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猪乙型脑炎病毒在Vero细胞上的繁殖特性及其灭活疫苗的免疫原性研究

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中国畜牧兽医 2018年第12期45卷 3572-3578页

作者：韩伟周建民郝霖雨潘文潘京学中牧实业股份有限公司北京100070 农业农村部兽用生物制品与化学药品重点实验室北京100095

试验旨在对猪乙型脑炎病毒(JEV,SA14-14-2株)在传代细胞上的繁殖培养特性及其制备的灭活疫苗免疫原性进行研究,确定猪JEV在细胞培养瓶中培养的关键技术参数及其灭活疫苗的免疫原性。以Vero细胞培养病毒,通过接种时间、接毒量、吸附时间... 详细信息

试验旨在对猪乙型脑炎病毒(JEV,SA14-14-2株)在传代细胞上的繁殖培养特性及其制备的灭活疫苗免疫原性进行研究,确定猪JEV在细胞培养瓶中培养的关键技术参数及其灭活疫苗的免疫原性。以Vero细胞培养病毒,通过接种时间、接毒量、吸附时间、吸附温度、维持液pH、维持培养温度及培养时间7个条件的优化,将繁殖的病毒液冻融一次,采用病毒蚀斑数测定方法测定病毒滴度。按照优化好的条件繁殖一批毒液,经β-丙内酯灭活,与双相佐剂混合,制备成猪乙型脑炎灭活疫苗。两次免疫(间隔14d)接种乙型脑炎抗体阴性仔猪,首次免疫前(0d)、免疫后第7、14、21、28、35、42天采集血清,检测血清中和抗体。二免后第28天进行乙型脑炎P3强毒的攻击,攻毒前(0d)、攻毒后第1、2、3、5、7、9天采集血浆,攻毒后第14天剖杀免疫猪,采集脑组织,检测血浆和脑组织中JEV。结果显示,用细胞培养瓶进行培养,将Vero细胞培养至48h进行病毒接种,接种量为1 000PFU/mL,病毒吸附温度为37℃,吸附时间为90min,吸附后用pH 7.6～8.8维持液继续培养,培养温度为35℃,培养96h后收获毒液,冻融一次,可获得较高滴度的病毒。仔猪免疫制备的灭活疫苗后血清抗体水平迅速升高,血浆和脑组织中均未检测出JEV,免疫组试验猪能抵抗强毒攻击,可获得有效免疫保护。本试验结果为猪乙型脑炎疫苗的生产提供了参考依据。

关键词：乙型脑炎病毒(JEV) Vero细胞繁殖特性病毒滴度灭活疫苗免疫原性

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生物安全隔离区建设管理探讨

中国兽医杂志 2013年第2期49卷 91-93页

作者：谭业平胡肄农黄小国臧一天陆昌华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 常州市康乐农牧有限公司江苏常州213149

动物疫病区划管理是动物疫病管理的有效手段，适用于一定区域内重大动物疫病控制或净化，确保动物卫生和畜禽产品质量安全，达到进口国或地区可接受的风险水平，促进动物及动物产品国际贸易。欧美等畜牧业发达国家在动物疫病区划管理的... 详细信息

动物疫病区划管理是动物疫病管理的有效手段，适用于一定区域内重大动物疫病控制或净化，确保动物卫生和畜禽产品质量安全，达到进口国或地区可接受的风险水平，促进动物及动物产品国际贸易。欧美等畜牧业发达国家在动物疫病区划管理的探索中认识到在整个国家或区域水平建立和维持无规定动物疫病状态较为困难，而采取严格的监测和生物安全管理措施更利于使区域内特定卫生状况的动物亚群体与外界进行流行病学隔离。

关键词：生物安全管理建设管理安全隔离区动物疫病控制产品质量安全风险水平动物卫生国际贸易

耐热保护剂提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗保存效果研究

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江苏农业科学 2021年第13期49卷 152-157页

