检索结果-南通市图书馆

人用狂犬病疫苗原代地鼠肾细胞蛋白质国家标准品的研制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2020年第10期33卷 1186-1191页

作者：石磊泰李加张月兰王辉雷继军郭中平李玉华中国食品药品检定研究院北京102629 北京生物制品研究所有限责任公司北京100176 武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430070 国家药典委员会北京100061

目的研制用于人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)中地鼠肾细胞蛋白质残留量检测(ELISA法)的国家标准品。方法分两步进行协作标定和量值溯源,第一步采用Lowry法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品原液进行赋值,第二步采用ELISA法对原代地鼠肾细胞蛋... 详细信息

目的研制用于人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)中地鼠肾细胞蛋白质残留量检测(ELISA法)的国家标准品。方法分两步进行协作标定和量值溯源,第一步采用Lowry法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品原液进行赋值,第二步采用ELISA法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品进行赋值。随机抽取16支标准品,检测pH值,采用方差分析统计检验均匀性;将标准品分别在4、25和37℃放置不同时间(1、2、3和4周),不同时间点取3支,于-20℃保存,待所有样本放置结束后统一用ELISA法检测蛋白含量,方差分析统计检验稳定性。结果协作标定的数据经统计学分析,原代地鼠肾细胞蛋白质标准品赋值为4.0μg/mL,95%可信限为(4.0±0.5)μg/mL,均匀性及稳定性良好。结论建立了国家原代地鼠肾细胞蛋白质标准品(批号:250024-201901),赋值准确可靠、科学严谨,对人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)的质量控制具有重要意义。

关键词：狂犬病疫苗原代地鼠肾细胞宿主蛋白国家标准品

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

首批Vero细胞蛋白质标准品的研制

中国生物制品学杂志 2020年第9期33卷 1031-1036页

作者：李加石磊泰王玲刘晶晶张月兰王辉雷继军郭中平李玉华中国食品药品检定研究院北京102629 北京生物制品研究所有限责任公司北京100176 武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430207 国家药典委员会北京100061

目的制备首批Vero细胞蛋白质国家标准品,用于人用狂犬病疫苗Vero细胞宿主残留量检测。方法采用Vero细胞分泌蛋白质为原料,加入蔗糖冻干制成Vero细胞蛋白质国家标准品。本标准品的赋值由两步完成:第一步采用Lowry法对Vero细胞蛋白质标准... 详细信息

目的制备首批Vero细胞蛋白质国家标准品,用于人用狂犬病疫苗Vero细胞宿主残留量检测。方法采用Vero细胞分泌蛋白质为原料,加入蔗糖冻干制成Vero细胞蛋白质国家标准品。本标准品的赋值由两步完成:第一步采用Lowry法对Vero细胞蛋白质标准品原液进行蛋白含量测定;第二步采用酶联免疫法以Vero细胞蛋白质标准品原液绘制标准曲线对标准品进行蛋白含量赋值。随机选取16支蛋白质标准品,测定pH值,采用方差分析统计检验其均匀性;随机选取标准品,分别在不同温度(4、25、37℃)下放置不同时间(1、2、3和4周),各时间点取3支,酶联免疫法检测抗原含量,采用方差分析统计检验其稳定性。结果经协作标定,Vero细胞蛋白质标准品的标示量为2.6μg/mL,标准偏差为0.4,95%可信区间为2.51~2.78μg/mL。该批标准品的均匀性及稳定性良好。结论目前该Vero细胞蛋白质标准品已获批使用,批号为250022-201901,该标准品的建立,对提高人用狂犬病疫苗的质量控制具有重要意义。

关键词： Vero细胞标准品人用狂犬病疫苗宿主残留量

新型冠状病毒中和抗体胶体金测试卡检测不同人群中和抗体的可行性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国新药杂志 2021年第19期30卷 1775-1782页

