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红细胞生成素对骨髓间充质干细胞干性的影响

中华器官移植杂志 2010年第6期31卷 377-378页

作者：叶丽花程范军陈龙鱼强邹灿张有顺武汉大学人民医院血液科 430060 武汉郧阳医学院附属东风医院血液科郧阳医学院附属东风医院实验中心

有研究表明,当体外培养的骨髓间充质干细胞（MSC）形成集落时,其多向分化潜能具有逐渐丧失的倾向,且在体外扩增过程中MSC出现了自发分化的倾向,限制了其在临床上的应用.我们前期实验发现,在体外促红细胞生成素（EPO）能促进MSC的增殖和... 详细信息

有研究表明,当体外培养的骨髓间充质干细胞（MSC）形成集落时,其多向分化潜能具有逐渐丧失的倾向,且在体外扩增过程中MSC出现了自发分化的倾向,限制了其在临床上的应用.我们前期实验发现,在体外促红细胞生成素（EPO）能促进MSC的增殖和迁移能力.本实验拟用EPO作用于MSC,观察其未分化相关转录因子端粒酶逆转录酶（TERT）、POU5fl转录因子-4（OCT4）、性别决定基因相关转录因子-2（SOX2）和多潜能维持因子（Nanog）mRNA的表达情况,探讨EPO对MSC干性的影响.

关键词：骨髓间充质干细胞促红细胞生成素干性相关转录因子端粒酶逆转录酶多向分化潜能性别决定基因体外培养

粒细胞集落刺激因子促进骨髓源间充质干细胞活性的机制

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生理学报 2009年第2期61卷 169-174页

作者：陈龙程范军刘岐焕唐俊明曾琴兵孔霞郭凌郧王家宁郧阳医学院附属东风医院血液科十堰442006 郧阳医学院临床医学研究所十堰442000

本文旨在探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)促进骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)活性的机制。采用经典的全骨髓贴壁法培养MSCs,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞仪分析... 详细信息

本文旨在探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)促进骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)活性的机制。采用经典的全骨髓贴壁法培养MSCs,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞仪分析其表面标记(CD133、CD34、CD90、CD105)等鉴定MSCs特征;以第三代MSCs为实验材料,采用MTT法分析G-CSF(20μg/mL)对MSCs活性的影响。随后以50nmol/L wortmannin(磷酰肌醇-3激酶阻断剂)、50μmol/LPD98059(细胞外信号调节激酶阻断剂)、30μmol/LSB203580(丝裂原活化蛋白激酶阻断剂)、10μmol/LH89[蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂]、20μmol/LY27632(Rho激酶特异抑制剂)、1μmol/Lrapamycin[雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性阻断剂]、10mmol/L straurosporine[蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)阻断剂]、6nmol/LG0697(PKCα抑制剂)、50μmol/L Pseudo Z(PKCζ抑制剂)等分别处理MSCs,观察G-CSF影响MSCs活性的信号机制。结果显示,培养的第三代MSCs呈现出CD90、CD105强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;G-CSF促进MSCs活性,H89、Y27632、PseudoZ不能抑制G-CSF对MSCs的激活作用,wortmannin、rapamycin、PD98059、SB203580、G0697部分抑制G-CSF对MSCs的激活作用,straurosporine可完全抑制G-CSF对MSCs的激活作用。以上结果提示,G-CSF激活MSCs效应与AKT-mTOR-PKC途径密切相关,且PKC处于中心环节。

关键词：粒细胞集落刺激因子间充质干细胞蛋白激酶C

重组人促红细胞生成素促进体外培养的人骨髓间充质干细胞增殖

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中华器官移植杂志 2009年第1期30卷 21-25页

作者：曾琴兵程范军陈龙唐俊明刘歧焕张卫国高清平王家宁郧阳医学院附属东风医院血液科湖北十堰442000 郧阳医学院临床医学研究所郧阳医学院附属东风医院骨科湖北十堰442010 武汉大学人民医院血液科

目的观察重组人促红细胞生成素（rhEPO）对人骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖的影响，并探讨其可能机制。方法抽取健康志愿者的骨髓液，采用贴壁培养法获取第3代MSCs（P3-MSCs），通过细胞形态特征观察、细胞免疫表型检测以及诱导分化的... 详细信息

