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伯氏疟原虫ANKA株感染小鼠的T细胞、NK细胞及细胞因子变化

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畜牧兽医学报 2022年第11期53卷 4008-4018页

作者：张义伟苏紫薇李其龙陈冉姜宁重要家畜疫病研究教育部重点实验室沈阳农业大学动物科学与医学学院沈阳110866

旨在系统分析伯氏疟原虫感染引起宿主T细胞、NK细胞、Tim-3表达及细胞因子的变化。选取64只雌性C57BL/6小鼠随机分为8组,每组8只,分别于感染后0、4、7、9、11、13、16和19 d获取小鼠脾及外周血免疫细胞,利用流式细胞术检测小鼠主要免疫... 详细信息

旨在系统分析伯氏疟原虫感染引起宿主T细胞、NK细胞、Tim-3表达及细胞因子的变化。选取64只雌性C57BL/6小鼠随机分为8组,每组8只,分别于感染后0、4、7、9、11、13、16和19 d获取小鼠脾及外周血免疫细胞,利用流式细胞术检测小鼠主要免疫细胞亚群及免疫检查点分子Tim-3表达水平的变化;同时检测血清中细胞因子的变化。结果表明,感染疟原虫后,小鼠脾CD3^(+)CD4^(+) T细胞、CD3^(+)CD8^(+) T细胞及NK细胞的比例均逐渐降低(P研究提示了从宿主免疫抑制角度研究疟原虫感染的重要性。

关键词：伯氏疟原虫 T细胞 NK细胞 Tim-3 细胞因子

1株黄曲霉颉颃菌的鉴定及其抑菌活性成分分析

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中国畜牧兽医 2022年第5期49卷 1828-1839页

作者：李天溪党萌龙淼沈阳农业大学动物科学与医学学院重要家畜疫病研究教育部重点实验室沈阳110161

【目的】筛选黄曲霉颉颃菌,探究其最佳培养条件及有效抗菌成分,为实际生产中应用生物防治方法抑制黄曲霉污染提供新的理论依据。【方法】通过平板对峙法及分子生物学鉴定方法对待测菌株进行筛选鉴定。以抑菌率作为衡量标准,判断所得黄... 详细信息

【目的】筛选黄曲霉颉颃菌,探究其最佳培养条件及有效抗菌成分,为实际生产中应用生物防治方法抑制黄曲霉污染提供新的理论依据。【方法】通过平板对峙法及分子生物学鉴定方法对待测菌株进行筛选鉴定。以抑菌率作为衡量标准,判断所得黄曲霉颉颃菌的最佳培养温度、培养时间、接种量、转速、pH及装液量。通过硫酸铵沉淀法从颉颃菌无菌发酵上清液中提取蛋白,观测粗提物对黄曲霉菌丝生长的影响。通过离子交换色谱和凝胶过滤色谱进一步纯化粗提蛋白,并进行质谱测序及序列对比分析,筛选鉴定颉颃菌产生的有效抑菌成分。【结果】筛选到1株解淀粉芽孢杆菌B10(菌种保藏号CCTCCNO:M2018353)。最佳培养条件为温度40℃,培养时间36 h,接种量3%,转速120 r/min,pH 6.0,装液量30 mL,最大抑菌率可达46.56%。其粗提蛋白能有效抑制黄曲霉生长,破坏菌丝正常形态,并从中筛选出几丁质结合蛋白、壳聚糖酶、葡聚糖酶等8种可能的有效抑菌成分。【结论】本试验分离鉴定出1株抑制黄曲霉正常生长发育的解淀粉芽孢杆菌B10,其产生的多种蛋白成分对黄曲霉有显著抑菌活性。

关键词：黄曲霉解淀粉芽孢杆菌筛选鉴定抑菌蛋白分离纯化

豆状囊尾蚴体外培养方法的建立及其分泌产物的分离鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第4期40卷 500-506页

作者：张少华刘婷丽骆学农王帅郭爱疆白雪陈国梁才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730046 吉林大学动物医学学院、人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室长春130062

目的建立豆状囊尾蚴体外长期培养方法,并对其培养分泌产物进行鉴定。方法将豆状带绦虫虫卵经口感染新西兰白兔(2000枚/只),感染后3个月,从感染兔腹腔中收集豆状囊尾蚴。将虫体随机分为PBS组、RPMI 1640组、胆汁组(RPMI 1640+10%兔胆汁)... 详细信息

