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沉默调节蛋白1促进体外神经元的轴突生长

中国神经精神疾病杂志 2014年第6期40卷 321-324页

作者：梁海乾李晓红王景景涂悦陈翀张赛脑创伤与神经疾病研究所武警后勤学院附属医院脑科医院天津300162

目的探讨沉默调节蛋白1(Sirt1)对神经元轴突生长的影响。方法体外原代分离培养胚胎海马神经元,观察Sirt1在72 h神经元的分布表达;通过RNAi技术下调Sirt1基因,观察其对72 h神经元轴突长度的影响;通过质粒转染过表达Sirt1基因或药物白藜芦... 详细信息

目的探讨沉默调节蛋白1(Sirt1)对神经元轴突生长的影响。方法体外原代分离培养胚胎海马神经元,观察Sirt1在72 h神经元的分布表达;通过RNAi技术下调Sirt1基因,观察其对72 h神经元轴突长度的影响;通过质粒转染过表达Sirt1基因或药物白藜芦醇(RES)激活Sirt1蛋白,检测其对72 h神经元轴突长度的影响。结果免疫荧光染色结果显示Sirt1位于海马神经元的生长圆锥以及胞体和突起,尤其是轴突末端;与正常对照组(Sirt1正常表达组)相比,Sirt1表达下调可显著缩短72 h海马神经元轴突的长度[由(178.3±3.2)μm缩短到(110.2±18.30)μm,P神经元轴突的长度[由(178.3±3.2)μm增长到(310.6±39.5)μm,P神经元轴突的长度[由(292.8±11.2)μm增长到(525.1±49.7)μm,P神经元的轴突生长中起着重要的作用,可作为轴突再生一个潜在的治疗靶点。

关键词： Sirt1 轴突生长白藜芦醇神经元

糖化β-淀粉样蛋白对阿尔茨海默病样大鼠认知功能的影响

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新乡医学院学报 2019年第6期36卷 511-516页

作者：夏天光刁云锋毕莹张健陈江龙董化江董月青武警后勤学院附属医院脑创伤与神经疾病研究所

目的探讨糖化β-淀粉样蛋白(Aβ-AGE)对阿尔茨海默病样大鼠认知功能的影响。方法将β-淀粉样蛋白(Aβ)与甲基乙二醛于37℃下温育1个月合成Aβ-AGE。将40只SpragueDawley大鼠随机分为Aβ组、Aβ+小鼠单克隆高级糖化终产物受体抗体(Anti-R... 详细信息

目的探讨糖化β-淀粉样蛋白(Aβ-AGE)对阿尔茨海默病样大鼠认知功能的影响。方法将β-淀粉样蛋白(Aβ)与甲基乙二醛于37℃下温育1个月合成Aβ-AGE。将40只SpragueDawley大鼠随机分为Aβ组、Aβ+小鼠单克隆高级糖化终产物受体抗体(Anti-RAGE)组、Aβ-AGE组、Aβ-AGE+Anti-RAGE组,每组10只。行立体定向左侧侧脑室注射制备阿尔茨海默病样模型,其中Aβ组大鼠给予Aβ5μg,Aβ+Anti-RAGE组大鼠给予Aβ5μg和RAGE抗体Anti-RAGE50μg,Aβ-AGE组大鼠给予Aβ-AGE5μg,Aβ-AGE+Anti-RAGE组大鼠给予Aβ-AGE5μg和Anti-RAGE50μg。注射后第2~7天进行Morris水迷宫实验,记录大鼠寻找隐匿平台的潜伏期;注射后第9天,记录各组大鼠穿越平台次数和目标象限停留时间;Westernblot法检测各组大鼠海马组织中高级糖化终产物受体(RAGE)蛋白的表达,免疫组织化学染色法检测各组大鼠大脑皮层中RAGE的表达。结果在注射后第2天,各组大鼠潜伏期比较差异无统计学意义(F=3.767,P>0.05)。注射后第3~7天,各组大鼠潜伏期比较差异均有统计学意义(F=9.167、25.050、56.980、62.380、122.200,P0.05),Aβ-AGE+Anti-RAGE组大鼠海马组织中RAGE蛋白相对表达量显著低于Aβ-AGE组(P脑皮层中RAGE阳性细胞数比较差异有统计学意义(F=76.370、P脑皮层中RAGE阳性细胞数显著高于Aβ组(P<0.01),Aβ+Anti-RAGE组大鼠皮层中RAGE阳性细胞数显著低于Aβ组(P<0.01);Aβ-AGE+Anti-RAGE组大鼠皮层中RAGE阳性细胞数显著低于Aβ-AGE组(P<0.01)。结论Aβ-AGE可能通过激活RAGE信号转导通路介导加重AD样大鼠的认知功能障碍,Aβ-AGE和RAGE可能成为治疗AD的新靶点。