作者：周志军彭焱纪德铭张勇冯璐李陶敬夏冬梅胡勇李策生国药集团武汉血液制品有限公司科研开发部北京天坛生物制品股份有限公司研发中心

目的:比较2种不同原理制备的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）中和抗体胶体金测试卡与SARS-CoV-2假病毒中和实验的相关性,评估半定量的中和抗体胶体金测试卡用于不同人群的SARS-CoV-2中和抗体检测的可行性。方法:分别采用厂家A胶体金测试卡... 详细信息

目的:比较2种不同原理制备的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）中和抗体胶体金测试卡与SARS-CoV-2假病毒中和实验的相关性,评估半定量的中和抗体胶体金测试卡用于不同人群的SARS-CoV-2中和抗体检测的可行性。方法:分别采用厂家A胶体金测试卡（双抗原夹心法）、厂家B胶体金测试卡（竞争阻断法）和SARS-CoV-2假病毒中和法进行检测,比较这2种胶体金方法与中和实验的相关性和敏感度;在确定了测试卡厂家后,检测新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情暴发前制备的静注人免疫球蛋白及特异性免疫球蛋白,考察其特异性;对ELISA高稀释倍数新冠疫苗免疫后血浆进行原倍和稀释品检测,判断是否有hook效应;检测不同ELISA稀释倍数档位的单份免疫后血浆,判断阳性率,观察色度变化;将ELISA低稀释倍数血浆按照比色卡筛选120NT;和300NT;这2个档位血浆,制备混浆,比较胶体金测试卡与ELISA和中和抗体的相关性。结果:厂家A和厂家B对英国国家生物制品标准化和质量控制研究所（NIBSC）第1代国际标准品20/136（抗SARS-CoV-2人免疫球蛋白国际标准品）的检测限分别为0.612 5和5 IU·mL;;对不同档位的混浆（新冠病毒疫苗免疫后血浆及COVID-19康复者恢复期血浆）的检测结果与中和抗体效价相关性好,检测ELISA高稀释倍数（10 000以上）新冠病毒疫苗免疫后血浆未出现hook效应;不同ELISA稀释倍数的单份血浆的阳性率在稀释倍数160以上达到100%,但是色度深浅不一,在稀释倍数640以上色度均一性较高,且色度随着ELISA稀释倍数增高整体逐渐变深。按照比色卡色度筛选的Ppool 120NT;和Ppool 300NT;与中和抗体效价接近。结论:采用双抗原夹心法的厂家A中和抗体测试卡检测COVID-19康复者恢复期血浆和新冠病毒疫苗免疫后血浆的结果与假病毒中和实验效价的相关性优于采用竞争抑制法的厂家B产品及间接ELISA,且检测线的色度深浅与中和抗体水平正相关,可半定量检测用于不同人群的中和抗体筛查。

关键词：新型冠状病毒中和抗体胶体金测试卡假病毒中和实验效价 ELISA稀释倍数检测限免疫后血浆康复者恢复期血浆

ELISA差减分析--一种简便实用的免疫逃逸变异HBsAg检测新方法

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国免疫学杂志 2010年第7期26卷 642-645,654页

作者：李方和李佩珊刘静华彭静张春燕黄永国陈妍华中科技大学同济医学院附属同济医院实验医学研究中心武汉430030 中国医药集团总公司武汉生物制品研究所武汉430030

目的:立足现有实验技术与试剂,建立一项血清免疫逃逸变异HBsAg检测的新方法。方法:以市售ELISA试剂筛选其检测信号在灰区范围的HBV感染者;采用2种不同免疫逃逸变异HBsAg检测能力的ELISA试剂对选留血清进行检测,以"ELISA差减分析"方式确... 详细信息