目的建立豆状囊尾蚴体外长期培养方法,并对其培养分泌产物进行鉴定。方法将豆状带绦虫虫卵经口感染新西兰白兔(2000枚/只),感染后3个月,从感染兔腹腔中收集豆状囊尾蚴。将虫体随机分为PBS组、RPMI 1640组、胆汁组(RPMI 1640+10%兔胆汁)和血清组(RPMI 1640+10%无外泌体胎牛血清),10个/组,37℃、5%CO_(2)培养后5 min、1 h、2 h、12 h、24 h、36 h、48 h及其后每天进行观察,记录豆状囊尾蚴头节翻出情况、虫体活力、体外存活时间及形态改变等,筛选适宜的培养条件。取50个幼虫在细胞瓶(25 cm^(2))中按筛选出的培养条件培养,每隔48小时收集培养液离心浓缩,取上清,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测豆状带绦虫烯醇化酶(Tpeno)和Tp14-3-3蛋白的表达情况。收集豆状囊尾蚴培养上清,提取外泌体,分别与阴性兔血清、CD63抗体、抗Tpeno单克隆抗体1D7和抗Tp14-3-3多克隆抗体孵育45 min,再加入胶体金标记的IgG,透射电镜观察外泌体形态,免疫电镜检测其标记蛋白CD63、Tpeno和Tp14-3-3表达情况。采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析,组间比较采用单因素方差分析。结果培养前的豆状囊尾蚴呈椭圆形,有内凹的点状乳白色头节;PBS组可存活7 d;RPMI 1640组可存活2个月;胆汁组存活时间最短,仅48 h;血清组幼虫存活时间最长,可达3个月以上,高于其他3个组(P<0.05)。存活期内,PBS组、RPMI 1640组、胆汁组和血清组幼虫囊泡长度分别为(1.38±0.39)、(1.30±0.12)、(1.18±0.59)和(1.83±0.10)cm;宽度分别为(0.45±0.10)、(0.68±0.05)、(0.25±0.06)和(0.85±0.05)cm;血清组虫体囊泡长度和宽度与其余3组相比差异均有统计学意义(F_(长度)=7.58、65.93、7.11,F_(宽度)=73.85、29.41、308.57,P<0.05或P<0.01)。培养12 h时,PBS组、RPMI 1640组、胆汁组和血清组幼虫头节翻出率分别为(33.3±5.8)%、(20.0±0.0)%、(100.0±0.0)%、(13.3±5.8)%,其中血清组与PBS和胆汁组头节翻出率差异有统计学意义(F=18.00、676.00,P<0.01)。对各组培养效果比较显示,血清组的培养液(RPMI 1640+10%无外泌体胎牛血清)为最适培养液。SDS-PAGE电泳分析结果显示,利用RPMI 1640+10%无外泌体胎牛血清培养豆状囊尾蚴,可成功提取到虫体的代谢-分泌产物和外泌体蛋白。Western blotting分析结果显示,用特异性抗体检测可见Tpeno和Tp14-3-3阳性条带,相对分子质量(Mr)分别约47000和28000,与预期相符。透射电镜下豆状囊尾蚴外泌体大小不一,直径为50~150 nm,为圆形或椭圆形的囊泡。免疫电镜分析显示,阴性兔血清不能识别外泌体蛋白,未见胶体金颗粒标记;外泌体标志蛋白CD63、虫体特异性蛋白Tpeno和Tp14-3-3均为阳性表达,胶体金颗粒标记明显。结论初步建立了豆状囊尾蚴体外培养体系,可连续培养豆状囊尾蚴至少3个月以上。采用该体外培养方法培养可在培养上清中成功提取豆状囊尾蚴的外泌体。

关键词：豆状囊尾蚴体外培养长期分泌产物免疫电镜

cGAS-STING信号通路在先天性免疫中的作用研究进展

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动物医学进展 2022年第4期43卷 87-92页

作者：于思慧单朝萌文雪霞张莹沈阳农业大学动物科学与医学学院/东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110161

先天性免疫是动物抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。当病原微生物入侵时,机体可通过模式识别受体识别病原体相关分子模式,启动抵抗外源微生物感染的免疫反应。环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)是一种DNA感受器,可感知外源DNA并激活cGAS-... 详细信息

