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海洋细菌Pseudoalteromonas ***9的筛选鉴定及产磷脂酶B性质

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食品科学 2022年第2期43卷 134-141页

作者：王藏马小艺田小鹏祖航天丁延帅吕明生王淑军江苏海洋大学海洋资源与环境重点实验室海洋生物技术重点实验室江苏连云港222005 江苏海洋大学江苏省海洋生物产业技术协同创新中心江苏连云港222005

从黄海海泥中筛选产磷脂酶菌株,其中酶活力最高的HL9鉴定为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)。该菌株最佳生长培养基组成为米糠与酵母粉,最佳生长pH 8.0、NaCl质量浓度30 g/L、培养温度25℃。优化后产酶最高发酵条件:发酵培养基配方为... 详细信息

从黄海海泥中筛选产磷脂酶菌株,其中酶活力最高的HL9鉴定为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)。该菌株最佳生长培养基组成为米糠与酵母粉,最佳生长pH 8.0、NaCl质量浓度30 g/L、培养温度25℃。优化后产酶最高发酵条件:发酵培养基配方为10 g/L麸皮和5 g/L鱼粉蛋白胨,NaCl 20 g/L,pH 8.5,接种量2%,30℃培养48 h。薄层层析和气相色谱分析表明,菌株HL9产磷脂酶B,且磷脂酶B水解sn-2酰基的产物占70%。该酶的最适反应温度和pH值分别为45℃和7.5。Ca^(2+)、Co^(2+)、Mn^(2+)等金属离子对酶活力有促进作用,Cu^(2+)对酶活力有抑制作用。磷脂酶B在有机溶剂中可以保持80%的酶活力。反应温度高和碱性条件等催化特性使该酶具有较好应用前景,研究结果也为进一步探索该酶的结构与功能奠定基础。

关键词：假交替单胞菌磷脂酶B 酶学性质

石莼类菌孢素氨基酸的提取工艺及对副溶血弧菌的抑菌机理

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食品工业科技 2024年第18期45卷 175-183页

作者：胡晓琪徐沈晨王思宇浦孟宣胥珍红马骁孙颖颖江苏海洋大学江苏省海洋生物资源与环境重点实验室江苏连云港222005 江苏海洋大学江苏省海洋生物产业技术协同创新中心江苏连云港222005

为探明石莼类菌孢素氨基酸(MAAs)的提取工艺及对副溶血弧菌的抑菌机理,本研究采用单因素实验和响应面优化试验,分析了液固比、提取温度和提取时间对石莼MAAs得率的影响,并对MAAs进行了硅胶柱层析分离以及HPLC和ESI-MS鉴定。通过扫描、... 详细信息

为探明石莼类菌孢素氨基酸(MAAs)的提取工艺及对副溶血弧菌的抑菌机理,本研究采用单因素实验和响应面优化试验,分析了液固比、提取温度和提取时间对石莼MAAs得率的影响,并对MAAs进行了硅胶柱层析分离以及HPLC和ESI-MS鉴定。通过扫描、荧光显微镜观察胞内核酸、蛋白质的泄露及DNA分解等分析MAAs对副溶血弧菌的抑菌机理。结果表明,石莼MAAs的最佳提取参数为液固比25:1 mL/g、提取温度40℃和提取时间118 min,制备到的MAAs得率为179.34±3.91 mg/g。石莼MAAs明显破坏了副溶血弧菌的细胞膜,导致了胞内核酸和蛋白质泄露,并促使菌体内DNA发生分解。MAAs经硅胶柱层析分离获得2个组分,经鉴定组分H2为shinorine,其在石莼干粉末中含量可达10.32 mg/g。本研究为石莼MAAs的制备和副溶血弧菌的生物防治提供了技术参考。

关键词：石莼类菌孢素氨基酸提取工艺副溶血弧菌抑菌机制

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脊尾白虾隐花色素基因cry1的克隆及其功能分析

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水产学报 2021年第2期45卷 170-178页

作者：朱佶轩戴琴高威段健诚宋崇阳张攀阎斌伦高焕江苏海洋大学江苏省海洋生物技术重点实验室江苏省海洋生物资源与生态环境重点实验室江苏省海洋生物产业技术协同创新中心

为探究隐花色素基因(cry1)在甲壳类中的节律调节功能,实验根据脊尾白虾转录组序列,利用RACE技术获得了脊尾白虾cry1的cDNA序列全长并对其进行功能分析。脊尾白虾cry1全长2 190 bp,开放阅读框1 845 bp,5′端非编码区为241 bp,3′端非编... 详细信息

