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市售天然橡胶胶乳和人工合成聚氨酯材质避孕套的生物安全性研究

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四川大学学报（医学版） 2024年第4期55卷 958-963页

作者：殷漫邓曌曦苗娅莉张晓梅成都上锦南府医院/四川大学华西医院上锦医院麻醉手术中心成都611730 四川大学华西基础医学与法医学院实验动物中心成都610041 四川大学华西第二医院妇产科成都610041

目的调查研究市售天然橡胶胶乳和人工合成聚氨酯材质避孕套的生物安全性。方法天然橡胶胶乳避孕套品牌A1、品牌A2,聚氨酯避孕套品牌B1、品牌B2,购自成都大型连锁药店,每个品牌避孕套随机选3个包装。参照国家标准检测避孕套浸提液对小... 详细信息

目的调查研究市售天然橡胶胶乳和人工合成聚氨酯材质避孕套的生物安全性。方法天然橡胶胶乳避孕套品牌A1、品牌A2,聚氨酯避孕套品牌B1、品牌B2,购自成都大型连锁药店,每个品牌避孕套随机选3个包装。参照国家标准检测避孕套浸提液对小鼠成纤维细胞L-929的毒性反应,对避孕套对兔阴道和阴茎的刺激反应进行大体观察和组织病理学(HE染色)评价(每个品牌用3只兔),以及评价避孕套对豚鼠皮肤的致敏作用;制备避孕套浸提液,并连续灌注SD大鼠阴道30 d(每个品牌用5只大鼠),观察浸提液对大鼠生殖系统(子宫)的影响。结果品牌A1、品牌A2的浸提液体积分数为100%、50%时,具有明显的细胞毒性,其光密度(optical density, OD)值低于空白对照组和品牌B1、品牌B2浸提液组(P0.05)。品牌A1组兔阴道有3例、品牌A2组兔阴道有1例出现充血;品牌A1组有2例、品牌A2组有1例兔阴茎在实验过程出现短暂极轻微红斑;组织病理学检查发现,品牌A1有3例、品牌A2有2例兔阴道组织有炎细胞散在浸润,固有层内血管轻微充血,品牌A1有1例兔阴茎真皮内见毛细血管周围小灶性淋巴细胞,品牌A2组兔阴茎组织未见明显病理改变。3例品牌A1组和2例品牌A2组大鼠子宫有充血。聚氨酯品牌组兔阴道均未见明显充血和明显病理改变,兔阴茎未见红斑和明显病理改变,大鼠子宫均未见明显充血。4组浸提液对豚鼠皮肤均未产生明显致敏现象。结论不同材质、不同品牌避孕套的生物安全性存在明显差异,避孕套上市后的产品质量需要得到监管部门更多的关注。

关键词：避孕套天然橡胶胶乳人工合成聚氨酯生物安全性评价

Ezrin对小鼠卵母细胞成熟及早期胚胎发育的影响

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华北农学报 2024年第4期39卷 231-238页

作者：谢辉辉童彬彬李巧丹潘富强张博超廖洪艳贾雨珂崔剑坤李运生刘亚安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 肥东县动物卫生监督所安徽合肥231600 中国科学技术大学实验动物中心安徽合肥230026

旨在探究Ezrin对小鼠卵母细胞成熟、受精及早期胚胎发育的影响,揭示其可能作用机制。分别向小鼠GV期卵母细胞和原核期胚胎注射Ezrin的siRNA(si-Ez)或阴性对照siRNA(si-NC),观察对小鼠卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育的影响,并分别通... 详细信息

