虾肝肠胞虫孢壁蛋白SWP7的多克隆抗体制备和定位分析

作     者：包杰 宁梓健 丰程程 姜宏波 BAO Jie;NING Zijian;FENG Chengcheng;JIANG Hongbo

作者机构：沈阳农业大学动物科学与医学学院辽宁沈阳110866 东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110866 

出 版 物：《中国渔业质量与标准》 (Chinese Fishery Quality and Standards)

年 卷 期：2022年第12卷第6期

页      面：1-8页

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

基　　金：国家虾蟹产业技术体系(CARS-48) 辽宁省教育厅项目(LSNQN202002) 沈阳市科技特派团项目(21-116-3-38)。 

主　　题：虾肝肠胞虫 孢壁蛋白 多克隆抗体 间接免疫荧光 

摘      要：孢壁作为微孢子虫最外层的结构,是连接微孢子虫与外界环境的桥梁。因此,研究孢壁蛋白对阐明宿主-微孢子虫相互作用的机制具有重要意义。本研究以虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)孢壁蛋白7(spore wall protein 7,SWP7)为研究对象,首先通过生物信息学分析其序列基本特征,然后合成该基因序列、构建原核表达载体、诱导蛋白表达并纯化,最后制备多克隆抗体。通过Western blotting验证该抗体的特异性后,利用间接免疫荧光技术观察和分析该蛋白在成熟孢子上的定位情况。结果表明,SWP7的N末端存在信号肽序列,且无跨膜域和GPI锚定位点,可能作为分泌蛋白发挥功能。同时,预测到SWP7有多个磷酸化修饰位点,可能参与肝肠胞虫信号转导、免疫应答、受体激活等功能。间接免疫荧光结果显示SWP7均匀地表达于成熟EHP孢壁上,且可能参与到萌发过程中。研究结果可为明确SWP7在肝肠胞虫入侵宿主中的功能及其机制提供理论基础。