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在“同一健康”视角下中国采取的细菌耐药性防控实践

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江苏预防医学 2024年第2期35卷 248-252页

作者：单云峰秦思倪云龙霍翔江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009 南京医科大学公共卫生学院新发突发重大传染病病原微生物重点实验室江苏省卫生应急工程研究中心

通过描述细菌的抗微生物药物耐药(antimicrobial resistance,AMR)的危害和机制,从“同一健康”视角总结国家层面对AMR监管现状,梳理各项政策法规和国家在临床、动物及公共卫生界面建立的细菌耐药性监测网络现状,对现有监测体系存在的数... 详细信息

通过描述细菌的抗微生物药物耐药(antimicrobial resistance,AMR)的危害和机制,从“同一健康”视角总结国家层面对AMR监管现状,梳理各项政策法规和国家在临床、动物及公共卫生界面建立的细菌耐药性监测网络现状,对现有监测体系存在的数据共享机制缺乏、监测对象和内容不全面、标准化程度低等问题进行剖析,为我国进一步贯通、整合现有AMR监测体系,打破碎片化、局限化、非标准化的监测困境,构建多领域、全链条、数据共享的AMR监测新模式提出参考。

关键词：抗微生物药物耐药性监测网络同一健康政策法规中国

菌渣有机肥对番茄生长及土壤抗生素抗性基因累积的影响

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土壤学报 2024年

作者：崔格格张耀中杨天杰王世梅黄艺烁高阳韦中徐阳春沈其荣江苏省固体有机废弃物资源化高技术研究重点实验室国家有机类肥料工程技术研究中心江苏省有机固体废弃物资源化协同创新中心南京农业大学资源与环境科学学院

菌渣是抗生素合成中间体（6-氨基青霉烷酸）发酵过程中产生的固体废弃物，可能具有增加抗生素抗性基因（ARGs）传播的风险。目前，堆肥化处理方法具有无害化和资源化等特点，已成为菌渣处理的主要手段。本研究旨在探究菌渣有机肥对番茄... 详细信息

菌渣是抗生素合成中间体（6-氨基青霉烷酸）发酵过程中产生的固体废弃物，可能具有增加抗生素抗性基因（ARGs）传播的风险。目前，堆肥化处理方法具有无害化和资源化等特点，已成为菌渣处理的主要手段。本研究旨在探究菌渣有机肥对番茄生长及土壤ARGs累积的影响，以评估菌渣有机肥的生态风险。以经济作物番茄为研究对象，通过田间试验，分析以菌渣为原料制备的有机肥施入土壤后，对番茄生理指标、土壤理化性质、细菌群落结构及ARGs的多样性和丰度变化的影响。结果表明，施用菌渣有机肥可提升田间番茄地上部干物质量，连续两季施用可增加番茄维生素C含量，增加土壤硝态氮含量。菌渣有机肥处理后根际土壤细菌群落多样性无显著变化，但与常规施肥相比，变形菌门丰度显著升高，绿湾菌门丰度显著降低。施用菌渣有机肥后番茄土壤中ARGs种类多样性无显著变化，但氨基糖苷类抗性基因aada1、磺胺类抗性基因sul(II)显著高于常规复合肥处理。藤黄单胞菌（Luteimonas）丰度与四环素类、氨基糖苷类和磺胺类抗性基因丰度均具有显著正相关性。施用菌渣有机肥番茄根际土壤中未富集β-内酰胺类ARGs，四环素类、氨基糖苷类和磺胺类等ARGs在根际微生物中积累的风险有待进一步评估。

关键词：菌渣有机肥番茄抗生素抗性基因(ARGs) 微生物群落

细粒棘球绦虫MDH基因的克隆表达结构功能预测及蛋白定位

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 393-402页

作者：普娜赵文卿张玉霞陈旭珂张艳艳孙艳薄新文王正荣石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000