关键词：阿尔兹海默病 β-淀粉样蛋白糖基化晚期糖基化终产物受体

温敏脐带间充质干细胞联合亚低温对重型创伤性脑损伤大鼠认知功能的影响

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中华创伤杂志 2014年第5期30卷 455-459页

作者：李晓红陈翀涂悦王景景张赛孙洪涛武警后勤学院附属医院脑科医院脑创伤与神经疾病研究所天津300162

目的探讨亚低温环境下温敏脐带间充质干细胞（temperature sensitive umbilical cord mesenchymal stem cells，tsUCMSCs）移植对大鼠重型创伤性脑损伤（traumaticbraininjury，TBI）后认知功能的影响。方法选取雄性sD大鼠36只，采用液... 详细信息

目的探讨亚低温环境下温敏脐带间充质干细胞（temperature sensitive umbilical cord mesenchymal stem cells，tsUCMSCs）移植对大鼠重型创伤性脑损伤（traumaticbraininjury，TBI）后认知功能的影响。方法选取雄性sD大鼠36只，采用液压冲击仪（2．5atm）建立重型TBI模型，移植tsUCMSCs后予亚低温治疗。根据干预措施，按随机数字表法将大鼠分为3组：假手术组、TBl组和TBI＋tsUCMSCs＋亚低温组（TBI＋干预组），每组12只。采用Morris水迷宫检测TBI后潜伏期和目标象限停留时间，观察大鼠学习记忆能力。检测长时程电位增强（10ng—termpotentia—tion，LTP）的群体峰电位（populationspike，PS）和兴奋性突触后电位（excitatory postsynaptic potential，EPSP），评估海马的突触可塑性。采用Westernblot检测Tau蛋白在Thr231的磷酸化水平以及糖原合成酶激酶3（glycosesynthasekinase3，GSK3）在Ser9位点的磷酸化水平。结果与假手术组比较，第28天TBI组大鼠的潜伏期延长[（15．9±3．2）S：（8．1±2．7）S]（P〈0．01），目标象限停留时间缩短[（36．3±5．7）S：（14．4±3．0）S]（P〈0．01）；而TBI＋干预组潜伏期缩短[（10．7±2．8）S：（15．9±3．2）S]（P〈0．01]和目标象限停留时间延长[（29．4±4．4）S：（14．4±3．0）S]（P〈0．05）。TBI组大鼠LTP的Ps和EPSP显著上升，而TBI＋干预组抑制PS和EPSP的上升。TBI＋干预组较TBI组Tau蛋白过度磷酸化水平降低[（0．8±1．0）：（1．2±0．1）]（P〈0．05），Ser9-GSK3磷酸化水平升高[（3．0±0．4）：（1．3±0．2）]（P〈0．01）。结论tsUCMSCs和亚低温联合治疗可改善TBI所致的认知功能障碍。

关键词：颅脑损伤干细胞认知亚低温

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亚低温结合针刺治疗创伤性脑梗死的临床研究

中国针灸 2012年第8期32卷 697-700页

作者：张民马铁柱程世翔涂悦张赛武警部队脑创伤与神经疾病研究所武警后勤学院附属医院脑系科天津300162

目的:观察亚低温结合针刺治疗急性重型颅脑创伤后脑梗死患者的疗效。方法:90例患者随机分为亚低温组、针刺组和综合组,每组30例。3组患者均给予常规基础药物及手术治疗,亚低温组行气管切开、呼吸机辅助呼吸、冰毯降温;针刺组采用醒脑开... 详细信息

目的:观察亚低温结合针刺治疗急性重型颅脑创伤后脑梗死患者的疗效。方法:90例患者随机分为亚低温组、针刺组和综合组,每组30例。3组患者均给予常规基础药物及手术治疗,亚低温组行气管切开、呼吸机辅助呼吸、冰毯降温;针刺组采用醒脑开窍针法,针刺内关、水沟、印堂、三阴交、极泉等穴,并随证加减;综合组行亚低温治疗同时加醒脑开窍针刺治疗。治疗4周后,根据神经功能缺损程度标准(NDS)判定疗效,采用Barthel指数评估病人的日常生活活动能力(ADL)。结果:亚低温组、针刺组和综合组神经功能缺损疗效总有效率分别为66.7%(20/30)、40.0%(12/30)和90.0%(27/30),综合组总有效率均明显高于亚低温组和针刺组(均P创伤后脑梗死患者神经功能缺损,改善日常生活能力,亚低温联合针刺疗效优于单纯亚低温和单纯针刺治疗。

