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细胞增殖抑制基因HSG/Mfn2

细胞生物学杂志 2007年第1期29卷 17-21页

作者：董丽华韩梅温进坤河北医科大学基础医学研究所河北省医学生物技术重点实验室石家庄050017

细胞增殖抑制基因(HSG,又称线粒体融合蛋白-2,Mfn2)是我国学者陈光慧利用差异显示技术得到的一个新基因,其编码产物HSG/Mfn2可通过抑制ERK/MAPK信号转导途径使细胞周期停滞在G0/G1期,抑制细胞增殖;还可与平滑肌α肌动蛋白相互作用参与... 详细信息

细胞增殖抑制基因(HSG,又称线粒体融合蛋白-2,Mfn2)是我国学者陈光慧利用差异显示技术得到的一个新基因,其编码产物HSG/Mfn2可通过抑制ERK/MAPK信号转导途径使细胞周期停滞在G0/G1期,抑制细胞增殖;还可与平滑肌α肌动蛋白相互作用参与血管平滑肌细胞再分化,在血管平滑肌细胞表型调节中起重要作用。另外,HSG/Mfn2具有促进线粒体融合的功能,与线粒体形态、结构和功能有着密切关系。HSG/Mfn2对血管增殖紊乱和其他过度增殖性疾病的发病及治疗具有重要的意义。

关键词： HSG/Mfn2 细胞表型线粒体融合

Calponin蛋白家族在细胞骨架重构中的作用

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细胞生物学杂志 2007年第3期29卷 321-324页

作者：董丽华韩梅温进坤河北医科大学基础医学研究所河北省医学生物技术重点实验室石家庄050017

Calponin蛋白家族包括calponin(CaP)和平滑肌(SM)22α,此家族的重要结构特征是由单一CH结构域和CLR结构域组成。CaP和SM22α属于肌动蛋白细胞骨架结合蛋白,可通过与F-肌动蛋白相互作用来调节肌动蛋白细胞骨架重构,影响细胞的生物学行为... 详细信息

Calponin蛋白家族包括calponin(CaP)和平滑肌(SM)22α,此家族的重要结构特征是由单一CH结构域和CLR结构域组成。CaP和SM22α属于肌动蛋白细胞骨架结合蛋白,可通过与F-肌动蛋白相互作用来调节肌动蛋白细胞骨架重构,影响细胞的生物学行为,进而影响相关疾病的发生与发展。

关键词： calponin蛋白家族细胞骨架肌动蛋白 calponin 平滑肌22α

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半干式蛋白质电泳印迹的影响因素及条件优化

细胞生物学杂志 2007年第2期29卷 299-302页

作者：刘彬韩梅温进坤河北医科大学基础医学研究所河北省医学生物技术重点实验室石家庄050017

采用蛋白质分子量标准物和纯化的重组蛋白质进行半干式蛋白质印迹,探讨半干式电泳印迹的多种因素对印迹效果的影响。结果表明:在不同电转移条件下,均存在不同程度的蛋白质透膜转移现象,当电流强度恒定时,电转移时间过长和上样量过大是... 详细信息

采用蛋白质分子量标准物和纯化的重组蛋白质进行半干式蛋白质印迹,探讨半干式电泳印迹的多种因素对印迹效果的影响。结果表明:在不同电转移条件下,均存在不同程度的蛋白质透膜转移现象,当电流强度恒定时,电转移时间过长和上样量过大是造成实验中透膜转移而丢失的主要原因,可根据待测蛋白质的分子量和表达丰度确定恰当的电转移时间和上样量。

关键词：半干式电转移蛋白质免疫印迹

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中国老年学杂志 2004年第10期24卷 923-926页

作者：姜广建温进坤韩梅潘磊黄秀英河北医科大学基础医学研究所河北省医学生物技术重点实验室河北石家庄050017 中国科学院遗传与发育研究所

目的　研究hrg 1对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的抑制作用是否与调节细胞周期调节蛋白 (cyclin)表达活性有关。方法　采用pcD2 hrg 1真核表达质粒转染体外培养的VSMCs,Westernblot、MTT法、流式细胞术观察该基因过表达对细胞周期蛋白E(... 详细信息

目的　研究hrg 1对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的抑制作用是否与调节细胞周期调节蛋白 (cyclin)表达活性有关。方法　采用pcD2 hrg 1真核表达质粒转染体外培养的VSMCs,Westernblot、MTT法、流式细胞术观察该基因过表达对细胞周期蛋白E(cyclinE)、P2 7表达及细胞增殖和细胞周期的影响。结果　转染pcD2 hrg 1后 ,与对照组细胞相比 ,G1期细胞比例上升 ,S期细胞比例下降 ,细胞生长速率明显减慢 ;而转染hrg 1反义RNA表达载体的细胞生长速率明显加快。转染hrg 1 2 4h后cyclinE表达开始降低 ,之后呈持续下降趋势 ;至 72h ,其表达量约为对照组的 1 /2。P2 7的表达则呈上升趋势 ,转染hrg 1 2 4h后 ,其表达活性显著增加 (为对照组的 2 6倍 ) ;转染后 48h达高峰 ,为对照组的 3 3倍 ;在转染后72h仍维持在较高水平。结论　hrg 1通过上调P2