目的观察重组人促红细胞生成素（rhEPO）对人骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖的影响，并探讨其可能机制。方法抽取健康志愿者的骨髓液，采用贴壁培养法获取第3代MSCs（P3-MSCs），通过细胞形态特征观察、细胞免疫表型检测以及诱导分化的方法鉴定MSCs。取经过鉴定的P3-MSCs，分别与不同浓度（0．5、1、5、10、50IU／ml）rhEPO共培养，应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖；以过量特异性抗体封闭EPO受体（EPOR），再用MTT法观察P3-MSCs增殖情况；采用免疫荧光细胞化学染色法检测P3-MSCs的EPOR表达，用Western印迹检测增殖信号通路蛋白表达。结果贴壁培养获取的P3-MSCs同时高表达CD105和CD90，低表达CD34和CD45，并可被诱导分化为脂肪、成骨及软骨细胞。MTT结果显示，给予EPO后，MSCs的增殖明显增强，以浓度为10IU／ml者的作用最为显著；同时加入抗EPOR抗体封闭EPOR后，MsCs的增殖率明显降低（P〈0．01）。P3-MSCs的EPOR表达阳性；用10IU／ml EPO刺激4d后，EPOR、磷酸化蛋白酪氨酸激酶2（pJAK2）及磷酸化信号转导和转录因子-5（pSTAT-5）的表达均明显上调。结论EPO能促进体外培养的骨髓MSCs增殖，该效应经EPOR介导，并与JAK2-STAT5信号途径有关。

关键词：红细胞生成素重组骨髓间质干细胞细胞增殖

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超声定位下骨内固定物取出术的临床应用

中国超声医学杂志 2008年第9期24卷 851-853页

作者：冉琳王姝彭勤中徐昕张卫国徐华杨华清郧阳医学院附属东风医院超声科郧阳医学院附属东风医院骨关节科郧阳医学院附属东风医院手术室

目的探讨术前超声定位在骨内固定物取出术中的临床应用及价值。方法2005年4月至2007年7月对22例四肢愈合骨折患者,采用超声定位后骨内固定物取出术。其中,内踝骨折10例,肱骨髁骨折6例,胫腓骨骨折1例,股骨骨折2例,髌骨骨折3例。内固定物... 详细信息

目的探讨术前超声定位在骨内固定物取出术中的临床应用及价值。方法2005年4月至2007年7月对22例四肢愈合骨折患者,采用超声定位后骨内固定物取出术。其中,内踝骨折10例,肱骨髁骨折6例,胫腓骨骨折1例,股骨骨折2例,髌骨骨折3例。内固定物为克氏针6例,拉力螺钉13例,张力带钢丝3例。采用术前超声定位标记,术中根据标记取出内固定物。结果超声定位下骨内固定物取出在定位、切口长度、术中出血量、术后疼痛持续时间、关节功能恢复情况等方面较传统内固定物取出方法均有明显改善。结论在超声定位下骨内固定物取出具有定位准确、切口小、创伤小、术中出血少、对手术参与者无放射性损害等优点,适合临床开展。

关键词：超声定位骨内固定物

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促血小板生成素对小鼠骨髓干细胞增殖的影响

中华器官移植杂志 2008年第2期29卷 86-89页

作者：柴海霞程范军高清平陈龙唐俊明刘岐焕王家宁郧阳医学院附属东风医院血液科十堰442008 武汉大学人民医院血液科郧阳医学院临床医学研究所

目的探讨促血小板生成素（TPO）对小鼠骨髓有核细胞（BMNc）的细胞周期及骨髓干细胞增殖的影响。方法将昆明小鼠随机分为实验组与对照组，每组15只。实验组腹腔注射TPO 50μg·kg^-1·d^-1，连用5d；对照组腹腔注射生理盐水0．1ml·g^-1... 详细信息