旨在探究Ezrin对小鼠卵母细胞成熟、受精及早期胚胎发育的影响,揭示其可能作用机制。分别向小鼠GV期卵母细胞和原核期胚胎注射Ezrin的siRNA(si-Ez)或阴性对照siRNA(si-NC),观察对小鼠卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育的影响,并分别通过扫描电镜和免疫荧光染色的方法观察GV期注射si-Ez对小鼠成熟卵母细胞表面微绒毛生长、纺锤体定位和皮质颗粒迁移的影响。结果显示,GV期敲低Ezrin可显著降低小鼠卵母细胞成熟率,极显著降低受精后早期胚胎的囊胚率,虽可降低成熟卵母细胞的受精率,但差异不显著;在原核期敲低Ezrin,可极显著降低小鼠囊胚细胞数,桑椹胚存活率和囊胚率虽有下降趋势,但与对照组无显著差异;扫描电镜观察发现,敲低小鼠GV期卵母细胞Ezrin后显著降低了MⅡ期卵母细胞表面微绒毛的长度和密度;免疫荧光结果显示,敲低小鼠GV期卵母细胞Ezrin影响了纺锤体和皮质颗粒的迁移。结果表明,Ezrin通过影响微绒毛形成、纺锤体定位和皮质颗粒的正常迁移阻滞了小鼠卵母细胞成熟,进而影响了受精和早期胚胎发育。

关键词：小鼠 Ezrin 卵子成熟胚胎发育

兔膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞分离培养方法的研究

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生物骨科材料与临床研究 2024年第1期21卷 14-18,25页

作者：陈芳朱以良张传成刘琴喻晶杨丽君张宜中部战区总医院医疗保障中心实验动物室湖北武汉430070 武汉科技大学医学院湖北武汉430065

目的在传统细胞组织块培养方法的基础上进行改进,建立一种简单、可重复性操作的兔膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞分离培养方法。方法通过手术诱导建立兔膝骨关节炎模型,在无菌条件下,快速取出兔膝骨关节炎的滑膜组织,经过冲洗处理后剪成一... 详细信息

目的在传统细胞组织块培养方法的基础上进行改进,建立一种简单、可重复性操作的兔膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞分离培养方法。方法通过手术诱导建立兔膝骨关节炎模型,在无菌条件下,快速取出兔膝骨关节炎的滑膜组织,经过冲洗处理后剪成一定大小碎片,用无菌滤纸吸净组织上附着的水分,接种在培养皿后,进行观察、换液、传代、拍照。将原代培养的细胞传至第三代细胞接种于96孔板中,采用噻唑蓝(MTT)法分别在不同时间梯度检测各孔对应吸光度,制作生长曲线;采用免疫荧光染色法观察细胞中波形蛋白的表达情况。结果培养的细胞为典型的梭形,符合成纤维样滑膜细胞的生长形态特征,免疫荧光染色显示波形蛋白强表达。结论改进后的组织块培养方法简单、操作可重复性强,可以获得大量兔膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞,为后续膝骨关节炎的机理研究提供了大量细胞支持。

关键词：膝骨关节炎兔成纤维样滑膜细胞改良组织块法

IL2rg^(-/-)大鼠支持人RSV在体内的长期感染

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中国实验动物学报 2024年第1期32卷 17-24页

作者：熊芮吴勇杨艳伟屈哲刘甦苏王誉雅马丽颖付瑞彭宜红梁春南范昌发中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所(国家啮齿类实验动物资源库) 北京102629 北京大学医学部基础医学院病原生物学系北京100083 中国食品药品检定研究院安全评价研究所(国家药物安全评价监测中心) 北京100176

目的为了克服已有人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)动物模型的局限性,如半受纳性和感染持续时间短,本文利用TALEN基因编辑技术建立了IL2rg基因敲除(IL2rg^(-/-))的大鼠模型。方法用hRSV滴鼻感染该动物模型,观... 详细信息

