077/135 860),病死率为29.49%(3 267/11 077),CCPP发病率与物种、季节、年龄和是否采取治疗措施有关。山羊CCPP发病率(9.79%,9 038/92 306)极显著高于绵羊(4.68%,2 039/43 554)(P0.05),CCPP的发病也无明显地域性。结果表明,CCPP在甘肃省普遍流行,山羊比绵羊更易感,在年龄较大、寒冷季节和缺乏治疗的情况下发病率增加。因此,养殖场户应当针对风险因素制定预防策略,并通过采取定期调查监测、预防接种和治疗等措施,降低CCPP在甘肃省的发病率。

关键词：山羊传染性胸膜肺炎(CCPP) 流行病学调查分析甘肃省

2020—2022年全球H5亚型高致病性禽流感疫情简况及分析

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中国兽医杂志 2024年第7期60卷 34-40页

作者：王慧强张跃程敏姮殷雨晴郑雪莹李志军北京市动物疫病预防控制中心北京大兴102629

为了解近年全球H5亚型高致病性禽流感(HPAI)疫情具体情况,本文通过对农业农村部畜牧兽医局发布的“一周国际动物疫情动态”和“疫情发布”中的HPAI疫情信息进行统计和分析,对2020—2022年全球H5亚型HPAI疫情的发生和流行情况,空间、时... 详细信息

为了解近年全球H5亚型高致病性禽流感(HPAI)疫情具体情况,本文通过对农业农村部畜牧兽医局发布的“一周国际动物疫情动态”和“疫情发布”中的HPAI疫情信息进行统计和分析,对2020—2022年全球H5亚型HPAI疫情的发生和流行情况,空间、时间和群间分布,以及给养禽业造成的危害进行较为全面的了解。结果显示,2020年全球H5亚型HPAI疫情以H5N8亚型为主;自2021年5月份,呈现H5N1亚型疫情逐渐增多、H5N8亚型疫情逐渐减少的趋势,至11月份,形成以H5N1亚型疫情为主、H5N8亚型疫情零星发生的局面。H5N1亚型HPAI疫情逐渐演变为全球大流行,在欧洲形成“重灾区”,非洲和亚洲疫情也较为严重。2022年存在2次明显的H5亚型HPAI跨洲际传播,分别是2月份从欧洲传播到北美洲和10月份从北美洲传播到南美洲,经分析认为这2次跨洲际传播与候鸟迁徙有密切联系。结果表明,本轮H5N1亚型HPAI疫情全球大流行持续时间长、传播范围广,给世界养禽业造成巨大危害和深远影响。

关键词：全球 H5亚型高致病性禽流感疫情分析

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猫继发性青光眼的诊治

动物医学进展 2024年第2期45卷 142-144页

作者：张维虎廊坊市动物疫病预防控制中心河北廊坊065000

青光眼是小动物临床眼科常见疾病,病因可分为原发性与继发性。在猫科动物中原发性较罕见,临床上更常见的是继发性青光眼,多与眼内炎症有关。现将1例猫继发性青光眼的诊治方法报道,以期为猫青光眼临床诊断和治疗提供参考。

关键词：猫继发性青光眼诊断治疗

蓝舌病病毒感染对绵羊微血管内皮细胞中Ⅰ型干扰素应答的影响

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畜牧兽医学报 2024年

作者：罗世美陈韵伊李其沙周艳梅胡雪柔李铭悦魏子昱李芳马鲜平易华山西南大学动物医学院重庆市大足区动物疫病预防控制中心

蓝舌病病毒（bluetonguevirus，BTV）是一种严重危害绵羊等反刍动物的虫媒病毒，而绵羊微血管内皮细胞（sheeplungmicrovascularendothelialcells，SLMECs）构成肺半选择性屏障，为研究BTV感染与SLMECs干扰素抗病毒免疫应答的分子机制... 详细信息

蓝舌病病毒（bluetonguevirus，BTV）是一种严重危害绵羊等反刍动物的虫媒病毒，而绵羊微血管内皮细胞（sheeplungmicrovascularendothelialcells，SLMECs）构成肺半选择性屏障，为研究BTV感染与SLMECs干扰素抗病毒免疫应答的分子机制。本研究通过BTV噬斑实验以感染复数（MOI）为1的BTV诱导18、24、36h的SLMECs，通过实时荧光定量PCR分析干扰素相关通路基因mRNA表达特征，以及Westernblot分析MDA5、TRAF3、RIG-I和TBK1蛋白表达。结果表明，在诱导36h时，干扰素信号通路基因mRNA表达的变化最明显，RIG-I、MDA5、IKKε、IFN-β、TBK1和TRAF6基因mRNA上调表达，差异极显著；而IFN-α、VISA、USP18基因mRNA下调表达，差异极显著；在蛋白水平上MDA5、TBK1、RIG-I和TRAF3蛋白都上调表达。本研究发现BTV可感染SLMECs诱导Ι型干扰素免疫应答，为进一步分析IFN-I信号通路的激活在抗BTV感染天然免疫应答中的作用机制研究奠定基础。