目的探讨促血小板生成素（TPO）对小鼠骨髓有核细胞（BMNc）的细胞周期及骨髓干细胞增殖的影响。方法将昆明小鼠随机分为实验组与对照组，每组15只。实验组腹腔注射TPO 50μg·kg^-1·d^-1，连用5d；对照组腹腔注射生理盐水0．1ml·g^-1·d^-1。每组分别于最后1次注射后6h、12h及168h收集BMNC，检测BMNC的细胞周期及表达CD34’的抗原绝对数；计数BMNC，以1×10^6细胞／cm^2接种培养并计数原代成纤维样细胞集落形成单位（CFU-F）。结果应用TPO后的细胞周期显示，实验组在6h和12h取材BMNC的G0／G1期细胞百分率较对照组低12％～8％（P〈0．05），而S＋Q期增高12％～8％（P〈0．05）；实验组BMNC表达CD34^＋的抗原绝对数较对照组明显增加1～2倍（P〈0．05）；实验组所获得CFU-F集落数比对照组增加3～9倍（P〈0．01）。结论TPO促进CD34^＋细胞增加的同时，还可促进小鼠BMNC进入细胞周期，促进CFU—F集落数增多，即促进骨髓间充质干细胞（MSC）增殖，有利于改善造血干细胞移植（HSCT）的效果。

关键词：血小板生成素间质干细胞细胞周期细胞增殖

经皮超声引导下125I粒子植入治疗肝脏肿瘤

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中国超声医学杂志 2010年第6期26卷 520-523页

作者：冉琳陈鹏彭勤中李鸿章陈慧萍夏进东陈晓荣郧阳医学院附属东风总医院超声科郧阳医学院附属东风总医院影像部郧阳医学院附属东风总医院肿瘤科

目的评价超声引导下I粒子植入治疗肝脏肿瘤的临床价值。方法对33例肝脏肿瘤患者,在超声引导下,将I粒子植入肝脏肿瘤瘤灶内,I在1.7 cm范围内具有杀灭肿瘤的作用。结果 33例72个病灶,完全缓解(CR)21个,部分缓解(PR)38个,无变化(NC)10个;进... 详细信息

目的评价超声引导下I粒子植入治疗肝脏肿瘤的临床价值。方法对33例肝脏肿瘤患者,在超声引导下,将I粒子植入肝脏肿瘤瘤灶内,I在1.7 cm范围内具有杀灭肿瘤的作用。结果 33例72个病灶,完全缓解(CR)21个,部分缓解(PR)38个,无变化(NC)10个;进展(PD)3个。总有效率81.9%,相应的患者血清中肿瘤标记物水平明显降低。结论经皮超声引导下放射性粒子置人可直观地了解粒子植入针的位置,保证粒子的正确植入,具有安全、微创、高效、治疗时间短、可重复治疗及对手术参与者无放射性损害等优点,因而可被认为是一种较好的局部治疗方法,适合临床开展。

关键词：肝脏肿瘤超声引导近距离照射治疗碘放射性核素

重组人粒细胞集落刺激因子促进骨髓间充质干细胞增殖

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中华器官移植杂志 2006年第9期27卷 532-534页

作者：刘岐焕程范军高清平陈龙唐俊明王家宁郧阳医学院附属东风医院血液科湖北省十堰市442008 武汉大学人民医院血液科郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。方法将昆明小鼠随机分为2组(n=15),G-CSF组采髓前皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)80μg·kg-1·d-1,连用5d,对照组皮下注射等量生理盐... 详细信息

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。方法将昆明小鼠随机分为2组(n=15),G-CSF组采髓前皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)80μg·kg-1·d-1,连用5d,对照组皮下注射等量生理盐水。每组分别于最后一次注射后6h、12h及7d(168h)取小鼠骨髓,分离、培养MSCs,计数成纤维样细胞集落形成单位(CFU-F)的个数;应用流式细胞仪检测单个核细胞(MNCs)细胞周期及CFU-F细胞表面抗原特征。结果应用rhG-CSF后,培养MNCs所获得的CFU-F数目增加(P0.05)。MNCs培养形成的CFU-F,其细胞表面抗原呈CD34-、CD133-、CD90+、CD105+,分别占2.5%、3.1%、67.0%和78.0%。G-CSF组各时间点获得的MNCs,其G0/G1期细胞百分率较对照组低(P<0.05),而S+G2/M期增高(P<0.05),且6h取材者S+G2/M期细胞百分率明显高于12h和7d取材者(P<0.05)。结论rhG-CSF可促进骨髓MNCs进入细胞增殖周期,增殖的高峰在应用G-CSF后6h左右。

