检索结果-南通市图书馆

多种有机磷农药胶体金免疫层析竞争法快速检测方法的建立

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：李洋洋崔琳张宇彤郑佳慧艾金霞北华大学医学技术学院

目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法 N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记；优... 详细信息

目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法 N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记；优化试纸条工作参数，并进行性能测试。结果抗血清效价在1：32～1：64之间，蛋白含量约为2 mg/mL。纯化后的多克隆抗体在相对分子质量（Mr）25000和55000处出现目的条带，纯度较好；试纸条反应时间在5～10 min，样本检测限为200 ng/mL，特异性及准确性良好，试纸条有效期为6个月。结论建立了简便快速检测多种有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法，适合大量样本的现场初筛。

关键词：乙酰胆碱酯酶多克隆抗体有机磷农药胶体金试纸条免疫层析法

CRISPR-Cas9基因编辑报道系统应用于AAVS1安全港的定点整合

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

华中科技大学学报（医学版） 2022年第6期51卷 825-829页

作者：曹淳陈耀何佳佳张毛雪钱正韬周小明江苏大学医学院基础医学与医学技术学院镇江212013

目的利用ZFN与TALEN基因编辑以及同源重组技术将Cas9表达框、基因编辑效率荧光报道系统以及真核细胞筛选标记的DNA超长片段定点插入HEK-293T细胞基因组AAVS1安全港,建立可用于衡量CRISPR-Cas9基因编辑的稳定细胞株。方法利用分子克隆技... 详细信息

目的利用ZFN与TALEN基因编辑以及同源重组技术将Cas9表达框、基因编辑效率荧光报道系统以及真核细胞筛选标记的DNA超长片段定点插入HEK-293T细胞基因组AAVS1安全港,建立可用于衡量CRISPR-Cas9基因编辑的稳定细胞株。方法利用分子克隆技术构建AAVS1-all-in-one-CRISPR质粒。利用脂质体将识别并切割AAVS1基因组序列的ZFN和TALEN质粒以及AAVS1-all-in-one-CRISPR质粒共转染入HEK-293T细胞。使用嘌呤霉素筛选获得单克隆细胞后,利用杀稻瘟菌素S筛选、红色荧光检测、Cas9 Western blot以及基因组PCR鉴定等方法获得CRISPR-Cas9基因编辑报道系统完整整合入AAVS1安全港的稳定细胞株。继而,将EGFP修复模板单链DNA及EGFP sgRNA瞬时转染入这些稳定细胞株,对失去荧光的EGFP进行基因编辑,恢复其发光功能,并通过荧光检测技术验证基因编辑结果。结果成功获得3株同时具有嘌呤霉素和杀稻瘟菌素S抗性以及表达红色荧光蛋白的单克隆细胞,Western blot证实其成功表达Cas9蛋白,基因组PCR鉴定目的基因成功整合入基因组AAVS1位点。经EGFP基因编辑后,细胞恢复绿色荧光。结论利用ZFN与TALEN将完整的CRISPR-Cas9基因编辑报道系统成功整合入HEK-293T细胞基因组的AAVS1安全港,整合DNA片段长度达11.5 kb,并利用Cas9成功编辑EGFP报道基因。

关键词： AAVS1 CRISPR ZFN TALEN 基因编辑

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

多菌灵人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

细胞与分子免疫学杂志 2023年

作者：张宇彤李洋洋郑佳慧艾金霞北华大学医学技术学院

目的合成多菌灵人工抗原，制备多菌灵多克隆抗体并鉴定其特性。方法利用混合酸酐法引入羧基制备多菌灵半抗原。将小分子半抗原与大分子载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成多菌灵人工抗原和包被抗原，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳... 详细信息

目的合成多菌灵人工抗原，制备多菌灵多克隆抗体并鉴定其特性。方法利用混合酸酐法引入羧基制备多菌灵半抗原。将小分子半抗原与大分子载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成多菌灵人工抗原和包被抗原，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行鉴定。用制备的人工抗原免疫小鼠获得抗多菌灵多克隆抗体，利用间接ELISA对抗体效价以及特异性进行测定。结果成功制备多菌灵人工抗原。免疫小鼠后获得的抗体效价可达1：12800。抗体对多菌灵的半数抑制剂量(IC50)为0.107μg/mL，且与苯菌灵、噻菌灵的交叉反应率均＜1%。结论成功获得高敏感性、高特异性的多克隆抗体，为多菌灵残留快速检测方法的建立奠定了基础。