作者：刘青涛卢凤英汪爱芬尹秀凤朱秀同何平有赵玉龙朱晓玮薛家宾张小飞江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 兆丰华生物科技(南京)有限公司江苏南京211102 瑞普(保定)生物药业有限公司河北保定071000

为提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热性能,根据前期研究设计了3个耐热保护剂配方,比较不同配方对疫苗的抗原冻干损失、温度耐受性和保存期的影响。结果显示,保护剂TS11、TS37、TS51所制备疫苗的抗原冻干损失均在0.5 lg以下,... 详细信息

为提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热性能,根据前期研究设计了3个耐热保护剂配方,比较不同配方对疫苗的抗原冻干损失、温度耐受性和保存期的影响。结果显示,保护剂TS11、TS37、TS51所制备疫苗的抗原冻干损失均在0.5 lg以下,相互之间差异不明显。但TS37所制备疫苗在37℃和45℃耐受后的抗原效价下降滴度明显低于TS11和TS51,这说明TS37具有更好的耐热保护效果。另外,25℃、2~8℃保存试验显示,配方TS37可使疫苗在室温下至少能保存1个月、冷藏条件下至少保存27个月而抗原含量和攻毒保护仍能达到质量标准要求。因此,本试验研制成功针对鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热保护剂TS37,该保护剂可使疫苗实现2~8℃下长期保存。

关键词：耐热保护剂鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗保存效果

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新型蒙脱石对仔猪生长性能和血常规的影响

西南农业学报 2014年第4期27卷 1777-1780页

作者：胡屹屹苏永腾何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京禾嘉牧业有限公司江苏南京211135

为了拟探讨新型蒙脱石对仔猪生长性能和血常规的影响,选取30头健康"杜×大×长"三元杂交断奶仔猪,随机分为5组。分别饲喂基础日粮、基础日粮+1 g/kg新型蒙脱石、基础日粮+3 g/kg新型蒙脱石、基础日粮+5 g/kg新型蒙脱石和基础日粮+3 g/k... 详细信息

为了拟探讨新型蒙脱石对仔猪生长性能和血常规的影响,选取30头健康"杜×大×长"三元杂交断奶仔猪,随机分为5组。分别饲喂基础日粮、基础日粮+1 g/kg新型蒙脱石、基础日粮+3 g/kg新型蒙脱石、基础日粮+5 g/kg新型蒙脱石和基础日粮+3 g/kg微生态制剂,进行42 d的饲养试验。结果表明,与空白对照组相比,新型蒙脱石可以显著提高日增重、采食量和料重比,降低腹泻率与腹泻指数,改善血常规指标。因此,新型蒙脱石可能具有一定的促生长抗腹泻与免疫增强作用。

关键词：蒙脱石断奶仔猪生长性能腹泻血常规

非洲猪瘟抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及评价

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病毒学报 2023年第6期39卷 1677-1681页

作者：李鹏宇张蕾董春娜李静宋芳肖进中牧实业股份有限公司农业农村部兽用生物制品与化学药品重点实验室北京市兽用多肽疫苗设计与制备工程技术中心北京100095

为建立一种快速、高效、便捷的非洲猪瘟病毒抗体检测方法,本试验采用生物信息学方法筛选得到了性能优异的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽P54t,利用P54t多肽作为检测抗体的特异性抗原,建立了一种特异性、敏感性好的胶体金免疫层析抗体检测方法... 详细信息

为建立一种快速、高效、便捷的非洲猪瘟病毒抗体检测方法,本试验采用生物信息学方法筛选得到了性能优异的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽P54t,利用P54t多肽作为检测抗体的特异性抗原,建立了一种特异性、敏感性好的胶体金免疫层析抗体检测方法,用于检测待测样品中是否含有非洲猪瘟病毒抗体。结果显示,该方法的敏感性为100%,特异性为100%,最低检测限度可达1:12800,与商品化试剂盒比较,符合率为94.3%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强,检测结果准确,可用于非洲猪瘟病毒特异性抗体检测。