关键词：创伤性脑梗死针刺疗法亚低温

3-D打印胶原蛋白-硫酸肝素仿生脊髓支架的研究

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中国修复重建外科杂志 2015年第8期29卷 1022-1027页

作者：张仁坤涂悦赵明亮陈翀梁海乾王景景张赛李晓红武警后勤学院附属医院脑科医院脑创伤与神经疾病研究所天津市神经创伤修复重点实验室天津300162

目的利用3-D生物打印机制备胶原蛋白-硫酸肝素仿生脊髓支架,为组织工程化治疗脊髓损伤提供细胞载体。方法制备硫酸肝素-胶原蛋白水凝胶,采用3-D打印仿生脊髓支架,扫描电镜观察其结构,排水法计算孔隙率,体外降解实验测量支架p H值和质量... 详细信息

目的利用3-D生物打印机制备胶原蛋白-硫酸肝素仿生脊髓支架,为组织工程化治疗脊髓损伤提供细胞载体。方法制备硫酸肝素-胶原蛋白水凝胶,采用3-D打印仿生脊髓支架,扫描电镜观察其结构,排水法计算孔隙率,体外降解实验测量支架p H值和质量变化。取孕14 d SD大鼠的胎鼠脑皮质分离培养神经干细胞(neural stem cells,NSCs),实验分为2组,A组取仿生脊髓支架体外与NSCs共培养,B组直接将细胞悬液接种于预涂左旋多聚赖氨酸的24孔培养板上。采用光镜和扫描电镜观察细胞黏附与形态变化,MTT检测细胞活力,免疫荧光染色鉴定NSCs的分化情况。结果 3-D打印机成功制备出胶原蛋白-硫酸肝素仿生脊髓支架,扫描电镜显示内部具有纵行排列、平行的微孔结构,孔隙率为90.25%±2.15%;体外降解实验中,支架p H值未发生明显变化,8周左右支架降解完全,符合组织工程支架要求。MTT检测示两组培养1、3、7 d吸光度(A)值比较差异均无统计学意义(P>0.05);光镜观察两组均可见大量神经球分化,神经纤维交织成网状;培养7 d A组扫描电镜观察示细胞黏附于支架上,大量细胞伸出轴突,并且有神经球形成;免疫荧光染色示,两组均可分化为神经元和胶质细胞,定量分析显示A、B组分化率分别为29.60%±2.68%和10.90%±2.13%,差异有统计学意义(t=17.30,P=0.01)。结论 3-D打印的胶原蛋白-硫酸肝素仿生脊髓支架具有良好的生物相容性,能促进NSCs增殖和分化,作为神经组织工程支架具有良好的研究和应用前景。

关键词：仿生脊髓支架 3-D打印神经干细胞生物相容性

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颅脑创伤后脑网络功能障碍的研究现状

中华创伤杂志 2015年第9期31卷 805-807页

作者：张赛董月青武警后勤学院附属医院脑科医院武警部队脑创伤与神经疾病研究所天津300162

创伤性脑损伤（traumaticbraininjury，TBI）后弥漫性轴索损伤（diffuseaxonalinjury，DAI）导致了脑网络的连接功能障碍。近10余年来，TBI对内源性连接网络（intrinsicconnectivitynetworks，ICNs）破坏的相关研究表明，通过弥散MRI扫描可显示大脑结构的破坏，并可以通过功能神经影像对大规模ICNs进行研究从而评估大脑的功能。正常情况下，

关键词：功能障碍网络颅脑创伤后脑弥漫性轴索损伤创伤性脑损伤大脑结构 MRI扫描

温敏干细胞联合亚低温抵抗颅脑创伤后缺氧微环境

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中华神经外科杂志 2012年第10期28卷 1070-1075页

作者：陈舯涂悦孙洪涛李晓红屈阳张赛武警部队脑创伤与神经疾病研究所武警后勤学院附属医院脑系科中心天津300162

目的观察温度敏感型干细胞联合亚低温在缺氧环境中的生长和增殖情况。方法建立一种温度敏感型干细胞株，BrdU标记；体内研究通过建立液压冲击重型颅脑创伤模型、移植温敏干细胞和亚低温治疗，采用免疫组织化学检测损伤近缘BrdU的表达水... 详细信息