关键词：蓝舌病病毒 I型干扰素绵羊肺微血管内皮细胞

重组猪α干扰素/白细胞介素-2的可溶性表达及体外活性研究

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农业生物技术学报 2024年第3期32卷 595-604页

作者：冯桂丹闫若潜马震原柴茂周建浩康台生王淑娟杨海波刘影谢彩华赵雪丽王翠河南农业大学动物医学院上海市动物疫病预防控制中心河南省动物疫病预防控制中心河南省重大动物疫病监测预警与防控重点实验室河南科技大学动物科技学院

猪(Sus scrofa) α干扰素/白细胞介素-2 (porcine interferon α/porcine interleukin-2,PoIFN-α-linkerPoIL-2)在大肠杆菌(Escherichia coli)中多以包涵体形式表达，为在大肠杆菌系统中获得可溶性表达的具有活性的重组猪α干扰素/白介素2 (rPoIFN-α-linker-PoIL-2)蛋白，本研究根据大肠杆菌密码子偏好性对PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因进行可溶性改造并合成。将改造后的PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因克隆到表达载体p ET-32a(+)进行原核表达，采用镍铬亲和层析柱对表达的可溶性rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白进行纯化。分别采用淋巴细胞增殖检测法、ELISA方法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白体外促猪外周血T淋巴细胞(peripheral blood T lymphocyte,PBLC)增殖活性，及其与抗猪白介素2单抗、抗猪α干扰素单抗发生特异性免疫反应的活性；采用细胞病变抑制法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在不同细胞系上抑制不同病毒的增殖活性。结果显示，PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因可在大肠杆菌中高效可溶性表达，表达的rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白分子量大小约55 k D。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白经镍铬亲和层析柱纯化后纯度达90%以上。rPoIFN-α-linker-PoIL-2具有显著的促PBLC增殖活性(P<0.05)；可以与抗PoIL-2、PoIFN-α单抗发生特异性免疫反应。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在不同细胞上抑制不同病毒的增殖活性效价有差异，在猪肾细胞(porcine kidney cells,PK)-15、人羊膜细胞(human amniotic cells) WISH上抑制水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)增殖的活性单位分别为1.8×106和2.5×106IU/mg；在PK-15细胞上抑制伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、塞内卡病毒(Seneca virus A,SVA)增殖的活性单位分别为2.2×104、1.3×105IU/mg；在非洲绿猴肾细胞(Verda Reno,Vero)上抑制猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)增殖的活性单位为3.2×104IU/mg。本研究获得了可溶性表达的rPoIFN-α-linkerPoIL-2蛋白，该蛋白在不同细胞上具有抑制VSV、PRV、SVA及PEDV等病毒增殖的活性，为进一步研究rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在猪体内的活性提供了基础资料。

关键词：猪α干扰素猪白细胞介素-2 嵌合基因可溶性表达体外活性

免疫代谢物衣康酸对不同疾病调控作用及其作用机制研究进展

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生物工程学报 2024年

作者：程钟坤赵静贤刘言言徐凌赵光伟倪兴维杨晓伟西南大学动物医学院贵州省动物疫病预防控制中心

衣康酸(itaconate)是免疫细胞三羧酸(tricarboxylic acid， TCA)循环的一种重要中间代谢物，由免疫应答基因1(immune response gene 1， IRG1)编码的乌头酸脱羧酶1(aconitate decarboxylase1， ACOD1)催化顺乌头酸脱羧产生。2011年，研究人员发现在LPS刺激小鼠巨噬细胞中衣康酸显著升高。此后作为新发现的代谢物，衣康酸成为免疫代谢学的研究热点。研究发现衣康酸通过调控炎症、重塑细胞代谢和参与遗传调控等方式在不同疾病中发挥重要调控作用。本文将从衣康酸的结构、对不同疾病调控作用及其作用机制这3个方面，综述衣康酸的研究进展。

关键词：衣康酸免疫代谢物炎症细胞代谢遗传调控