为了探究苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)生长发育中的生物学功能并初步评价MDH作为疫苗候选抗原的潜力,从NCBI GenBank数据库中获得Eg MDH基因序列,设计特异性引物,以细粒棘球绦... 详细信息

为了探究苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)生长发育中的生物学功能并初步评价MDH作为疫苗候选抗原的潜力,从NCBI GenBank数据库中获得Eg MDH基因序列,设计特异性引物,以细粒棘球绦虫原头蚴的cDNA为模板,用PCR扩增MDH基因全长序列;采用生物信息学软件对MDH蛋白的理化性质、结构特点等进行分析;构建重组质粒pET28a-MDH并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,随后纯化、复性蛋白,并通过Western-blot对蛋白进行抗原性分析;利用间接免疫荧光试验检测原头蚴中目的蛋白的定位;应用实时荧光定量PCR分析Eg MDH基因m RNA在原头蚴及成虫中的相对转录水平。生物信息学分析结果显示,Eg MDH基因长999 bp,编码332个氨基酸,蛋白分子式为C1639H2599N445O475S16,相对分子质量为36 651.32,理论等电点为8.11,且编码蛋白没有信号肽和跨膜区,含有40个磷酸化位点,3个N连接型糖基化位点,9个优势B细胞抗原表位。二级结构由α-螺旋(46.69%)、无规则卷曲(31.93%)、延伸链结构(16.87%)和β-转角(4.52%)构成。克隆的基因长975 bp,预测分子质量为35.7 ku;Western-blotting显示,重组蛋白可以被抗His标签的家兔多克隆抗体和原头蚴可溶性全蛋白小鼠多克隆抗体识别;间接免疫荧光试验显示,Eg MDH蛋白定位在原头蚴的囊壁;实时荧光定量PCR显示,Eg MDH基因在成虫及原头蚴中均有表达,且原头蚴阶段的转录水平显著高于成虫(P<0.05)。本研究结果初步表明Eg MDH具有作为疫苗候选抗原的潜力,以期为后续细粒棘球绦虫疫苗研发提供候选抗原;同时也为后续细粒棘球绦虫MDH基因的深入研究奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫苹果酸脱氢酶生物信息学原核表达间接免疫荧光

新橙皮苷治疗溃疡性结肠炎的网络药理学研究及实验验证

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福建中医药 2024年第3期55卷 36-41页

作者：吴与伦张欣然沈阿灵刘丽雅魏丽慧陈友琴方翌福建中医药大学中西医结合学院福建福州350122 福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福建福州350122 福建中医药大学科技创新与转化中心福建福州350122 美国凯斯西储大学医学院俄亥俄州克利夫兰44106

目的基于网络药理学及动物实验探讨新橙皮苷治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用及其机制。方法选择TCMSP、TCMIP、Swiss Target Prediction、SymMap、BATMAN-TCM数据库检索新橙皮苷潜在蛋白靶点,在DisGenet及Genecards数据库中检索UC的基因靶... 详细信息

