重组猪α干扰素/白细胞介素-2的可溶性表达及体外活性研究

作     者：冯桂丹 闫若潜 马震原 柴茂 周建浩 康台生 王淑娟 杨海波 刘影 谢彩华 赵雪丽 王翠 FENG Gui-Dan;YAN Ruo-Qian;MA Zhen-Yuan;CHAI Mao;ZHOU Jian-Hao;KANG Tai-Sheng;WANG Shu-Juan;YANG Hai-Bo;LIU Ying;XIE Cai-Hua;ZHAO Xue-Li;WANG Cui

作者机构：河南农业大学动物医学院 上海市动物疫病预防控制中心 河南省动物疫病预防控制中心 河南省重大动物疫病监测预警与防控重点实验室 河南科技大学动物科技学院 

出 版 物：《农业生物技术学报》 (Journal of Agricultural Biotechnology)

年 卷 期：2024年第32卷第3期

页      面：595-604页

核心收录：

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：河南省重点研发专项(231111111300) 河南省重大科技专项(221100110600) 河南省现代农业产业技术体系(HARS-22-12-T) 河南省科技攻关项目(232102110089) 

主　　题：猪α干扰素 猪白细胞介素-2 嵌合基因 可溶性表达 体外活性 

摘      要：猪(Sus scrofa) α干扰素/白细胞介素-2 (porcine interferon α/porcine interleukin-2,PoIFN-α-linkerPoIL-2)在大肠杆菌(Escherichia coli)中多以包涵体形式表达，为在大肠杆菌系统中获得可溶性表达的具有活性的重组猪α干扰素/白介素2 (rPoIFN-α-linker-PoIL-2)蛋白，本研究根据大肠杆菌密码子偏好性对PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因进行可溶性改造并合成。将改造后的PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因克隆到表达载体p ET-32a(+)进行原核表达，采用镍铬亲和层析柱对表达的可溶性rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白进行纯化。分别采用淋巴细胞增殖检测法、ELISA方法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白体外促猪外周血T淋巴细胞(peripheral blood T lymphocyte,PBLC)增殖活性，及其与抗猪白介素2单抗、抗猪α干扰素单抗发生特异性免疫反应的活性；采用细胞病变抑制法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在不同细胞系上抑制不同病毒的增殖活性。结果显示，PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因可在大肠杆菌中高效可溶性表达，表达的rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白分子量大小约55 k D。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白经镍铬亲和层析柱纯化后纯度达90%以上。rPoIFN-α-linker-PoIL-2具有显著的促PBLC增殖活性(P0.05)；可以与抗PoIL-2、PoIFN-α单抗发生特异性免疫反应。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在不同细胞上抑制不同病毒的增殖活性效价有差异，在猪肾细胞(porcine kidney cells,PK)-15、人羊膜细胞(human amniotic cells) WISH上抑制水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)增殖的活性单位分别为1.8×106和2.5×106IU/mg；在PK-15细胞上抑制伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、塞内卡病毒(Seneca virus A,SVA)增殖的活性单位分别为2.2×104、1.3×105IU/mg；在非洲绿猴肾细胞(Verda Reno,Vero)上抑制猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)增殖的活性单位为3.2×104IU/mg。本研究获得了可溶性表达的rPoIFN-α-linkerPoIL-2蛋白，该蛋白在不同细胞上具有抑制VSV、PRV、SVA及PEDV等病毒增殖的活性，为进一步研究rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在猪体内的活性提供了基础资料。