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胃镜下幽门肌切开术治疗先天性肥厚性幽门狭窄

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中华儿科杂志 2008年第4期46卷 247-251页

作者：张又祥聂玉强肖雪喻宁芬黎庆宁邓礼广州市第一人民医院儿科 510180 广州市第一人民医院消化内科 510180

目的探讨胃镜下幽门肌切开术治疗先天性肥厚性幽门狭窄（CHPS）。方法具有典型临床表现，结合B超、胃肠造影和胃镜确诊为CHPS的9例患儿，男7例，女2例，年龄26～70d，体重2．65～6．10kg。在胃镜室，经苯巴比妥钠和咪达唑仑镇静后，直径... 详细信息

目的探讨胃镜下幽门肌切开术治疗先天性肥厚性幽门狭窄（CHPS）。方法具有典型临床表现，结合B超、胃肠造影和胃镜确诊为CHPS的9例患儿，男7例，女2例，年龄26～70d，体重2．65～6．10kg。在胃镜室，经苯巴比妥钠和咪达唑仑镇静后，直径5．9mm电子胃镜经口入胃，通过幽门达十二指肠降段。在胃镜直视下，使用弓形乳头肌切开刀和针式切开刀，按球部一胃窦方向，电切狭窄幽门管前壁和后壁肥厚的黏膜及环形肌，以暴露纵形肌为标志，深度2～4mm。术中使用吸引和去泡剂。结果术后胃镜容易通过幽门。B超及造影显示液体顺利通过幽门。术后2～10h喂养，呕吐次数和呕吐量均显著减少，8例在1周内消失，1例呕吐持续1个月。无胃肠道穿孔、大出血等严重并发症。随访2～9个月，8例经1次治疗痊愈，1例呕吐停止1个月后复发，经第2次治疗痊愈。结论胃镜下幽门肌切开术治疗CHPS是有效而安全的。该方法不用开腹手术，操作简便，不良反应少，恢复喂养快。

关键词：幽门狭窄肥厚性括约肌切开术内窥镜儿童

核蛋白14对黑素瘤新生血管形成的影响及机制研究

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中华皮肤科杂志 2020年第3期53卷 206-213页

作者：李璟蓉赵瑞王康玮方锐华广州市第一人民医院皮肤科 510180 广州市第一人民医院病理科 510180

目的分析核蛋白14(NOP14)对黑素瘤血管形成的影响。方法收集2016年1月至2018年12月在广州市第一人民医院经病理确诊的40例黑素瘤患者的黑素瘤组织,免疫组化检测NOP14和CD31[以微血管密度(MVD)表示]的表达。将黑素瘤细胞A375和SK-MEL-1... 详细信息

目的分析核蛋白14(NOP14)对黑素瘤血管形成的影响。方法收集2016年1月至2018年12月在广州市第一人民医院经病理确诊的40例黑素瘤患者的黑素瘤组织,免疫组化检测NOP14和CD31[以微血管密度(MVD)表示]的表达。将黑素瘤细胞A375和SK-MEL-1细胞分别分为4组,分别转染空载体(空载体组)、NOP14过表达载体(NOP14组)、靶向NOP14的siRNA(siNOP14组)和阴性对照siRNA(siNC组)。荧光定量PCR和Western印迹检测各组NOP14 mRNA和蛋白的表达,Western印迹和ELISA检测细胞及其培养基中血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(VEGFR)的表达。利用Transwell小室构建以上各组A375、SK-MEL-1细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养模型,利用CCK8、Transwell小室和Matrigel血管拟态实验检测共培养后各组HUVEC的增殖、迁移、侵袭和管腔形成能力。采用线性回归模型分析黑素瘤组织中NOP14表达水平与MVD的关系,多因素方差分析检验细胞增殖活性的差异,其余实验指标的两组之间比较采用独立样本t检验。结果NOP14高表达组(20例)黑素瘤组织MVD为44±13,中表达组(17例)为58±16,低表达组(3例)为62±11,且NOP14表达和MVD呈负相关(r=-0.525,P=0.017)。与空载体组相比,NOP14组A375和SK-MEL-1细胞及培养基中VEGF和VEGFR的表达水平均显著降低(P一致。结论黑素瘤组织中NOP14表达和MVD呈负相关,NOP14具有抑制黑素瘤血管新生的作用。