关键词：转染表达活性对照组 VSMC 血管平滑肌细胞细胞增殖 cD2 表达载体表达量细胞生长

骨桥蛋白RGD黏附序列多拷贝短肽的表达、纯化及生物学活性测定

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中国应用生理学杂志 2008年第3期24卷 324-328页

作者：吴红玉温进坤韩梅河北医科大学生物化学与分子生物学研究室河北省医学生物技术重点实验室河北石家庄050017

目的:用大肠杆菌表达骨桥蛋白RGD黏附序列6拷贝短肽,经分离纯化后检测其生物学活性。方法:运用基因重组技术,将骨桥蛋白RGD黏附序列的核酸片段首尾相连,与携带GST编码序列的原核表达载体连接构建融合蛋白表达质粒pGEX-3X-RGD。将重组质... 详细信息

目的:用大肠杆菌表达骨桥蛋白RGD黏附序列6拷贝短肽,经分离纯化后检测其生物学活性。方法:运用基因重组技术,将骨桥蛋白RGD黏附序列的核酸片段首尾相连,与携带GST编码序列的原核表达载体连接构建融合蛋白表达质粒pGEX-3X-RGD。将重组质粒转化宿主菌后,对诱导融合蛋白表达的条件进行优化。表达产物GST-RGD经谷胱甘肽-亲和层析纯化后,分别检测其对骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞黏附和迁移的影响。结果:所构建的含有6个拷贝短肽的GST-RGD融合蛋白可在大肠杆菌中以包含体的形式进行表达。用十二烷基肌氨酸钠变性溶解包含体及透析复性后,经亲和层析可得到高纯度的GST-RGD(6)融合蛋白。GST-RGD(6)融合蛋白能特异性的抑制骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞的黏附和迁移。结论:骨桥蛋白RGD黏附序列6拷贝短肽可在大肠杆菌中高效表达,纯化的GST-RGD融合蛋白具有抑制血管平滑肌细胞黏附和迁移的活性。

关键词：骨桥蛋白 GST—RGD融合蛋白原核细胞袁达生物学活性

hhlim基因转录调控区域鉴定及表达调控的初步研究

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生物化学与生物物理进展 2002年第6期29卷 910-914页

作者：郑斌温进坤韩梅周爱儒河北医科大学基础医学研究所石家庄050017 河北医科大学基础医学研究所生物化学与分子生物学研究室北京大学医学部生物化学与分子生物学系北京100083

为了研究hhlim基因表达调控机制 ,对该基因 5′上游 - 2 5 37bp序列从 5′端依次进行缺失后 ,利用荧光素酶报告基因检测各种不同长度片段在C2C12细胞中驱动荧光素酶表达的活性 .结果表明 ,在hhlim基因 5′上游- 2 5 37～ - 15 37bp之间... 详细信息

为了研究hhlim基因表达调控机制 ,对该基因 5′上游 - 2 5 37bp序列从 5′端依次进行缺失后 ,利用荧光素酶报告基因检测各种不同长度片段在C2C12细胞中驱动荧光素酶表达的活性 .结果表明 ,在hhlim基因 5′上游- 2 5 37～ - 15 37bp之间存在负调控元件 ,在 - 2 5 3～ - 15 7bp之间含有增强子样序列 .用含有增强子样序列的DNA片段做探针 ,对未分化型和分化型C2C12细胞的核蛋白进行电泳迁移率改变分析 (electrophoreticmopilityshiftassay ,EMSA) .分析的结果显示 ,两种表型细胞中的核蛋白与探针结合所形成滞后带的谱型明显不同 .结果还发现内皮素 1(ET 1)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)既能显著诱导C2C12细胞对hhlim的表达 ,也能刺激含增强子样序列的调控区域所驱动的报告基因表达 .提示hhlim基因转录起始点至 - 2 5 37bp的区域内含有负调控元件及增强子样序列 ,该基因的表达受ET

关键词： hhlim基因转录调控区域鉴定表达调控调控序列成肌细胞

CCK-8与内源性阿片系统在吗啡依赖中的相互作用

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中国药理学通报 2010年第11期26卷 1445-1450页

作者：文迪马春玲丛斌于海磊于峰倪志宇李淑瑾河北医科大学基础医学院法医学系.河北省法医学重点实验室河北石家庄050017

目的通过观察不同剂量的CCK-8对吗啡依赖SH-SY5Y细胞模型内源性阿片系统的影响,初步探讨CCK-8与内源性阿片系统在吗啡依赖过程的相互作用及其机制。方法建立吗啡慢性依赖SH-SY5Y细胞模型,应用放射配基结合技术观察μ阿片受体(MOR)结合特... 详细信息