目的为了克服已有人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)动物模型的局限性,如半受纳性和感染持续时间短,本文利用TALEN基因编辑技术建立了IL2rg基因敲除(IL2rg^(-/-))的大鼠模型。方法用hRSV滴鼻感染该动物模型,观察感染期(0~35 d)的临床表征、体重及体温变化;记录不同时间点(滴鼻感染后第4、11、20、35天)鼻腔、气管、肺等呼吸道脏器的病毒总拷贝数;在观察终点(滴鼻感染后第35天)对感染动物的靶器官进行病理分析;观察不同时间点(滴鼻感染后第4、20、35天)外周血T、B、NK、NKT细胞的变化及不同时间点多种细胞因子的变化。结果(1)通过鼻内接种hRSV后,纯合的IL2rg基因敲除大鼠的呼吸道内能保持较高的病毒载量,鼻腔中病毒的平均峰值滴度能快速升至1×10^(10 )copies/g,至第5周时,病毒依然能维持复制,病毒载量亦可达到1×10^(7)copies/g。(2)但其鼻、气管和肺组织,无明显病变。(3)感染hRSV的IL2rg^(-/-)大鼠外周血B细胞含量有上升。(4)IL-6和MCP-1两种细胞因子都在感染前期上升,在观察终点回落。结论本研究基于TALEN技术建立了IL2rg^(-/-)大鼠模型,并发现该模型能很好地支持hRSV高水平复制和并长期感染,为抗病毒药物筛选、抗hRSV抗体体内效力评价,提供了良好的动物模型。

关键词： IL2rg-/-大鼠 TALEN基因编辑技术 NK细胞缺陷人呼吸道合胞病毒感染动物模型

缬氨酸对猪原代肝细胞脂质代谢调节基因PPARα、FASN表达的影响

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江西农业大学学报 2024年第2期46卷 427-437页

作者：谢宪兵黄仁祺何玉珠吴国云陈星平郑双艳万小娟南昌大学实验动物科学中心江西南昌330031 南昌大学第二临床学院江西南昌330031 江西农业大学动物科学技术学院/江西省动物营养重点实验室/南昌市动物健康与安全重点实验室江西南昌330045 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047 南昌大学基础医学院江西南昌330006

【目的】研究旨在探究缬氨酸调节猪肝脏脂质代谢相关基因及其参与的调控途径,为揭示缬氨酸调控猪肝脏脂质代谢的分子作用机制提供试验数据和理论依据。【方法】以5日龄三元杂(杜洛克×长白×大白)仔猪原代肝细胞为试验对象,采用0,0.1,1,... 详细信息

【目的】研究旨在探究缬氨酸调节猪肝脏脂质代谢相关基因及其参与的调控途径,为揭示缬氨酸调控猪肝脏脂质代谢的分子作用机制提供试验数据和理论依据。【方法】以5日龄三元杂(杜洛克×长白×大白)仔猪原代肝细胞为试验对象,采用0,0.1,1,10 mmol/L缬氨酸(Val)分别处理原代肝细胞24 h及48 h,通过蛋白免疫印迹(Western-blot)技术检测不同浓度缬氨酸对脂质代谢重要调控基因PPARα及FASN的影响,同时将10 mmol/L缬氨酸处理24 h组与对照组的肝细胞样品进行RNA-Seq转录组测序,结合GO功能与KEGG通路富集分析,筛选出缬氨酸调控肝脏脂类代谢的潜在关键基因及信号通路,最后应用实时荧光定量(qPCR)技术验证差异表达基因。【结果】(1)与对照组相比,10 mmol/L缬氨酸处理原代肝细胞24 h和48 h均显著降低PPARα、FASN基因的蛋白表达(P<0.05);(2)与对照组相比,10 mmol/L缬氨酸处理原代肝细胞24 h组共筛选出418个差异表达基因,其中181个上调,237个下调。(3)GO功能分析发现,差异基因在分子功能方面主要参与蛋白质结合过程、催化活性、分子转导活性和转运蛋白活性。(4)KEGG分析发现,差异基因富集在代谢、疾病、生物系统、细胞信号调控、基因调控、环境调控等6个生物过程。其中脂质代谢是参与代谢生物过程的主要信号通路之一,富集到脂肪酸代谢的FASN、SCD、FADS2、FADS1、HSD17B12等5个差异基因主要参与胰岛素信号通路、AMPK信号通路、PPAR信号通路。【结论】10 mmol/L缬氨酸可显著下调猪原代肝细胞中PPARα及FASN的蛋白表达,调节脂质代谢关键基因的表达及信号通路活性,研究结果为进一步解析支链氨基酸调控脂代谢提供了理论基础。