关键词：痣和黑素瘤黑色素瘤,实验性核蛋白质类血管生成抑制剂细胞增殖细胞运动核蛋白14

YTHDF2通过诱导IGFBP7的mRNA衰变激活PI3K/AKT信号转导通路促进胶质母细胞瘤进展的研究

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中国癌症杂志 2022年第3期32卷 218-227页

作者：刁新峰李新茂候亮魏志玄南阳医学高等专科学校第一附属医院神经外科河南南阳473000 武安市第一人民医院神经外科河北武安056300

背景与目的:N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)甲基化修饰识别蛋白YTHDF2被证实在癌症进展中扮演重要角色。探讨YTHDF2是否通过促进胰岛素样生长因子结合蛋白7(insulin-like growth factor binding protein 7,IGFBP7)的mRNA衰变,激活磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase,AKT)信号转导通路,调控胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的细胞周期和凋亡。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测YTHDF2和IGFBP7在GBM组织和细胞中的表达。通过流式细胞术检测细胞周期和凋亡率。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测p-AKT、AKT、p-PI3K和PI3K蛋白表达。采用RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)实验和RNA稳定性实验验证YTHDF2与IGFBP7之间的关系。结果:与癌旁组织和正常星形胶质细胞系(NHA细胞)相比,YTHDF2在GBM组织和细胞中表达升高,IGFBP7表达降低(P均<0.05)。敲减YTHDF2可诱导GBM细胞周期阻滞和凋亡率升高(P<0.05)。在GBM细胞中,YTHDF2可通过识别m6A修饰的IGFBP7进而促进IGFBP7 mRNA降解(P<0.05)。抑制IGFBP7可部分地挽救si-YTHDF2对GBM细胞周期和凋亡的影响(P均<0.05)。此外,YTHDF2还可通过调控IGFBP7激活PI3K/AKT信号转导通路促进GBM恶性进展(P<0.05)。结论:YTHDF2通过m6A修饰的方式调控IGFBP7的表达,激活PI3K/AKT信号转导通路以促进GBM细胞恶性生物学行为。

关键词： YTHDF2 胶质母细胞瘤细胞周期细胞凋亡

眼内液病毒核酸检测流程及临床规范化应用专家共识

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解放军医学杂志 2021年第12期46卷 1167-1173页

作者：中国医学装备协会眼科专业委员会眼科检验检测学组中国中西医结合学会检验医学专业委员会眼科疾病实验诊断专家委员会陶勇李坚不详杭州市第一人民医院眼科

病毒是常见的眼内感染病原体之一。对疑诊为眼内病毒性感染的患者进行眼内液病毒核酸检测已成为明确病因的重要手段。同时,确诊为眼内病毒性感染的患者进行眼内液病毒核酸检测,对调整后续治疗方案、判断治疗终点、预测治疗效果等具有重... 详细信息

病毒是常见的眼内感染病原体之一。对疑诊为眼内病毒性感染的患者进行眼内液病毒核酸检测已成为明确病因的重要手段。同时,确诊为眼内病毒性感染的患者进行眼内液病毒核酸检测,对调整后续治疗方案、判断治疗终点、预测治疗效果等具有重要意义。标准化的眼内液标本采集与实验室病毒核酸检测流程是确保检测结果稳定、可靠、有效的前提。鉴于此,中国医学装备协会眼科专业委员会眼科检验检测学组与中国中西医结合学会检验医学专业委员会眼科疾病实验诊断专家委员会的专家共同制定了《眼内液病毒核酸检测流程及临床规范化应用专家共识》,包括实验室建设标准、具体检测流程、标准化质量控制体系以及临床应用价值等方面,以期促进眼内液病毒核酸检测的规范化与标准化进程,助力眼内病毒性感染相关疾病的精准诊断与治疗。

关键词：眼内液病毒核酸检测标本采集实时荧光定量聚合酶链反应室内质控室间质评专家共识

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血管内皮生长因子的基因克隆与表达

复旦学报（医学版） 2002年第3期29卷 161-164页

作者：樊莹王丰许迅张皙黄倩上海市第一人民医院眼科上海200080 上海市第一人民医院中心实验室上海200080

目的　构建编码正反义血管内皮生长因子 1 65(vascularendothelialgrowthfactor 1 65 ,VEGF1 6 5)的真核表达质粒 ,观察质粒转染体外培养的人脐静脉血管内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC)后 ,靶细胞VEGF的分泌及细胞... 详细信息