为探究隐花色素基因(cry1)在甲壳类中的节律调节功能,实验根据脊尾白虾转录组序列,利用RACE技术获得了脊尾白虾cry1的cDNA序列全长并对其进行功能分析。脊尾白虾cry1全长2 190 bp,开放阅读框1 845 bp,5′端非编码区为241 bp,3′端非编码区为104 bp,共翻译出614个氨基酸,预测蛋白质的分子质量为70.5 ku,理论等电点为5.09。同源性分析显示,脊尾白虾cry1与凡纳滨对虾的同源性最高,为71.6%。荧光定量分析结果显示,脊尾白虾cry1在眼柄、鳃、心脏、胃、肝胰腺、性腺、肌肉、肠道和腹索神经中均有表达,其中眼柄的表达量最高,性腺和心脏次之;不同时段的表达结果发现,其表达量在日节律(24 h)中表现出先下降再上升的趋势。不同光色条件下RNA干扰(RNA interference, RNAi)结果显示,注射小干扰RNA(siRNA)后3～6 h蓝光光照下脊尾白虾cry1的表达量显著高于白光光照,9～24 h蓝色和白色光照下的表达量无显著差异,而RNA干扰组的表达量显著低于对照组,此结果表明cry1可能主要响应蓝光周期节律。目前对甲壳类生物钟的研究较少,该研究为深入探究甲壳类生物钟基因的调控机制提供帮助。

关键词：脊尾白虾隐花色素基因组织表达日节律 RNA干扰

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岩藻多糖降解酶的研究进展

食品科学 2024年第9期45卷 306-313页

作者：魏真陈金玲杨杰江苏海洋大学江苏省海洋生物资源与环境重点实验室江苏连云港222005 江苏省海洋生物产业技术协同创新中心江苏连云港222005 江苏省海洋资源开发研究院江苏连云港222005

岩藻多糖降解酶是一类能够将大分子岩藻多糖水解为具有一定生物活性的低分子质量岩藻聚糖或其他产物的糖苷水解酶。岩藻多糖降解酶在活性岩藻低聚糖制备、生物制药和疾病诊断等领域具有重要的应用价值。本文从岩藻多糖降解酶的来源、性... 详细信息

岩藻多糖降解酶是一类能够将大分子岩藻多糖水解为具有一定生物活性的低分子质量岩藻聚糖或其他产物的糖苷水解酶。岩藻多糖降解酶在活性岩藻低聚糖制备、生物制药和疾病诊断等领域具有重要的应用价值。本文从岩藻多糖降解酶的来源、性质、作用方式、结构和应用等方面进行综述,发现岩藻多糖降解酶主要来源于海洋微生物及海洋无脊椎动物,且不同物种来源的岩藻多糖降解酶在酶学性质、底物特异性、分子结构与催化机制等方面均存在较大差异。不同类型的岩藻多糖降解酶负责催化复杂岩藻多糖的不同位点,生成具有抗氧化、抗肿瘤、抗血栓等多种特殊活性的岩藻低聚糖产物,因此,利用岩藻多糖降解酶进行功能性药品和食品的制备逐渐成为多糖资源应用领域的研究热点。本文可为后续岩藻多糖降解酶的研究提供理论支持,同时也可为有效开发特殊生物学功效的岩藻低聚糖提供参考。

关键词：岩藻多糖降解酶岩藻多糖岩藻糖苷酶结构与功能应用

产右旋糖酐酶Pseudarthrobacter ***22的筛选、鉴定及酶学性质研究

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食品与发酵工业 2021年第17期47卷 76-83页

作者：祖航天田小鹏胡杰张皓丁延帅吕明生王淑军海洋资源与环境重点实验室/海洋生物技术重点实验室(江苏海洋大学) 江苏连云港222005 江苏省海洋生物产业技术协同创新中心江苏连云港222000

从日照海域海泥中筛选得到1株产右旋糖酐酶的菌株RN22,经形态特征、生理生化特征以及16S rRNA序列分析鉴定为Pseudarthrobacter sp.。优化得到的产酶条件为:右旋糖酐T2010 g/L、胰蛋白胨5 g/L、麸皮5 g/L、pH 8.0、温度30℃,最佳产酶时... 详细信息

从日照海域海泥中筛选得到1株产右旋糖酐酶的菌株RN22,经形态特征、生理生化特征以及16S rRNA序列分析鉴定为Pseudarthrobacter sp.。优化得到的产酶条件为:右旋糖酐T2010 g/L、胰蛋白胨5 g/L、麸皮5 g/L、pH 8.0、温度30℃,最佳产酶时间为48 h。该菌株所产右旋糖酐酶的分子质量约为70 kDa,该酶作用温度在30~70℃,最适作用温度为60℃,热稳定性好,在40℃下保存5 h后,酶活力仍维持在80%以上;最适pH为7.5并在pH 5.5~8.0之间稳定;Mg ^(2+)、Na^(+)、K^(+)等金属离子可以提高酶活性,有机溶剂对酶活力具有不同程度的抑制效果。该酶专一性水解底物α-1,6糖苷键,水解产物中麦芽四糖、麦芽五糖和麦芽七糖含量达到90%以上,具有作用温度高,稳定性好,水解产物中寡糖比例高的特点,在食品和保健品行业具有应用潜力。