目的:立足现有实验技术与试剂,建立一项血清免疫逃逸变异HBsAg检测的新方法。方法:以市售ELISA试剂筛选其检测信号在灰区范围的HBV感染者;采用2种不同免疫逃逸变异HBsAg检测能力的ELISA试剂对选留血清进行检测,以"ELISA差减分析"方式确认免疫逃逸变异HBsAg阳性者;以中和实验及雅培化学发光试剂验证检测结果的特异性;并对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性者以PCR及直接测序做HBV DNA分析。结果:自10231例受检者中筛选HBsAgELISA检测信号灰区标本244例;复核检测显示G6ELISA、市售ELISA两者对野生HBsAg检测敏感性分别为0.0625ng/ml,与0.125ng/ml;检测阳性率分别为16.80%(G6ELISA)及5.73%(市售ELISA)。ELISA差减分析确定免疫逃逸变异HBsAg阳性者27例,阳性率为11.07%。对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性血清做进一步考核,抗HBs中和强度为(84.07%±6.32%),中和率100%(13/13);雅培化学发光试剂复核阳性率为94.4%(17/18,阳性者中包括两份单项G6-ELISA检测最低阳性信号标本);HBV DNA阳性率36.9%(7/19),略低于同期HBsAg低信号阳性者(6/14,42.9%,P所依托试剂免疫逃逸变异检测能力不同而有显著差别。

关键词：乙肝病毒基因变异 HBsAg 免疫逃逸变异 ELISA

呼吸道合胞病毒表位重组蛋白F1-F/M2的原核表达、纯化及其免疫原性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2014年第9期27卷 1118-1123页

作者：胡兵方志正湖北省疾病预防控制中心传染病防治研究所湖北武汉430079 武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430060

目的原核表达、纯化呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)表位重组蛋白F1-F/M2,并检测其在小鼠体内的免疫原性,为RSV亚单位疫苗的研制、疫苗所致免疫病理反应机理的研究提供参考。方法利用定点突变技术对原核表达载体pGEX-6... 详细信息

目的原核表达、纯化呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)表位重组蛋白F1-F/M2,并检测其在小鼠体内的免疫原性,为RSV亚单位疫苗的研制、疫苗所致免疫病理反应机理的研究提供参考。方法利用定点突变技术对原核表达载体pGEX-6p-1进行改造,在其GST标签前制造一个HindⅢ酶切位点;从RSV long株中扩增F1片段,从质粒pET28a-G1-F/M2中扩增F/M2基因片段,并在克隆载体pUC19的辅助下,将F1-F/M2基因连接至改造后的pGEX-6p-1载体中,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-F1-F/M2,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经6×His-tag标签蛋白纯化试剂盒纯化后,经尿素浓度梯度透析复性,SDS-PAGE分析其纯度,BCA法检测其浓度,Western blot法分析其反应原性。将纯化的重组蛋白F1-F/M2经铝佐剂乳化后,经腹腔免疫BALB/c小鼠,共3次,间隔10 d,末次免疫后10 d,采用空斑减少试验检测小鼠血清、肺组织匀浆和鼻腔冲洗液中抗RSV中和抗体水平;取小鼠脾脏,分离脾单个淋巴细胞,采用ELISAPOT技术检测重组蛋白诱导产生IFNγ的细胞免疫水平。结果重组表达质粒pGEX-6p-1-F1-F/M2经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白F1-F/M2相对分子质量约为20 800,表达量约占菌体总蛋白的20%,几乎全部以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白的纯度约为90%,浓度为0.42 mg/ml,可与小鼠抗RSV血清发生特异性反应;重组蛋白F1-F/M2能诱导小鼠血清中产生较高滴度的中和抗体(1∶289),肺部组织匀浆中略弱(1∶242),鼻腔冲洗液中未检测到中和抗体;重组蛋白F1-F/M2免疫小鼠的脾淋巴细胞经体外抗原刺激能产生特异性IFNγ斑点。结论成功原核表达了表位重组蛋白F1-F/M2,纯化后的重组蛋白能诱导产生较高滴度的中和抗体及CTL应答,有望开发成RSV亚单位疫苗。

关键词：呼吸道合胞病毒表位重组蛋白原核细胞基因表达纯化免疫原性

不同解离液及解离条件下新型冠状病毒灭活疫苗中铝佐剂的解离效果

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2022年第11期35卷 1287-1292页

作者：施金荣申瑷琳邓涛潘俊杰刘青程小玲罗敏段凯武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430207 国家联合疫苗工程技术研究中心湖北武汉430207