目的　构建编码正反义血管内皮生长因子 1 65(vascularendothelialgrowthfactor 1 65 ,VEGF1 6 5)的真核表达质粒 ,观察质粒转染体外培养的人脐静脉血管内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC)后 ,靶细胞VEGF的分泌及细胞生长速度是否发生改变。方法　RT PCR从人胚胎肾组织中获hVEGF1 6 5的cDNA片段 ,构建编码正反义hVEGF1 6 5真核表达质粒 (pCR3 .1 /anti VEGF1 6 5及 pCR3 .1 /VEGF1 6 5) ,通过脂质体介导将质粒转入HU VEC细胞 ,ELISA测定转染后细胞VEGF的分泌量 ,设空载体组及未转染的细胞为对照。筛选稳定表达外源基因的细胞克隆 ,在相差显微镜及透射电镜下观察转染后细胞形态是否发生变化 ,MTT方法检测细胞生长曲线是否有改变。结果　DNA测序结果 ,获得重组质粒pCR3 .1 /anti VEGF1 6 5与pCR3 .1 /VEGF1 6 5所携带的外源基因序列与文献报道的基本一致。质粒转染后靶细胞形态均无明显变化 ,仅在透射电镜下观察到与蛋白质合成相关的细胞器结构发生了相应的改变。反义VEGF转染明显降低靶细胞VEGF的分泌量 ,抑制率为 67.7% (P <0 .0 1 ) ,同时细胞生长速度明显减慢 (P <0 .0 5)。而转入正义基因的细胞VEGF的分泌量则能明显提高 ,与空白对照组比较增长率为984.8% (P <0 .0 1 ) 。

关键词：血管内皮生长因子基因克隆基因载体基因表达基因序法

肾病综合征患儿外周血单个核细胞转化生长因子β的变化及其意义

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中华儿科杂志 2003年第7期41卷 534-537,T001页

作者：于力翁志媛钟志敏曾春华张又祥卓美瑛广州市第一人民医院儿科 510180 广州市第一人民医院检验科 510180

目的　探讨转化生长因子 β(TGFβ)在小儿原发性肾病综合征 (INS)中的变化及其意义。方法　应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)及原位逆转录多聚酶链反应 (InSitu RTPCR)方法 ,分别检测了30例健康儿童和 35例原发性肾病综合征患儿活动期 (35... 详细信息

目的　探讨转化生长因子 β(TGFβ)在小儿原发性肾病综合征 (INS)中的变化及其意义。方法　应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)及原位逆转录多聚酶链反应 (InSitu RTPCR)方法 ,分别检测了30例健康儿童和 35例原发性肾病综合征患儿活动期 (35例 )与缓解期 (2 5例 )外周血单个核细胞(PBMC)在内毒素 (LPS)刺激下TGFβ蛋白水平和TGFβmRNA表达的变化 ;同时观察激素治疗中PBMC的TGFβ的变化。结果　 (1)INS (单纯型和肾炎型 )患儿活动期TGFβ蛋白水平 (2 4 7± 2 6 )ng L和TGFβmRNA表达 (0 5 7± 0 18)明显高于缓解期和对照组 (P均 0 0 5 ) ;除治疗前mRNA两型差异无显著性外 ,激素耐药型无论是治疗前还是治疗后都明显高于?

关键词：肾病综合征患儿外周血单个核细胞转化生长因子β

经皮穴位电刺激对脑卒中患者上肢功能及运动诱发电位的影响

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中国康复医学杂志 2015年第6期30卷 547-550,571页

作者：彭源张瑾苏常春张顺喜温璐璐陈钰杰广州市第一人民医院510180

目的:探讨经皮穴位电刺激(TAES)对脑卒中恢复期患者偏瘫上肢功能及运动诱发电位(MEP)的影响。方法:41例脑卒中恢复期患者随机分为TAES组(n=21)和安慰刺激组(n=20)。TAES组采用TAES治疗仪治疗于患侧上肢的肩髃、曲池、外关和合谷4个穴位... 详细信息

目的:探讨经皮穴位电刺激(TAES)对脑卒中恢复期患者偏瘫上肢功能及运动诱发电位(MEP)的影响。方法:41例脑卒中恢复期患者随机分为TAES组(n=21)和安慰刺激组(n=20)。TAES组采用TAES治疗仪治疗于患侧上肢的肩髃、曲池、外关和合谷4个穴位行频率100Hz、脉宽0.2ms和患者可耐受最大强度的电刺激治疗,1次/d,1h/次,5次/周,连续3周;安慰刺激组接受TAES安慰刺激(即仅连接TAES治疗仪,不开机)。治疗前、治疗第2周、治疗第3周时行患侧上肢Fugl-Meyer评分和改良Barthel指数评分(MBI)评定及患侧皮质MEP的检测。结果:治疗前两组患者基线资料类似(P>0.05)。治疗第2周和第3周两组患者的FMA-UE、MBI评分及MEP与治疗前比较均改善(P<0.05);TAES组FMA-UE、MBI评分及MEP的改善较安慰刺激组明显(P<0.01)。结论:TAES治疗能改善脑卒中恢复期患者上肢功能,提高生活自理能力,推测其机制可能与增强脑卒中患者患侧大脑皮质兴奋性有关。