目的通过观察不同剂量的CCK-8对吗啡依赖SH-SY5Y细胞模型内源性阿片系统的影响,初步探讨CCK-8与内源性阿片系统在吗啡依赖过程的相互作用及其机制。方法建立吗啡慢性依赖SH-SY5Y细胞模型,应用放射配基结合技术观察μ阿片受体(MOR)结合特征,应用Real-Time PCR技术检测前脑啡肽原(PENK)、前阿黑皮质素原(POMC)基因的表达,并观察CCK-8对上述指标的影响。结果①10μmol·L-1吗啡作用于全反式维甲酸(RA)分化6d的SH-SY5Y细胞48h,成功建立了慢性吗啡依赖模型;②CCK-8可剂量依赖性地抑制MOR的结合,并且此抑制作用可被CCK1及CCK2受体拮抗剂(L-364,718,LY-288,513)翻转;③10-7、10-6mol·L-1CCK-8使PENK、POMC的表达较正常组分别增加(5.81±0.84)、(7.26±1.55)倍和(4.55±0.73)、(5.16±0.82)倍。吗啡依赖后,PENK、POMC表达较正常组下降(0.43±0.10)倍和(0.37±0.07)倍,10-8、10-7、10-6mol·L-1CCK-8使下调的PENK、POMC表达增加,PENK与正常组的相对表达值为(0.63±0.10)、(0.86±0.21)、(1.17±0.19),POMC与正常组的相对表达值为(0.46±0.10)、(0.60±0.11)、(0.96±0.11)。10-10、10-9mol·L-1CCK-8对PENK、POMC表达无影响。结论低剂量(10-10、10-9mol·L-1)CCK-8可通过激活CCK受体抑制MOR的结合力,对PENK、POMC的表达无影响;高剂量(10-8～10-6mol·L-1)的CCK-8可使PENK、POMC基因表达增加,促进内源性阿片肽的生成,并可改善吗啡依赖后内源性阿片系统的失衡。

关键词：吗啡依赖 SH-SY5Y细胞 CCK-8 μ阿片受体前脑啡肽原前阿黑皮质素原

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内皮素对豚鼠乳头肌电生理和收缩活动的影响

生理学报 1997年第2期49卷 146-152页

作者：张朝李玉龙何瑞荣河北医科大学基础医学研究所生理室石家庄050017

应用细胞内微电极和肌张力记录技术，观察了ET-1对豚鼠乳头肌细胞电生理和机械收缩活动的影响。结果表明：ET－1浓度依赖地明显延长PPD和APD90，增加心肌收缩张力；钾通道阻断剂TEA不影响ET-1的生物效应；而L型钙通道阻断剂硝苯吡啶、ET... 详细信息

应用细胞内微电极和肌张力记录技术，观察了ET-1对豚鼠乳头肌细胞电生理和机械收缩活动的影响。结果表明：ET－1浓度依赖地明显延长PPD和APD90，增加心肌收缩张力；钾通道阻断剂TEA不影响ET-1的生物效应；而L型钙通道阻断剂硝苯吡啶、ETA受体选择性拮抗剂BQ-123和APⅢ以浓度依赖的方式阻断ET-1的上述效应，提示ET-1对乳头肌的电生理和正性肌力效应是由ETA受体亚型介导的，与胞浆内Ca2+升高有关。

关键词：内皮素乳头肌电生理肌肉收缩

杂色曲霉素对小鼠穹隆下器官TNFα和TGFβ_2的mRNA表达的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2007年第2期21卷 134-136页

作者：郝庆卯张祥宏严霞邢凌霄王俊灵薛丽英申海涛刘惠民邢欣河北医科大学基础医学研究所病理研究室河北石家庄050017

目的观察杂色曲霉素(ST)损伤脑组织时有无肿瘤坏死因子(TNF)α和转化生长因子(TGF)β2的mRNA表达的改变。方法用BALB/c小鼠,***-1灌胃,分别于灌胃后0.5,1,2,4,8和16h处死动物,用原位杂交方法观察穹隆下器官(SFO)细胞TNFα mRNA和TGFβ2 ... 详细信息

目的观察杂色曲霉素(ST)损伤脑组织时有无肿瘤坏死因子(TNF)α和转化生长因子(TGF)β2的mRNA表达的改变。方法用BALB/c小鼠,***-1灌胃,分别于灌胃后0.5,1,2,4,8和16h处死动物,用原位杂交方法观察穹隆下器官(SFO)细胞TNFα mRNA和TGFβ2 mRNA的表达。结果TNFα mRNA和TGFβ2 mRNA阳性细胞广泛分布在SFO。ST处理组从0.5h开始TNFα mRNA阳性表达细胞数缓慢上升,4h达到顶点,之后缓慢下降;TGFβ2 mRNA阳性表达细胞数从0.5h缓慢持续上升,16h达到顶点。ST组各时间点TNFα mRNA和TGFβ2 mRNA阳性细胞数均明显高于对照组。结论TNFα和TGFβ2在ST对SFO细胞损伤和修复中可能起着重要的作用。

关键词：穹隆下器官杂色曲霉素肿瘤坏死因子转化生长因子