关键词：缬氨酸猪原代肝细胞脂质代谢转录组测序

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基于CRISPR/Cas9技术进行家猫Fel d1基因编辑的研究

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农业生物技术学报 2024年第6期32卷 1353-1361页

作者：张亚鑫李玲 Farhab MUHAMMAD 吕美芸佰伍加蔡何清袁玉国扬州大学兽医学院/扬州大学动物基因工程重点实验室江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

Fel d1蛋白是家猫(Felis catus)过敏原中最主要的致敏原，可引起人不同程度的过敏反应。Fel d1蛋白由2个异源的二聚体组成，其编码基因分别为chain 1 (CH1)和chain 2 (CH2)。本研究对38只不同品种的家养宠物猫CH1和CH2基因组序列进行生... 详细信息

Fel d1蛋白是家猫(Felis catus)过敏原中最主要的致敏原，可引起人不同程度的过敏反应。Fel d1蛋白由2个异源的二聚体组成，其编码基因分别为chain 1 (CH1)和chain 2 (CH2)。本研究对38只不同品种的家养宠物猫CH1和CH2基因组序列进行生物信息学分析，进一步在CH2外显子位点设计2个单链引导RNA (single-guide RNAs, sgRNAs)，构建打靶载体分别转染猫胎儿成纤维细胞，PCR测序验证靶位点突变效率。结果表明，CH1和CH2序列上分别含有12和51个多态性位点，且这些位点大多在富含GC的内含子2上，其他个别位于外显子2，内含子3和外显子3上。在整体的进化演变中，CH1的保守性要远高于CH2。CRISPR/Cas9打靶载体转染猫胎儿成纤维细胞后突变检测表明，CH2基因编辑效率为40%,2种突变方式均能消除潜在的抗原位点，其中敲除45个碱基的1型突变占比35%，敲除44个碱基的2型突变占比5%。本研究为进一步利用该CRISPR/Cas9打靶载体获得Fel d1基因突变细胞株进行体细胞核移植或胚胎注射获得低过敏原猫提供参考。

关键词： Fel d1基因 CRISPR/Cas9 猫基因编辑

光遗传学在口腔和颌面部研究中的应用（英文）

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Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 2024年第8期 656-672页

作者：张芩梦宋璐瑶傅梦蝶贺瑾杨国利姜治伟浙江大学医学院附属口腔医院浙江省口腔疾病临床研究中心浙江省口腔生物医学研究重点实验室浙江大学肿瘤中心浙江大学医学院

光遗传学通过光学和基因工程相结合对特定的基因表达和生物功能进行控制，具有精确的时空控制、无创和高效等优点。蛋白质被植入经基因改造的光感传感器后，在光刺激下调节构象的变化。因此，光遗传学技术可在从亚细胞和细胞水平到神经... 详细信息

光遗传学通过光学和基因工程相结合对特定的基因表达和生物功能进行控制，具有精确的时空控制、无创和高效等优点。蛋白质被植入经基因改造的光感传感器后，在光刺激下调节构象的变化。因此，光遗传学技术可在从亚细胞和细胞水平到神经回路和行为模型等不同层面上为口腔生物学研究提供新的见解。本综述介绍了光遗传学的起源和光遗传学方法在口腔颌面研究中的最新进展，着重描述了通道视紫红质（ChR）、古紫质（Arch）和氯视紫红质（NpHR）等光遗传学工具在神经科学基础机制研究中的应用，以及在体内建立不同的口腔行为测试模型（口面部运动、舔舐、进食和饮水），同时回顾了光遗传学在三叉神经痛和颌面蜂窝织炎的临床前研究中的协同和拮抗作用。此外，在转化研究中，光遗传学工具被用于控制牙髓干细胞的神经源性分化。虽然光遗传学工具的应用范围在不断扩大，但其在口腔研究领域的大型动物实验和临床研究中的应用还很有限。光遗传学潜在的应用方向包括探索2019冠状病毒病（COVID-19）患者味觉丧失的治疗策略、研究口腔细菌生物膜、增强颅颌面和牙周组织再生，以及阐明干槽症、口干症和灼口综合征的可能发病机制。