关键词：多菌灵人工抗原多克隆抗体

PCR与G-四联体联用可视化鉴别人参与西洋参

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

食品与发酵工业 2023年

作者：刘墨祎汪香君汪洺卉李迎刘丽梅北华大学医学技术学院

人参和西洋参作为我国常用名贵中药，其价值很高，由于它们同为人参属近缘物种，因此二者在形态和化学成分方面较为相似。然而人参和西洋参的药性和药效有较大区别，二者在临床上不可混用，所以对二者进行鉴定就尤为重要。该研究基于人... 详细信息

人参和西洋参作为我国常用名贵中药，其价值很高，由于它们同为人参属近缘物种，因此二者在形态和化学成分方面较为相似。然而人参和西洋参的药性和药效有较大区别，二者在临床上不可混用，所以对二者进行鉴定就尤为重要。该研究基于人参与西洋参基因组DNA上的特异性snp位点，设计了5’端含有G-四联体互补序列的上下游引物，通过PCR(polymerase chain reaction)扩增出大量含G-四联体的双链DNA，与氯高铁血红素(Hemin)结合形成具有过氧化物酶活性的DNA酶(DNAzyme)，并在H?O?存在的情况下催化2，2’-联氮-双（3-乙基-苯并噻唑琳-6-磺酸）二胺盐(ABTS)发生颜色变化。通过对PCR体系以及显色体系的优化，达到快速、简便地鉴别人参与西洋参，灵敏度可达到0.1 ng/μL。建立了鉴别人参和西洋参的PCR与G-四联体联用的可视化鉴别方法，为人参与西洋参的鉴别提供了新的途径。

关键词： PCR G-四联体人参西洋参可视化鉴别

PCR与G-四链体联用可视化鉴别人参与西洋参

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

食品与发酵工业 2023年第17期49卷 69-74页

作者：刘墨祎汪香君汪洺卉李迎刘丽梅北华大学医学技术学院吉林吉林132013

人参和西洋参作为我国常用名贵中药,其价值很高,由于它们为人参属近缘物种,因此二者在形态和化学成分方面较为相似。然而人参和西洋参的药性和药效有较大区别,二者在临床上不可混用,所以对二者进行鉴定就尤为重要。该研究基于人参与西... 详细信息

人参和西洋参作为我国常用名贵中药,其价值很高,由于它们为人参属近缘物种,因此二者在形态和化学成分方面较为相似。然而人参和西洋参的药性和药效有较大区别,二者在临床上不可混用,所以对二者进行鉴定就尤为重要。该研究基于人参与西洋参基因组DNA上的特异性snp位点,设计了5′端含有G-四链体互补序列的上下游引物,通过PCR扩增出大量含G-四链体的双链DNA,与氯高铁血红素(Hemin)结合形成具有过氧化物酶活性的DNA酶(DNAzyme),并在H_(2)O_(2)存在的情况下催化ABTS发生颜色变化。通过对PCR体系以及显色体系的优化,达到快速、简便地鉴别人参与西洋参,灵敏度可达到0.1 ng/μL。研究建立了针对人参和西洋参的PCR与G-四链体联用的可视化鉴别方法,为人参与西洋参的鉴别提供了新的途径。

关键词： PCR G-四链体人参西洋参可视化鉴别

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

核盘菌角质酶的克隆、表达及活性分析

生物工程学报 2022年第1期38卷 386-395页

作者：吕蕊花史琳娜张喜荣冯昭陕西中医药大学医学技术学院陕西咸阳712046

角质酶可降解脂肪族或芳香族聚酯,对聚对苯二甲酸乙二醇酯也具有较好的降解作用,但目前市面上角质酶产品非常稀缺,因此寻求一种高效表达的角质酶用于工程酶的开发非常有必要。本研究从核盘菌中克隆得到8个角质酶基因,利用PCR结合RT-PCR... 详细信息