先天性免疫是动物抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。当病原微生物入侵时,机体可通过模式识别受体识别病原体相关分子模式,启动抵抗外源微生物感染的免疫反应。环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)是一种DNA感受器,可感知外源DNA并激活cGAS-STING信号通路。而cGAS-STING信号通路的激活可诱导产生干扰素,这是先天性免疫反应至关重要的组成部分。论文综述了cGAS-STING信号通路介导先天性免疫的分子机制及病毒通过该信号通路调控机体先天性免疫的策略,以期为研究cGAS-STING信号通路及其与病毒间的相互作用提供参考。

关键词： cGAS-STING信号通路先天性免疫病毒感染

CRISPR-Cas技术在病毒性传染病诊断中的应用

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动物医学进展 2022年第7期43卷 107-112页

作者：战佳兴文雪霞张莹沈阳农业大学动物科学与医学学院/东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110161

病毒性传染病尤其是新发和再发病毒性传染病一直是人类和动物健康的重大威胁,而开发准确、快速、便捷的诊断方法有利于病毒性传染病的有效防控。CRISPR-Cas系统是当前应用广泛的基因编辑技术。近年来,有些类型CRISPR-Cas系统已在传染性... 详细信息

病毒性传染病尤其是新发和再发病毒性传染病一直是人类和动物健康的重大威胁,而开发准确、快速、便捷的诊断方法有利于病毒性传染病的有效防控。CRISPR-Cas系统是当前应用广泛的基因编辑技术。近年来,有些类型CRISPR-Cas系统已在传染性病原微生物的分子诊断方面展现出巨大潜力,其与核酸扩增、荧光标记等技术结合建立的检测方法准确、灵敏度高、操作简便,不需要很复杂的设备,适宜用于疫病的现场快速诊断。论文综述了CRISPR-Cas系统Ⅱ型CRISPR-Cas9、Ⅴ型CRISPR-Cas12和Ⅵ型CRISPR-Cas13技术的作用机制及其在病毒性传染病诊断中的应用,以期为病毒性传染病的诊断和防控提供参考。

关键词： CRISPR-Cas技术病毒性传染病分子诊断

LncRNA调控病原微生物致病作用的研究进展

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中国兽医杂志 2022年第4期58卷 65-69页

作者：严平周媛媛贾永超郭营王临喜尹荣兰郭忠博王欣尹荣焕沈阳农业大学动物科学与医学学院重要家畜疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110866 吉林省畜牧兽医科学研究院吉林长春130062 辽宁农业职业技术学院辽宁营口115009

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的RNA。由于它不具有开放阅读框因而缺乏蛋白编码能力,或者仅能编码短的多肽[1]。LncRNA广泛存在于动植物、酵母、原核生物与病毒等多种生物中,并在生物学过程中发... 详细信息

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的RNA。由于它不具有开放阅读框因而缺乏蛋白编码能力,或者仅能编码短的多肽[1]。LncRNA广泛存在于动植物、酵母、原核生物与病毒等多种生物中,并在生物学过程中发挥关键的作用。目前,基因表达调控是病原微生物与宿主关系中的热门研究问题。研究发现,lncRNA在病原微生物感染过程中起着重要的调控作用,与疾病的发生、发展息息相关。

关键词：病原微生物致病作用原核生物基因表达调控热门研究宿主关系

宿主lncRNA在病毒感染中的作用研究进展

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动物医学进展 2021年第11期42卷 100-105页

作者：王晨杜彦廷张莹沈阳农业大学动物科学与医学学院/东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110866

长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNA)是转录本长度大于200个核苷酸的非编码RNA,无开放阅读框,没有可识别的蛋白质编码能力,但具有多种生物学功能,其生物学功能在病毒感染及复制中具有重要意义。宿主lncRNA影响病毒复制主要通过... 详细信息

长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNA)是转录本长度大于200个核苷酸的非编码RNA,无开放阅读框,没有可识别的蛋白质编码能力,但具有多种生物学功能,其生物学功能在病毒感染及复制中具有重要意义。宿主lncRNA影响病毒复制主要通过以下方式:影响以IFN和NF-κB为代表介导的天然免疫应答反应;存在部分lncRNA直接参与病毒复制;然后宿主lncRNA可通过调控细胞代谢影响病毒复制;宿主lncRNA与其他非编码RNA共同影响病毒复制。因此出现了由感染诱导的细胞lncRNA可以控制细胞和病毒基因的转录、复制或翻译的功能;许多细胞lncRNA对感染诱导的抗病毒途径有反应应答;多种lncRNA可以作为先天抗病毒反应的正或负调节剂。论文综述了宿主lncRNA的功能及在病毒感染中的作用,以期为研究宿主lncRNA在病毒感染中的作用提供参考。