关键词：经皮穴位电刺激脑卒中上肢运动诱发电位

广州地区产ESBL肺炎克雷伯菌SHV型质粒的分子流行病学调查

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第10期26卷 939-943页

作者：刘朝晖王汉平杨银梅左斌叶慧芬广州市第一人民医院 510180

目的运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术调查广州地区产SHV型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌各种亚型的流行分布情况,试图建立一种方便快捷的分子诊断及其流行病学监测的新方法。方法对73份产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)肺炎克雷伯菌进行SHV质粒基... 详细信息

目的运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术调查广州地区产SHV型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌各种亚型的流行分布情况,试图建立一种方便快捷的分子诊断及其流行病学监测的新方法。方法对73份产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)肺炎克雷伯菌进行SHV质粒基因扩增,分别采用变性高效液相色谱(DHPLC)和测序法对扩增产物进行分析,以明确基因类型,并建立各个已知SHV基因亚型的特征性DHPLC图谱库。结果73株产ESBL的肺炎克雷伯菌中68株确定为SHV基因型,其中62株为已知基因型,分别为SHV-1225株,SHV-1a 14株,SHV-17株,SHV-2a 8株,SHV-28 5株,SHV-2 2株,SHV-26和SHV-33各1株；6株为新的SHV基因型,其中5株获得命名；非SHV型菌株5株,分别为LEN-4型1株,OKP型4株。经过DHPLC分析,全部样本均表现为异常的洗脱峰,各种亚型的异常洗脱峰的形态迥异,其敏感性达100％(68/68),特异性为93．2％(68/73)。SHV型质粒基因的突变集中在nt92、nt324～nt402及nt703～nt786这3个区段。结论SHV-12是广州地区产SHV型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌主要的基因亚型,高比例基因变异的检出预示本地区即将或已经面临肺炎克雷伯菌新耐药机制的抵抗和流行,因此必须加强对产ESBL肺炎克雷伯菌的分子流行病学监测,及时调整抗菌策略；DHPLC可作为一种快速敏感的筛查方法用于产ESBL肺炎克雷伯菌的分子流行病学监测。

关键词：变性高效液相色谱肺炎克雷伯菌 SHV型 β-内酰胺酶基因分型

运用变性高效液相色谱对肺炎克雷伯菌产ESBL进行基因分型

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第9期25卷 764-767页

作者：刘朝晖王汉平陈劲龙杨银梅叶惠芬曾军广州市第一人民医院 510180

目的通过运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌临床分离株TEM型质粒进行基因分型,试图建立一种方便快捷的用于ESBL分子诊断及其流行病学监测的新方法。方法利用PCR技术从肺炎克雷... 详细信息

目的通过运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌临床分离株TEM型质粒进行基因分型,试图建立一种方便快捷的用于ESBL分子诊断及其流行病学监测的新方法。方法利用PCR技术从肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出TEM型质粒的编码序列,扩增产物运用DHPLC技术进行分析,分析提示,异常的样本通过测序确定其基因突变的类型,最后通过比对确定其基因型。结果共分析了101例肺炎克雷伯菌临床分离株,全部样本均扩增出TEM型质粒的编码序列,经过DHPLC分析,52例(51.4%)样本表现为单一的洗脱峰,其形态与TEM-1标准菌株的峰型相一致,测序确定它们的碱基序列亦相一致,不存在变异,为TEM-1型;49例(48.6%)样本表现为异常的洗脱峰,它们均为双峰,形态一致,但异源双链峰的高度有差异,测序结果表明它们均存在四种相同的基因突变,在NCBI网站比对后确定为TEM-116;测序结果还提示,部分样本中TEM-1和TEM-116混合存在,其比例的不同表现为DHPLC时异源双链峰高度的差异;文献检索表明,本次确定的TEM-116为一新的基因亚型,为国内首次报道。结论DHPLC具有简便快捷、高通量和自动化的特点,重复性好,不仅可对已知突变作出即时诊断,还可发现新的基因亚型,不失为一种较好的ESBL分子诊断方法及其流行病学监测手段。

关键词：变性高效液相色谱肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶 TEM型质粒基因分型变性高效液相色谱肺炎克雷伯菌 ESBL 基因分型产超广谱β-内酰胺酶 TEM-1型流行病学监测临床分离株 DHPLC