角质酶可降解脂肪族或芳香族聚酯,对聚对苯二甲酸乙二醇酯也具有较好的降解作用,但目前市面上角质酶产品非常稀缺,因此寻求一种高效表达的角质酶用于工程酶的开发非常有必要。本研究从核盘菌中克隆得到8个角质酶基因,利用PCR结合RT-PCR技术筛选出主效基因SsCut-52,利用大肠杆菌Escherichia coli BL21将SsCut-52进行异源表达并通过镍柱亲和层析的方法分离纯化,研究重组酶的特性及其致病性。SsCut-52全长为768 bp,N端有17个信号肽,进化树分析显示其氨基酸序列和葡萄孢属(Botrytis)角质酶同源性最高,和蜡盘菌属(Rutstroemia)角质酶亲缘关系也较近。SsCut-52在核盘菌侵染植物的过程中高效表达,在菌丝形成菌核的过程中表达量也高于其他角质酶基因。异源表达检测结果显示,角质酶以包涵体的形式存在,复性的SsCut-52在pH 6.0时活性最高,比活力达到3.45 U/mg,在pH为4.0–10.0时活性均较高。最适温度为20–30℃,当温度高于50℃时该酶的残余活性低于60%。植物叶片侵染结果表明,SsCut-52对核盘菌侵染板蓝根叶片具有一定的促进作用。

关键词：核盘菌角质酶硝基苯丁酸酯原核表达蛋白活性

吲哚-3-甲醛对志贺菌感染的保护作用及其机制研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2022年第10期62卷 4019-4029页

作者：陈泳焰吴小小杨欢徐州医科大学医学技术学院江苏徐州221004

【目的】探究吲哚-3-甲醛(indole-3-carboxaldehyde,I3A)对志贺菌感染性结肠炎的缓解作用及其机制研究。【方法】体外实验,通过微量肉汤稀释法测定I3A对志贺菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和I3A的抗菌活性,运... 详细信息

【目的】探究吲哚-3-甲醛(indole-3-carboxaldehyde,I3A)对志贺菌感染性结肠炎的缓解作用及其机制研究。【方法】体外实验,通过微量肉汤稀释法测定I3A对志贺菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和I3A的抗菌活性,运用酶标仪测定600 nm处不同浓度I3A作用的菌液吸光度(A_(600)),并通过平板菌落计数检测志贺菌量。体内实验,将18只小鼠随机分为对照(NC)组、SF301组和SF301+I3A组。然后SF301+I3A组进行连续8 d的200µL I3A灌胃处理,同时NC组和SF301组用200µL无菌水灌胃处理,SF301组和SF301+I3A组于灌药第4天制备志贺菌感染性结肠炎小鼠模型,体重和疾病活动指数(disease activity index,DAI)用于评价小鼠状况。上述实验结束后将所有小鼠处死,取中段结肠进行组织病理学检测观察炎症情况,下段结肠检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平,粪便、盲肠内容物检测载菌量。同时进行14 d的I3A处理小鼠监测I3A的体内应用安全性。【结果】体外实验:I3A的MIC为128µg/mL,不同浓度的I3A涂板计数和A_(600)结果与对照组比较,均有统计学差异(均P0.05)。【结论】本研究证明I3A在志贺菌感染性结肠炎中对肠道具有保护作用,I3A可通过抑制志贺菌载菌量、降低结肠损伤和炎症水平来缓解志贺菌感染性结肠炎,并且I3A在体内没有显示毒性。

关键词：吲哚-3-甲醛志贺菌结肠炎炎症反应

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

桃仁及苦杏仁DNA检测试剂盒的研制与评价

中国药学杂志 2022年第6期57卷 478-485页

作者：宋顺佳姜菲菲关奕泽赵远贾慧建邵学超艾金霞孙丽媛北华大学医学技术学院吉林吉林132013

目的本研究旨在研制一种快速检测试剂盒,鉴定桃仁及苦杏仁DNA成分,并对其进行性能评价。方法建立DNA提取方法,确保有效提取桃仁及苦杏仁基因组DNA,紫外分光光度法测其浓度及纯度。美国国立生物技术信息中心(NCBI)查询并比对桃仁及苦杏仁... 详细信息