目的基于网络药理学及动物实验探讨新橙皮苷治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用及其机制。方法选择TCMSP、TCMIP、Swiss Target Prediction、SymMap、BATMAN-TCM数据库检索新橙皮苷潜在蛋白靶点,在DisGenet及Genecards数据库中检索UC的基因靶点,获取新橙皮苷治疗UC的潜在交集靶点。采用KEGG信号通路和GO功能富集分析筛选新橙皮苷治疗UC的关键信号通路;使用STRING生物信息学数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络,筛选获取新橙皮苷治疗UC的核心靶标。采用随机数字表法将30只雄性SPF级C57BL/6小鼠分为对照组、模型组和低、中、高剂量组,每组6只。采用2%的葡聚糖硫酸钠(DSS)构建UC小鼠模型。低、中、高剂量组分别给以0.5、5、50 mL/(kg·d)新橙皮苷溶液灌胃造模的小鼠,对照组和模型组予等量蒸馏水灌胃,持续7 d。采用小鼠疾病活动指数(DAI)及小鼠体质量变化评估小鼠疾病情况;IHC检测网络药理学预测获得的相关核心靶标蛋白表达情况。结果网络药理学分析获得2 374个UC疾病靶点、101个新橙皮苷作用靶点和51个新橙皮苷与UC共同靶点。GO富集功能分析显示这些共同靶点涉及50个生物过程、20个细胞组分和42个分子功能。KEGG通路分析筛选获得MAPK信号通路、癌症的发病途径、癌症中的蛋白多糖、内分泌耐药、雌激素信号通路、糖尿病并发症的AGE-RAGE通路、IL-17信号通路等66条通路。PPI网络拓扑分析获得MAPK14、ALB、ESR1、FN1、CASP3、PTGS2、CAT、IFNG、HRAS、FGF2及AR等核心靶点。动物实验证实新橙皮苷可降低UC小鼠DAI评分,减少UC小鼠体质量的下降,显著下调UC小鼠结肠组织中p38(MAPK14)蛋白的磷酸化水平(P<0.05)。结论新橙皮苷治疗溃疡性结肠炎的作用机制可能与降低MAPK通路中p38磷酸化水平有关。

关键词：溃疡性结肠炎新橙皮苷网络药理学 MAPK信号通路

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４维和５维光声成像技术的研究进展

激光技术 2024年

作者：艾景赛孙正李璐华北电力大学电子与通信工程系华北电力大学河北省电力物联网技术重点实验室

光声成像的出现拓展了生物医学成像技术在细胞、组织和活体中的应用，从而监测复杂内环境中的多种生理过程。通过加入时间维度或进行多光谱成像，可以获得更丰富的组织信息，实现对目标形态结构和功能成分的定性和定量分析。对４维（３... 详细信息

光声成像的出现拓展了生物医学成像技术在细胞、组织和活体中的应用，从而监测复杂内环境中的多种生理过程。通过加入时间维度或进行多光谱成像，可以获得更丰富的组织信息，实现对目标形态结构和功能成分的定性和定量分析。对４维（３维和时间或３维和光谱）、５维（３维和时间、光谱）光声成像技术及光声光谱解混技术的研究进展进行综述，预测临床应用前景并总结目前存在的问题，展望未来可能的发展方向。

关键词：生物光学光声成像高维成像光声光谱成像光谱解混

AP2/ERF转录因子家族响应木本植物非生物胁迫的研究进展

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南通大学学报(自然科学版) 2024年

作者：黄倩慧田博雯华炫周欣彤江梓涵陈艳红张健南通大学生命科学学院南通市观赏植物遗传育种重点实验室

木本植物是全球生态系统的重要支柱，在维护生态平衡中起着重要作用，其在生长过程中会受到多种非生物胁迫，如冷胁迫、干旱胁迫、盐胁迫等，这些胁迫会严重影响木本植物的生长发育。AP2/ERF转录因子(APETALA2/ethylene *** factor) 在... 详细信息

木本植物是全球生态系统的重要支柱，在维护生态平衡中起着重要作用，其在生长过程中会受到多种非生物胁迫，如冷胁迫、干旱胁迫、盐胁迫等，这些胁迫会严重影响木本植物的生长发育。AP2/ERF转录因子(APETALA2/ethylene *** factor) 在木本植物中分布广泛，是植物最大的转录因子家族之一。首先，总结了木本植物AP2/ERF转录因子的分类情况；然后，探讨了AP2/ERF转录因子在木本植物响应非生物胁迫（冷、干旱、盐、淹水）的关键作用。结果发现，木本植物AP2/ERF转录因子家族中ERF和DREB亚家族成员数量最多，其中DREB亚家族成员CBF是木本植物冷胁迫信号转导的关键因子。研究成果可以为更好理解木本植物中AP2/ERF转录因子的功能及其在非生物响应中的作用提供支撑。

关键词：木本植物 AP2/ERF转录因子非生物胁迫

基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性快速检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2024年第1期37卷 79-85页