目的观察温度敏感型干细胞联合亚低温在缺氧环境中的生长和增殖情况。方法建立一种温度敏感型干细胞株，BrdU标记；体内研究通过建立液压冲击重型颅脑创伤模型、移植温敏干细胞和亚低温治疗，采用免疫组织化学检测损伤近缘BrdU的表达水平；体外研究通过低氧培养或低营养低熔点凝胶培养模型，调整培养箱温度（33℃或37℃），进行细胞计数，免疫细胞荧光检测PCNA或caspase3的表达；采用Westernblot检测体内和体外HIF-1α的表达水平。结果移植第7天，温敏干细胞联合亚低温组损伤近缘的BrdU阳性数量显著增多（P〈0．01）；低氧培养中，亚低温处理组较非处理组的细胞数量和PCNA表达明显增加，而亚低温联合温敏干细胞组的细胞数量和PCNA表达增加最为显著（P〈0．01）；低营养培养环境中，亚低温处理组较非处理组的caspase3表达明显减少，而亚低温联合温敏干细胞组的caspase3表达减少最为显著（P〈0．01）；体内和体外Westernblot结果显示亚低温联合干细胞组HIF-1α表达显著增加（P〈0．01）。结论温敏干细胞联合亚低温治疗可增加移植干细胞抵抗TBI后缺氧微环境的能力和提高移植干细胞的存活率，可为TBI后干细胞移植提供新且更为有效的方案。

关键词：温敏干细胞亚低温缺氧微环境 HIF-α

亚低温联合促红细胞生成素对颅脑创伤大鼠脑保护作用的研究

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中华神经外科杂志 2015年第4期31卷 381-385页

作者：李迪彬涂悦程世翔郝谦谦张赛武警部队脑创伤与神经疾病研究所武警后勤学院附属医院脑科医院天津300162

目的研究亚低温（MHT）联合促红细胞生成素（EPO）对颅脑创伤（TBI）大鼠脑保护的作用及其机制.方法根据是否接受MHT（32 ～33℃,4h）、腹腔注射EPO（5 000 U/kg）治疗,将80只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、常温治疗组、... 详细信息

目的研究亚低温（MHT）联合促红细胞生成素（EPO）对颅脑创伤（TBI）大鼠脑保护的作用及其机制.方法根据是否接受MHT（32 ～33℃,4h）、腹腔注射EPO（5 000 U/kg）治疗,将80只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、常温治疗组、MHT组、EPO组、MHT＋ EPO组,每组16只,颅脑创伤模型参照液压打击法制作,采用神经功能缺陷评分量表进行神经功能评分、利用干/湿重法检测脑组织含水量、Evans蓝测定法检测BBB通透性、HE染色比较颅脑创伤大小、RT-PCR及Western blot法检测Claudin-5表达水平.结果 MHT及EPO均可降低颅脑创伤大鼠神经功能缺陷评分,减轻脑组织水肿,降低血脑屏障（BBB）通透性,上调Claudin-5的表达水平（均P＜0.05）.结论 MHT、EPO对颅脑创伤大鼠均有脑保护作用,且两种治疗联合应用脑保护作用更加显著.上调Claudin-5的表达水平是其发挥脑保护作用的机制之一。

关键词：颅脑损伤低温,人工红细胞生成素大鼠

实时多参数监测技术在神经重症监护中的应用前景

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中华创伤杂志 2014年第6期30卷 484-487页

作者：张赛李晓红武警后勤学院附属医院脑科医院天津300162 武警部队脑创伤与神经疾病研究所

除了原发性损伤外，继发性颅内压增高、缺血缺氧及继发性损伤对创伤性脑损伤（traumaticbrainin—jury，TBI）的预后有决定性作用。及时发现并评估继发性脑损伤的严重程度，不仅可以准确判断预后，还能及时根据病情变化调整治疗方案，... 详细信息

除了原发性损伤外，继发性颅内压增高、缺血缺氧及继发性损伤对创伤性脑损伤（traumaticbrainin—jury，TBI）的预后有决定性作用。及时发现并评估继发性脑损伤的严重程度，不仅可以准确判断预后，还能及时根据病情变化调整治疗方案，最大限度改善预后。实时监测是一种微创技术，目前主要包括颅内压监测、脑氧分压监测、脑血流监测、微透析技术等。实时多参数监测技术因其床旁、动态、连续的监测特点，

关键词：监测技术神经重症监护创伤性脑损伤继发性损伤应用继发性脑损伤判断预后数