关键词： Pseudarthrobacter sp. 右旋糖酐酶酶学性质麦芽寡糖

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海州湾潮间带沙蚕对沉积物微塑料的指示作用

环境科学 2021年第9期42卷 4341-4349页

作者：王嘉旋宋可心孙一鑫方涛李瑾祯张涛冯志华江苏海洋大学江苏省海洋生物资源与环境重点实验室连云港222005 江苏海洋大学江苏省海洋生物产业技术协同创新中心连云港222005 江苏海洋大学江苏省海洋生物技术重点实验室连云港222005

2018年7月于海州湾潮滩设置3个断面共9个站位,通过对海州湾潮滩沉积物中以及沙蚕体内微塑料的丰度和形态特征的研究,探讨了沙蚕体内微塑料的来源,以及沙蚕对潮滩沉积物微塑料的指示作用.结果表明,潮滩沉积物中微塑料的平均丰度为(0.49±... 详细信息

2018年7月于海州湾潮滩设置3个断面共9个站位,通过对海州湾潮滩沉积物中以及沙蚕体内微塑料的丰度和形态特征的研究,探讨了沙蚕体内微塑料的来源,以及沙蚕对潮滩沉积物微塑料的指示作用.结果表明,潮滩沉积物中微塑料的平均丰度为(0.49±0.17)n·g^(-1),处于国内近岸环境研究的较高水平.所有检测到的微塑料中,最为丰富的形态和颜色类型分别为纤维和黑灰色,材质以聚乙烯(polyethylene,PE)、聚酯纤维(polyester,PET)和聚苯乙烯(polystyrene,PS)为主.沙蚕中微塑料检出率为77.78%~86.67%,平均丰度为(6.68±2.21)n·ind^(-1),其丰度与个体质量显著正相关(r=0.42,P=0.002),个体质量1.5 g以上的沙蚕中微塑料丰度显著高于生物物种是可行的.

关键词：微塑料沙蚕潮滩沉积物海州湾指示生物

副溶血性弧菌外膜蛋白VP1008和弧菌铁蛋白受体的重组表达及抗体交叉反应

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食品工业科技 2021年第19期42卷 144-151页

作者：梁夏夏袁倩云刘蕾郭珊珊王文彬江苏海洋大学食品科学与工程学院江苏连云港222005 江苏省海洋生物资源与环境重点实验室江苏连云港222005 江苏省海洋生物产业技术协同创新中心江苏连云港222005

目的:副溶血性弧菌特异性表面抗原对副溶血性弧菌免疫检测具有重要意义,目前外膜孔蛋白VP1008(39.3 kDa)和弧菌铁蛋白受体(78.7 kDa)的免疫原性仍不清楚。方法:从基因组DNA扩增了目的基因,分别构建了含目的基因的pET-28a(+)重组质粒,转... 详细信息

目的:副溶血性弧菌特异性表面抗原对副溶血性弧菌免疫检测具有重要意义,目前外膜孔蛋白VP1008(39.3 kDa)和弧菌铁蛋白受体(78.7 kDa)的免疫原性仍不清楚。方法:从基因组DNA扩增了目的基因,分别构建了含目的基因的pET-28a(+)重组质粒,转入大肠杆菌BL21并经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达两种重组蛋白。采用镍柱纯化的重组蛋白分别免疫了BALB/c小鼠,并通过酶联免疫吸附反应(ELISA)和免疫印迹研究了小鼠多抗与不同株副溶血性弧菌、其它弧菌等菌株的交叉反应。结果:重组蛋白VP1008和弧菌铁蛋白受体均以包涵体形式表达,小鼠多抗与免疫的重组蛋白的效价>1000 K,与7株副溶血性弧菌的效价在4.5~13.5 K,与10株弧菌基本无交叉反应,与肠杆菌的交叉反应和纯化过程中大肠杆菌蛋白的微量残留有关;多抗均与副溶血性弧菌全菌蛋白在目标位置出现反应条带,其中VP1008多抗效价和免疫原性相对较好。结论:外膜蛋白VP1008小鼠多抗对副溶血性弧菌识别性、免疫原性较好,为建立新的副溶血性弧菌免疫检测方法奠定了基础。

关键词：副溶血性弧菌外膜蛋白重组表达弧菌铁蛋白受体免疫原性免疫检测

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青蛤不同壳色个体间的生长及营养差异

水产学报 2022年第8期46卷 1458-1465页

作者：魏敏吴雨晨陈东张明月王亦我仉佳文仇攀宋杰董志国江苏海洋大学江苏省海洋生物资源与生态环境重点实验室江苏省海洋生物技术重点实验室江苏海洋大学江苏省海洋生物产业技术协同创新中心