关键词：激光细胞分化细菌毒力神经系统神经生理学行为科学

山东、广西地区新型鹅细小病毒全基因组扩增及遗传进化分析

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中国家禽 2024年第6期46卷 44-55页

作者：乔丹丹刘婷隽陈全刚李德宝周婕董淑红胡安康徐州医科大学实验动物中心江苏徐州221004 徐州生物工程职业技术学院动物工程学院江苏徐州221006

为监测新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)的流行和变异情况,研究采集了山东和广西部分地区的鸭短喙综合征病料进行病原检测、全基因组扩增及序列比对分析。结果显示:共分离两株NGPV,山东分离株命名为SD202304,广西分离株命名... 详细信息

为监测新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)的流行和变异情况,研究采集了山东和广西部分地区的鸭短喙综合征病料进行病原检测、全基因组扩增及序列比对分析。结果显示:共分离两株NGPV,山东分离株命名为SD202304,广西分离株命名为GX202304,两株病毒与2021年NGPV分离株HNXY21亲缘关系最近,全基因组序列相似性为99.1%;GX202304株末端重复序列(Inverted terminal repeat,ITR)有一段未见报道的51 bp基因插入;VP3编码氨基酸序列比对显示,在第290位GX202304株和SD202304株有一个苏氨酸到丙氨酸的突变,这是NGPV近年来发生的新变异位点。研究表明,从山东、广西地区分离到的两株NGPV存在51 bp新的基因插入片段和VP3新的突变位点,结果为我国NGPV感染的防控提供科学依据。

关键词：新型鹅细小病毒全基因组序列鸭变异

基于非标记分析方法应用四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱三合一高分辨质谱仪鉴定中国仓鼠卵巢细胞膜蛋白

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新发传染病电子杂志 2024年第2期9卷 34-40页

作者：刘雅雯梁雄顺胡绪乔刘小倩徐万娜洪文旭深圳市慢性病防治中心中心实验室广东深圳518020 汕头大学公共卫生学院广东汕头515041

目的探讨应用四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱(Orbitrap fusion lumos)三合一高分辨质谱仪鉴定中国仓鼠卵巢(Chinese hamster overy,CHO)细胞的全蛋白质组和膜蛋白质组的非标记(label-free)分析方法,并评价其应用效果,为研究膜蛋白相... 详细信息

目的探讨应用四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱(Orbitrap fusion lumos)三合一高分辨质谱仪鉴定中国仓鼠卵巢(Chinese hamster overy,CHO)细胞的全蛋白质组和膜蛋白质组的非标记(label-free)分析方法,并评价其应用效果,为研究膜蛋白相关传染病的发生机制提供方法学基础。方法贴壁培养中国仓鼠卵巢细胞,提取、富集和酶解处于对数生长期细胞的全蛋白和膜蛋白,用高效液相色谱仪联用四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱三合一高分辨质谱仪对酶解后的多肽进行分析,利用Maxquant软件和Uniprot数据库进行搜库及鉴定,最后对鉴定膜蛋白进行基因本体论(gene ontology,GO)功能分类。结果全蛋白组一共检测出14 300个肽段,搜库得到2708个蛋白,其中可信蛋白2002个(FDR1);膜蛋白组一共检测出13 179个肽段,搜库得到2594个蛋白,其中可信蛋白1873个。在鉴定的全蛋白组和膜蛋白组中定量结果前20的蛋白中,全蛋白组中与膜相关的蛋白有4个,占比20%;膜蛋白组中与膜相关的蛋白有10个,占比50%。在膜蛋白组中,GO功能分类表明分子功能上主要涉及结合和催化活性,在生物学进程上主要涉及细胞进程、代谢过程等。结论膜蛋白组中与膜相关的蛋白显著高于本实验的全蛋白组,基于非标记分析方法应用Orbitrap fusion lumos的分析技术是鉴定细胞膜蛋白的有效方法。

关键词：中国仓鼠卵巢细胞膜蛋白质非标记方法四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱高分辨质谱仪