作者：郭莎贾哲龙彩凤黄璟贺鹏飞高洁于传飞徐刚领刘万卉王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 烟台大学药学院山东烟台264005

目的建立基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性快速检测方法,并进行验证。方法以U937-NF-κB-Luc细胞系为效应细胞,通过荧光素酶发光原理建立阿达木单抗生物学活性检测方法,并优化方法的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac... 详细信息

目的建立基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性快速检测方法,并进行验证。方法以U937-NF-κB-Luc细胞系为效应细胞,通过荧光素酶发光原理建立阿达木单抗生物学活性检测方法,并优化方法的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度(以160 ng/mL为初始浓度,进行2倍系列稀释,共10个稀释度)、抗体起始浓度(起始终浓度设为2000 ng/mL,进行2倍系列稀释,共20个稀释度)、抗体稀释倍数(1.5、2、3、4倍)、细胞接种量(8×10^(3)、2×10^(4)、4×10^(4)、6×10^(4)个/孔)、孵育时间(0.5、1、2、3 h),验证方法的专属性、准确性、精密性及线性范围。采用优化的方法及基于L929细胞的TNF-α中和活性法分别检测5批阿达木单抗的相对效价。结果阿达木单抗国际标准品的剂量-效应曲线呈典型的S型,且所得数据符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,R~2>0.99。确定最适TNF-α浓度为5 ng/mL,抗体起始浓度为800 ng/mL,抗体稀释倍数为2倍,细胞接种量为2×10^(4)个/孔,诱导时间为2 h。阿达木单抗等3种TNF-α靶点的治疗性单抗均可获得较好的剂量-效应曲线,其他非TNF-α靶点的治疗性单抗未呈现该曲线;效价理论值对数与其实测值对数的直线回归方程的斜率为1.037,相对偏倚均在±12%范围内;各效价样品的相对效价测定值的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)均细胞系的阿达木单抗生物学活性检测方法具有良好的专属性、准确性及精密性,且耗时短(仅需3 h),可作为阿达木单抗生物学活性的快速评价方法。

关键词：阿达木单抗 U937-NF-κB-Luc细胞肿瘤坏死因子-α 生物学活性

稳定表达PRRSV M蛋白的MARC-145^(ORF6)细胞系的构建及其对PRRSV增殖的影响

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1159-1169页

作者：荆扬王玉淼李洋常辉马志倩李志伟肖书奇中国农业科学院兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730046 西北农林科技大学动物医学院杨凌712100 塔里木大学动物科学与技术学院阿拉尔843300

为了给深入研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)ORF6基因编码的M蛋白的生物学功能提供重要试验材料,本研究首先利用慢病毒包装系统构建了过表达PRRSVORF6基因的重组慢病毒质粒,将该... 详细信息

为了给深入研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)ORF6基因编码的M蛋白的生物学功能提供重要试验材料,本研究首先利用慢病毒包装系统构建了过表达PRRSVORF6基因的重组慢病毒质粒,将该质粒连同辅助质粒共同转染至HEK293T细胞获得重组慢病毒;之后将重组慢病毒感染MARC-145细胞,利用嘌呤霉素结合有限稀释法进行筛选,连续筛选3轮后建立了稳定表达PRRSVM蛋白的MARC-145ORF6细胞系;并使用CCK-8试验评估过表达PRRSVM蛋白对MARC-145细胞生长的影响。利用RT-PCR、蛋白免疫印迹(Westernblot)和间接免疫荧光(IFA)评估MARC-145ORF6细胞系的传代稳定性并鉴定M蛋白的亚细胞定位,进一步利用RT-qPCR评估过表达M蛋白对MARC-145细胞的干扰素及相关调节基因的影响;此外,还测定了PRRSV在MARC-145ORF6细胞系、MARC-145Flag细胞系和MARC-145细胞中的病毒滴度并绘制多步生长曲线以比较其差异。CCK-8试验结果表明,过表达PRRSVM蛋白对MARC-145细胞活力无显著影响;RT-qPCR、Westernblot和IFA等试验结果表明,MARC-145ORF6细胞系能够表达PRRSV的M蛋白且在传代过程中稳定。此外,稳定表达PRRSVM蛋白显著下调了细胞系的Ⅰ型干扰素及其相关调节基因;多步生长曲线表明,MARC-145ORF6细胞系促进PRRSV增殖,提高其病毒滴度。综上,本研究构建了可以稳定表达PRRSVM蛋白的MARC-145ORF6细胞系,发现其Ⅰ型干扰素水平显著下调且促进PRRSV复制。本研究构建的MARC-145ORF6细胞系将为M蛋白功能的深入研究提供重要生物材料。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒过表达细胞系 ORF6基因 M蛋白 MARC-145细胞