为了探究青蛤壳色性状与其生长和营养成分之间的关系，实验对青蛤不同壳色个体的生长指标及营养组分进行了测定分析。结果显示，青蛤紫壳个体(整体)的湿重、壳长、水管和鳃组织湿重占比显著高于白壳个体，青蛤紫壳个体(整体)的壳宽和外... 详细信息

为了探究青蛤壳色性状与其生长和营养成分之间的关系，实验对青蛤不同壳色个体的生长指标及营养组分进行了测定分析。结果显示，青蛤紫壳个体(整体)的湿重、壳长、水管和鳃组织湿重占比显著高于白壳个体，青蛤紫壳个体(整体)的壳宽和外套膜组织湿重占比极显著高于白壳个体。青蛤紫壳个体可食部分的粗脂肪和粗蛋白含量极显著高于白壳个体。紫/白壳个体的必需氨基酸与总氨基酸比值分别为37.46%和37.02%，且紫壳个体显著高于白壳个体；必需氨基酸与非必需氨基酸比值分别为67.72%和66.60%，且紫壳个体显著高于白壳个体，表明紫壳个体氨基酸平衡效果优于白壳个体，且均属于优质蛋白。紫壳个体和白壳个体中的单不饱和脂肪酸主要以棕榈酸为主，分别占可食部分脂肪酸总量的9.97%和9.85%，多不饱和脂肪酸主要以EPA和DHA为主，其中EPA分别占脂肪酸总量的6.64%和6.54%,DHA分别占脂肪酸总量的8.00%和8.51%。研究表明，紫/白壳个体间在生长和营养上均存在一定差异，且紫壳性状与其生长和营养存在一定正向关联关系，为利用紫壳性状作为遗传标记进行青蛤良种选育提供了理论依据。

关键词：青蛤壳色生长营养

海州湾白脊管藤壶应对夏季高温期日间温度变化的生理响应

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海洋通报 2024年

作者：邵文泰麻明鑫吴钰泽蔡月凤申欣江苏海洋大学海洋科学与水产学院江苏省海洋生物资源与环境/海洋生物技术重点实验室江苏省海洋生物产业技术协同创新中心

气候变化导致的全球变暖影响着生物多样性，改变着生态系统的结构和功能。潮间带受到海洋和陆地的双重影响，环境波动剧烈且极易受到全球变化的影响。相比平均温度，日间温度波动循环中的极限温度会对生物造成极大的生存压力。本研究为... 详细信息

气候变化导致的全球变暖影响着生物多样性，改变着生态系统的结构和功能。潮间带受到海洋和陆地的双重影响，环境波动剧烈且极易受到全球变化的影响。相比平均温度，日间温度波动循环中的极限温度会对生物造成极大的生存压力。本研究为探究海州湾潮间带蔓足类应对夏季高温期日间温度变化的生理响应，以代表种白脊管藤壶(Fistulobalanus albicostatus)为对象，开展了原位日间温度监测和半致死温度测定；通过温度应激实验和时间进程实验，探究不同温度变化对白脊管藤壶的抗氧化能力、损伤水平和免疫酶活力的影响。结果表明，海州湾岩相潮滩藤壶生境日间温度波动范围分别为22.4～46.1 ℃和22.6～48.5 ℃，每天有约9 h处于35 ℃以上高温暴露中，并且持续约4 h超过40 ℃高温暴露。白脊管藤壶24 h的LT50为47.11±0.20 ℃，7 d的LT50为46.29±0.21 ℃。在不同温度应激处理下，白脊管藤壶体内总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力和过氧化氢酶(CAT)活力均被不同程度的诱导；40 ℃～46 ℃的持续处理下，抗氧化相关酶活力也被先后诱导，达峰时间不一。白脊管藤壶体内丙二醛(MDA)含量呈波动变化，28 ℃下体内MDA含量最少；8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量受温度应激处理的影响变化不明显，持续高温处理，显著增加机体内损伤水平。在不同温度应激处理和持续处理下，白脊管藤壶体内酸性磷酸酶(ACP)活力和碱性磷酸酶(AKP)活力呈现波动变化趋势。综上，海州湾岩相潮滩藤壶生境日间温度波动范围大、极端温度频发。不同温度变化能够显著的影响白脊管藤壶的抗氧化能力、损伤水平和免疫酶活力，通过改变其生理过程使其能够尽快适应这种极端的温度变化。本研究旨在更深入了解潮间带生物在热胁迫下的生理响应，为解析海洋生物如何应对未来环境变化提供理论参考，对于预测它们在全球变暖中的未来状态至关重要。

关键词：气候变化日间温度变化潮间带白脊管藤壶生理响应