关键词：粒细胞集落刺激因子,重组间质干细胞细胞周期细胞增殖

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经胸超声心动图指导儿童房间隔缺损封堵术

临床心血管病杂志 2003年第7期19卷 416-419页

作者：覃丽君欧阳静萍张有为李春华彭勤中杨小武宋金萍武汉大学医学院病理生理学教研室郧阳医学院附属东风医院儿科郧阳医学院附属东风医院放射科郧阳医学院附属东风医院B超室

目的 :评价经胸超声心动图 (TTE)在术前测量房间隔缺损 (ASD)大小、术中监测与指导儿童ASD封堵的作用。方法 :10例ASD儿童采用TTE多个切面综合判断ASD大小、周缘情况及房间隔伸展径。比较ASD之TTE测值与封堵成功所选用的封堵器大小之间... 详细信息

目的 :评价经胸超声心动图 (TTE)在术前测量房间隔缺损 (ASD)大小、术中监测与指导儿童ASD封堵的作用。方法 :10例ASD儿童采用TTE多个切面综合判断ASD大小、周缘情况及房间隔伸展径。比较ASD之TTE测值与封堵成功所选用的封堵器大小之间的关系。在封堵术中TTE监测封堵过程、伞释出后牢固程度及彩色多普勒有无分流。结果 :ASD的TTE测值为 8～ 2 4 (15 .8± 5 .9)mm ,封堵器型号为 8～ 2 8(18.8±6 .0 )mm ,TTE测量的ASD大小与封堵器大小相关良好 ,直线方程Y =4 .36 0 +0 .914X ,相关系数r =0 .90 5(P <0 .0 1)。硬缘ASD的封堵器选择比TTE所测ASD大 1～ 5mm ;封堵器型号的选择多在球囊测值的基础上加 0～ 2mm。所有封堵器牢固 ,无脱落。结论 :TTE封堵术前检查和术中指导ASD封堵器的放置是一种可行、有效。

关键词：房间隔缺损超声心动描记术心脏导管插入术

红细胞生成素对骨髓源间充质干细胞迁移的影响

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中华血液学杂志 2008年第12期29卷 811-814页

作者：陈龙程范军唐俊明张卫国刘歧焕曾琴兵孔霞郭凌郧王家宁郧阳医学院附属东风医院湖北十堰442000 郧阳医学院临床医学研究所

目的利用Transwell体外迁移体系初步探索EPO在骨髓源间充质干细胞（MSC）迁移中的作用及其信号传递机制。方法采用经典的全骨髓细胞贴壁法培养MSC，通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞术分析其表面标志（CD133、CD34、CD90、CD... 详细信息

目的利用Transwell体外迁移体系初步探索EPO在骨髓源间充质干细胞（MSC）迁移中的作用及其信号传递机制。方法采用经典的全骨髓细胞贴壁法培养MSC，通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞术分析其表面标志（CD133、CD34、CD90、CD105）等鉴定MSC特征；以第3代MSC为实验材料，利用Transwell体外迁移体系，先观察不同浓度的rhEPO对MSC迁移的影响，随后在50nm0L／L Wortmannin、50μmoL／LPD98059、10μmoL／LU73122、4μg／ml抗EPO—R IgG、30μmol/LSB203580、10mmol／L Straurosporine、6nmol/L G0697、50μmol/L Pseudo Z等不同的信号转导途径阻断剂的干预下观察EPO对迁移的影响。结果培养的MSC呈现出CD90、CD105强阳性，具有成骨、成脂肪等多向分化能力；MSC体外迁移能力随着rhEP0浓度（1、10、100、1000IU／ml）的递增而逐渐增强，并且rhEP0浓度在100U／ml时，MSC迁移到滤膜上的细胞数接近于峰值；Wortmannin、PD98059、抗EPO—RIgG、Straurosporine、G06976、Pseudoz对MSC迁移均有影响，其中U73122、抗EPO—RIgG、Straurosporine、PseudoZ对MSC迁移阻断的效应最显著。结论EPO—EPO—R所介导的MSC迁移与丝裂原活化蛋白激酶、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C和蛋白激酶C-ζ（PKC-ζ）等信号传递途径有关，且PKC-ζ途径可能处于中心环节。

关键词：间充质干细胞迁移蛋白激酶C 信号转导