目的探讨不同解离液及解离条件下新型冠状病毒灭活疫苗中铝佐剂的解离效果。方法配制6种解离液(1~6),将新型冠状病毒灭活疫苗成品分别与6种解离液混合,于37℃解离20 h,ELISA法检测抗原含量,解离度最高的为最佳解离液。将新型冠状病毒灭... 详细信息

目的探讨不同解离液及解离条件下新型冠状病毒灭活疫苗中铝佐剂的解离效果。方法配制6种解离液(1~6),将新型冠状病毒灭活疫苗成品分别与6种解离液混合,于37℃解离20 h,ELISA法检测抗原含量,解离度最高的为最佳解离液。将新型冠状病毒灭活疫苗成品与最佳解离液混合,于室温或37℃分别解离2、10和20 h,ELISA法检测A450,以A450最高的解离条件为最佳。对最佳解离液及解离条件进行干扰试验及准确性、精密性、耐用性、适用性验证。结果最佳解离液为解离液5[0.1%(v/v)TritonX-100,0.1 mol/L EDTA,0.05%(v/v)Tween20],最佳解离条件为:37℃解离20 h。添加与未加解离液5的新型冠状病毒灭活疫苗原液检测结果差异无统计学意义(t=0.963,P>0.05);重复检测6次新型冠状病毒灭活疫苗参考品的抗原含量回收率在98.13%~100.63%之间;同一实验员于不同时间及不同实验员于同一时间重复检测6次结果的CV均检测结果的CV均检测过程中终止反应后放置0、10、20 min检测结果的CV均检测结果的CV均研究确定的最佳解离液和解离条件效果较好,解离液干扰小,且准确性、精密性、耐用性和适用性良好,为新型冠状病毒灭活疫苗的质量控制提供了可靠的检测方法。

关键词：解离液解离条件新型冠状病毒灭活疫苗铝佐剂

磁珠法结合实时定量PCR检测新型冠状病毒灭活疫苗中宿主细胞残留DNA的验证及应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2022年第6期35卷 711-717页

作者：周艳萍卢佳李茜林凤杰杨安纳孟胜利王泽鋆申硕武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430207 国家联合疫苗工程技术研究中心湖北武汉430207

目的对磁珠法结合实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测新型冠状病毒(简称新冠)灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞残留DNA(residual cell DNA,rcDNA)进行验证及应用。方法利用磁珠与溶液中DNA的特异性结合来提取样品中rcDNA。... 详细信息

目的对磁珠法结合实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测新型冠状病毒(简称新冠)灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞残留DNA(residual cell DNA,rcDNA)进行验证及应用。方法利用磁珠与溶液中DNA的特异性结合来提取样品中rcDNA。将已知浓度的细胞DNA标准品系列稀释后,根据DNA标准品的循环阈值与浓度之间的线性关系,对未知样品中的rcDNA进行定量分析。对方法进行线性和范围、专属性、准确度、精密度验证,并使用该方法对新冠灭活疫苗(Vero细胞)生产过程样品进行rcDNA及其片段大小检测。结果标准品检测范围为0.0003~30 pg/μL,该方法的标准曲线决定系数(R;)>0.99,扩增效率为90%~110%。质控样品回收率为50%~150%,相对标准偏差(RSD)均小于30%。试验结果的各项参数均符合标准。结论磁珠法可解决rcDNA检测中样品前处理提取DNA的技术难点,qPCR能够简便、快速、准确地对新冠疫苗生产过程中的rcDNA进行定量测定。该方法适用于新冠疫苗中rcDNA的检测及疫苗生产过程和成品的质量控制,对其他采用同样细胞基质的病毒性疫苗质量控制也具有借鉴意义。

关键词：新型冠状病毒灭活疫苗 Vero细胞宿主细胞残留DNA 实时定量聚合酶链反应磁珠法

柯萨奇病毒A组5型VP1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

国际生物制品学杂志 2020年第2期43卷 53-57页

作者：靳卫平卢佳吴杰胡岗周金戈王文辉王泽鋆孟胜利申硕武汉生物制品研究所病毒性疫苗研究一室 430207 武汉生物制品研究所国家联合疫苗工程技术研究中心武汉430207