加味生脉方改善模拟急进高原大鼠血气和心肌损伤及机制探索

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中药药理与临床 2024年

作者：李方扬党万云张程伍振辉茹毅高熔吴香军王一豪李茂星王宇光高月军事医学研究院辐射医学研究所广东药科大学药学院

目的：基于网络药理学和动物实验，探讨加味生脉方治疗急性高原病(acute mountain sickness，AMS)大鼠的药理作用及机制。方法：在TCMSP、ETCM、GeneCards、DisGenet数据库分别检索加味生脉方的主要活性成分与靶点，AMS疾病靶点。运用ST... 详细信息

目的：基于网络药理学和动物实验，探讨加味生脉方治疗急性高原病(acute mountain sickness，AMS)大鼠的药理作用及机制。方法：在TCMSP、ETCM、GeneCards、DisGenet数据库分别检索加味生脉方的主要活性成分与靶点，AMS疾病靶点。运用STRING数据库进行蛋白质相互作用分析，借助David平台进行基因本体GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。对大鼠进行预防给药7 d，再将大鼠置于低压氧舱中，构建急性高原病大鼠模型，检测大鼠的血气指标、白细胞(WBC)数量、炎症指标、氧化应激指标、心肌酶谱、心肌损伤标志物和心肌线粒体酶活性；用蛋白印迹法检测大鼠心肌组织中相关通路的表达。结果：加味生脉方筛选出62个活性成分，主要有苯代南蛇碱、阿朴天仙子碱、灌木远志酮A、高丽槐素等，与AMS筛选出66个共同作用靶点，核心靶点包括ESR1、CA2、EGFR、CA1、MAPK14等；GO富集在BP(Biological process)中主要体现为丝裂原活化蛋白激酶调控和一氧化氮生物合成调控等；MF(Molecular function)主要体现为受体复合物和溶酶体等；CC(Molecular function)主要体现为类固醇和蛋白磷酸酶等；KEGG富集发现HIF-1、AGE-RAGE等信号通路能在加味生脉方治疗急性高原病中起重要作用。动物实验结果显示，与正常对照组相比，模型对照组血液中血气指标显著降低(P<0.05)，血清中炎症因子、心肌酶谱和心肌损伤标志物含量显著升高(P<0.01)，心肌组织中氧化应激水平显著升高，线粒体呼吸链酶活性显著降低(P<0.01)，P53、HIF-1α、蛋白表达显著上升(P<0.05)，BCL2蛋白表达降低；与模型对照组相比，加味生脉方显著提高血气指标检测值(P<0.05)，降低炎症因子和氧化应激水平，心肌酶谱和心肌损伤标志物含量(P<0.01)，显著提高心肌线粒体呼吸链酶活性，心肌组织中P53、HIF-1α、蛋白表达显著下降(P<0.05)，BCL2蛋白表达显著升高。结论：加味生脉方能改善急性高原病大鼠血气指标，降低炎症因子水平，缓解心肌损伤，其作用机制可能与调节P53/HIF-1α/BCL2途径有关。

关键词：加味生脉方急性高原病网络药理学心肌损伤