关键词： lncRNA 长链非编码RNA 病毒感染天然免疫反应

虾肝肠胞虫孢壁蛋白SWP7的多克隆抗体制备和定位分析

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中国渔业质量与标准 2022年第6期12卷 1-8页

作者：包杰宁梓健丰程程姜宏波沈阳农业大学动物科学与医学学院辽宁沈阳110866 东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110866

孢壁作为微孢子虫最外层的结构,是连接微孢子虫与外界环境的桥梁。因此,研究孢壁蛋白对阐明宿主-微孢子虫相互作用的机制具有重要意义。本研究以虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)孢壁蛋白7(spore wall protein 7,SWP7)为研... 详细信息

孢壁作为微孢子虫最外层的结构,是连接微孢子虫与外界环境的桥梁。因此,研究孢壁蛋白对阐明宿主-微孢子虫相互作用的机制具有重要意义。本研究以虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)孢壁蛋白7(spore wall protein 7,SWP7)为研究对象,首先通过生物信息学分析其序列基本特征,然后合成该基因序列、构建原核表达载体、诱导蛋白表达并纯化,最后制备多克隆抗体。通过Western blotting验证该抗体的特异性后,利用间接免疫荧光技术观察和分析该蛋白在成熟孢子上的定位情况。结果表明,SWP7的N末端存在信号肽序列,且无跨膜域和GPI锚定位点,可能作为分泌蛋白发挥功能。同时,预测到SWP7有多个磷酸化修饰位点,可能参与肝肠胞虫信号转导、免疫应答、受体激活等功能。间接免疫荧光结果显示SWP7均匀地表达于成熟EHP孢壁上,且可能参与到萌发过程中。研究结果可为明确SWP7在肝肠胞虫入侵宿主中的功能及其机制提供理论基础。

关键词：虾肝肠胞虫孢壁蛋白多克隆抗体间接免疫荧光

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多房棘球蚴感染对小鼠肝脏脂质代谢的影响

畜牧兽医学报 2022年

作者：李红李艳萍刘婷丽陈国梁王立群郭小腊骆学农中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

旨在探讨多房棘球蚴感染早期对小鼠肝脏脂代谢的影响。选取60只清洁级BALB/c小鼠（6周龄，雄性）随机分为试验组和对照组，每组30只。试验组小鼠每只腹腔接种600个原头蚴，对照组小鼠腹腔注射等体积的PBS缓冲液。采用原位两步循环灌流... 详细信息

旨在探讨多房棘球蚴感染早期对小鼠肝脏脂代谢的影响。选取60只清洁级BALB/c小鼠（6周龄，雄性）随机分为试验组和对照组，每组30只。试验组小鼠每只腹腔接种600个原头蚴，对照组小鼠腹腔注射等体积的PBS缓冲液。采用原位两步循环灌流及多步低速差速离心分离纯化肝实质细胞。利用高通量测序分析感染3月小鼠肝实质细胞差异表达的mRNA，并对其进行KEGG、GO分析和qRT-PCR验证。制备多房棘球蚴感染2月和3月小鼠的肝脏组织切片，分别进行油红O染色，并通过qRT-PCR检测多房棘球蚴感染不同感染时期肝实质细胞脂质代谢相关基因的表达水平。结果表明，与未感染对照组相比，小鼠感染多房棘球蚴后3月和6月肝脏脂肪沉积明显增多；感染2月的肝实质细胞脂质合成相关基因Scd1、Fasn和Srebf1，以及脂质氧化分解相关基因Acox1和Cpt1α均明显上调；感染3月的肝实质细胞Scd1、Fasn、Srebf1及Cd36的表达水平均明显升高，而Acox1、Cpt1α、Pparγ、和Pparα的表达水平明显降低。上述结果表明，多房棘球蚴感染早期可能通过促进肝实质细胞的脂质合成，抑制脂质氧化分解，从而导致肝脏脂质沉积。

关键词：多房棘球蚴肝实质细胞脂质代谢脂质沉积