目的原核表达柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5,CV-A5)VP1蛋白,并制备抗VP1多克隆抗体(多抗),为CV-A5相关定性定量研究制备试剂。方法逆转录PCR扩增N端截短的CV-A5VP1-ΔN56后,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN5... 详细信息

目的原核表达柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5,CV-A5)VP1蛋白,并制备抗VP1多克隆抗体(多抗),为CV-A5相关定性定量研究制备试剂。方法逆转录PCR扩增N端截短的CV-A5VP1-ΔN56后,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN56。将其转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达重组蛋白并纯化。用纯化的谷胱甘肽巯基转移酶-VP1-ΔN56融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔,制备多抗。结果重组表达载体构建成功,融合蛋白以不可溶包涵体存在。ELISA、蛋白质印迹法检测表明,获得的兔多抗效价为107,可特异性识别重组和天然CV-A5 VP1蛋白。结论成功制备重组CV-A5 VP1蛋白及特异性多抗。为中和抗原表征研究及VP1定性定量分析奠定了基础。

关键词：柯萨奇病毒A组5型原核细胞基因表达多克隆抗体 VP1

同方期刊数据库

不同佐剂细胞基质四价流感裂解疫苗的小鼠免疫效果评价

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2021年第9期41卷 711-718页

作者：年悬悬刘京邓涛吕传硕张青梅彭飞霞张家友杨晓明国家联合疫苗工程技术研究中心武汉430207 武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究二室 430207 中国生物技术股份有限责任公司北京100024

目的评价犬肾细胞基质四价流感裂解疫苗(MDCK-Va)配伍不同佐剂后的免疫原性。方法将高、中、低剂量的MDCK-Va和鸡胚基质四价流感裂解疫苗(egg-Va)原液分别肌肉免疫BALB/c小鼠2次,间隔3周,小鼠眼静脉采血,分离血清,血凝抑制(hemagglutina... 详细信息

目的评价犬肾细胞基质四价流感裂解疫苗(MDCK-Va)配伍不同佐剂后的免疫原性。方法将高、中、低剂量的MDCK-Va和鸡胚基质四价流感裂解疫苗(egg-Va)原液分别肌肉免疫BALB/c小鼠2次,间隔3周,小鼠眼静脉采血,分离血清,血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验检测抗体效价。不同剂量的MDCK-Va分别配伍QS21、AddVax、PolyI∶C、CpG ODN 1826以及AddVax/PolyI∶C(Add/Poly)联合佐剂,免疫小鼠,初次免疫21 d后,小鼠眼静脉采血,HI和微量中和(microneutralization,MN)试验检测抗体效价,同等剂量加强免疫21 d后,再次采血检测抗体效价。10μg MDCK-Va配伍上述佐剂,加强免疫5 d后,取小鼠脾脏检测脾指数和脾细胞分型。结果MDCK-Va诱导的各型别(H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagate)的血清效价均非劣效egg-Va诱导的血清效价。QS21/Va、AddVax/Va、PolyI∶C/Va、CpG ODN 1826/Va,以及Add/Poly/Va诱导的小鼠血清HI抗体效价均高于MDCK-Va,尤其是QS21/Va和Add/Poly/Va诱导的保护性效价,其差异具有统计学意义。对于H1N1疫苗,血清HI抗体和MN抗体之间的Pearson相关系数为0.737~0.910;对于H3N2亚型,HI抗体和MN抗体的Pearson相关系数为0.839~0.947。QS21/Va组具有明显的脾指数增高,但淋巴细胞占比降低。QS21/Va和Add/Poly/Va对小鼠脾脏中性粒细胞和CD4/CD8细胞的刺激明显强于其他佐剂。结论Add/Poly/Va组对MDCK-Va具有较强的免疫增强作用,可作为MDCK-Va的候选佐剂。HI和MN试验检测的抗体具有很强的正相关性。

关键词：细胞基质四价流感裂解疫苗佐剂稳定性免疫效果