目的本研究旨在研制一种快速检测试剂盒,鉴定桃仁及苦杏仁DNA成分,并对其进行性能评价。方法建立DNA提取方法,确保有效提取桃仁及苦杏仁基因组DNA,紫外分光光度法测其浓度及纯度。美国国立生物技术信息中心(NCBI)查询并比对桃仁及苦杏仁的ITS序列,针对特异性位点,NCBI Primer-Blast设计种属特异性引物。建立并优化聚合酶链式反应(PCR)检测体系,DH5α感受态细胞克隆特异性片段,测序验证体系准确性,制备阳性对照。组装DNA检测试剂盒,对其特异性、稳定性及重复性进行评价,并对市售桃仁和苦杏仁样品进行检测。结果所建立DNA提取方法,提取效率高,DNA质量浓度高于100 ng·μL^(-1),A_(260/280)处于1.80~2.10之间。该试剂盒可准确鉴定桃仁及苦杏仁DNA成分,检测灵敏度高,特异性强,最低检测限为1 ng·μL^(-1)。反复冻融20次后仍可有效检测,可于-20℃保存1年。20个市售样品中检出1个桃仁伪品及2个苦杏仁伪品,其余均为正品。结论桃仁及苦杏仁DNA检测试剂盒特异性强、灵敏性高、稳定性好,具有良好重复性,可快速鉴定桃仁及苦杏仁,为桃仁中药材市场质量安全管理提供有力支持。

关键词：桃仁苦杏仁 ITS 试剂盒聚合酶链式反应

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

PCR-核酸试纸条快速鉴定皮氏罗尔斯顿菌

南方医科大学学报 2022年第12期42卷 1867-1874页

作者：王丹赵潇颖姜菲菲孙丽颖许萌宿建胜赵云冬北华大学医学技术学院吉林吉林132013

目的基于PCR-核酸试纸条技术,建立快速检测制药用水中皮氏罗尔斯顿菌的方法。方法利用煮沸法提取皮氏罗尔斯顿菌基因组DNA,以皮氏罗尔斯顿菌16S rDNA为靶基因使用NCBI primer-BLAST 5.0设计一对特异性引物,经克隆转入大肠杆菌感受态细胞... 详细信息

目的基于PCR-核酸试纸条技术,建立快速检测制药用水中皮氏罗尔斯顿菌的方法。方法利用煮沸法提取皮氏罗尔斯顿菌基因组DNA,以皮氏罗尔斯顿菌16S rDNA为靶基因使用NCBI primer-BLAST 5.0设计一对特异性引物,经克隆转入大肠杆菌感受态细胞DH5α,鉴定PCR产物;分别在引物的5’端标记FITC与Biotin;组装核酸试纸条,建立PCR-核酸试纸条的方法;优化反应体系中胶体金标记的链霉亲和素与抗体浓度的最佳工作量;并对试纸条进行反应原理验证及灵敏度、特异性、稳定性评价;对某生物科技有限公司制药用水检测出的7株皮氏罗尔斯顿菌进行实验并利用MEGA构建进化树,对污染溯源进行分析。结果煮沸法提取基因组浓度较好,纯度1.8~2.0;PCR产物经克隆转化、测序比对,与GenBank已登记的皮氏罗尔斯顿菌16S rDNA相似度为100%;利用胶体金放大原理,每100μL胶体金溶液中,加入3.5μL链霉亲和素进行标记,硝酸纤维素膜上检测线为2.0 mg/mL抗FITC抗体,质控线为1.2 mg/mL生物素化BSA,与阳性扩增产物结合产生红色条带;按照优化条件进行试纸条组装,每100μL样品展开液中加入8μL PCR产物,反应5 min后观察结果;核酸试纸条特异性结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致,仅有皮氏罗尔斯顿菌为阳性结果,不动杆菌、气单胞菌、假单胞菌、非脱羧勒克氏菌均为阴性结果;核酸试纸条灵敏度评价,将DNA浓度降至10-5ng/μL时,试纸条检测线仍有条带,较琼脂糖凝胶电泳结果灵敏度高1000倍;核酸试纸条稳定性评价,将试纸条在3、6、9、12月进行检测,稳定性较好。结论建立PCR-核酸试纸条技术检测制药用水中皮氏罗尔斯顿菌,具有简单快速、特异性强、灵敏度高、成本较低等优点,适用于制药企业对制药用水的日常检测。

关键词：皮氏罗尔斯顿菌制药用水 PCR-核酸试纸条药品污染菌