关键词：非洲猪瘟病毒 P54t多肽胶体金免疫层析

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猪圆环病毒2型合成肽疫苗佐剂筛选与免疫保护性研究

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中国畜牧兽医 2023年第3期50卷 1068-1080页

作者：刘新月栗利芳王振豹张文亮张欣赵洪涛李鹏宇郑昊天肖进齐鹏中牧实业股份有限公司农业农村部兽用生物制品与化药重点实验室北京市兽用多肽疫苗设计与制备工程技术中心北京100070

【目的】筛选更安全高效的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)合成肽疫苗佐剂。【方法】将IMS 251C VG、GEL 02 PR、ISA 15A VG、ISA 206 VG、ISA 61 VG、台湾细菌鞭毛、卡波姆、多糖共8种佐剂与适量PCV2多肽抗原按照特定... 详细信息

【目的】筛选更安全高效的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)合成肽疫苗佐剂。【方法】将IMS 251C VG、GEL 02 PR、ISA 15A VG、ISA 206 VG、ISA 61 VG、台湾细菌鞭毛、卡波姆、多糖共8种佐剂与适量PCV2多肽抗原按照特定方法配制成不同疫苗,并验证其物理性状,采用小鼠试验初步检验疫苗安全性及免疫效果,筛选出较优的佐剂进行仔猪免疫攻毒保护试验,进一步评估各疫苗的免疫保护效果。【结果】物理性状显示,所有疫苗稳定性均较好,4℃保存期均超过12个月。ISA 61 VG油佐剂黏度较高且乳滴粒径较大,ISA 15A VG、ISA 206 VG双相佐剂次之,其余水佐剂均较低较小。小鼠试验结果显示,除台湾细菌鞭毛佐剂外其他佐剂安全性均良好;小鼠ELISA抗体水平检测结果显示,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组免疫效果明显高于其余疫苗组;综合评定安全性和免疫效果,筛选ISA 61 VG、GEL 02 PR、卡波姆、多糖、ISA 206 VG共5个佐剂组进行仔猪免疫攻毒保护试验。仔猪免疫攻毒保护试验结果显示,免疫后,ISA 61 VG和GEL 02 PR组保护效果明显优于其他佐剂,其制备的疫苗产生的ELISA抗体和中和抗体水平均明显高于其他组,同时还可刺激产生更高水平的细胞因子γ-干扰素(IFN-γ);攻毒后,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组疫苗的仔猪相对日增重显著高于其他佐剂组(P量PCR和免疫组化结果显示,上述疫苗组可显著降低仔猪体内病毒载量(P<0.05)。临床症状观察显示,ISA 61 VG和GEL 02 PR疫苗组无体温升高或被毛粗乱等现象,病理切片表明这2个疫苗组组织病变较轻。【结论】油佐剂ISA 61 VG佐剂和水佐剂GEL 02 PR制备的PCV2合成肽疫苗对预防PCV2感染具有较好的免疫保护作用,试验结果为PCV2合成肽疫苗的研究提供了数据基础。

关键词：猪圆环病毒2型(PCV2) 合成肽疫苗佐剂筛选免疫保护

猪圆环病毒2型ORF2可溶性表达条件的优化

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畜牧与兽医 2018年第1期50卷 118-124页

作者：徐进李厚伟孙永珍谢梅梅郭晓庆河南后羿生物工程股份有限公司河南郑州451161 郑州市兽用生物制品工程技术研究中心.河南郑州451161

为探索猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2基因在大肠杆菌中高效可溶性表达的条件,扩增ORF2基因构建重组表达质粒p ET30a-ORF2,转化入大肠杆菌BL21（DE3）感受态获得重组表达菌;通过改变菌体培养温度和时间、诱导温度和时间、溶解氧量、IPTG及Ca... 详细信息

为探索猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2基因在大肠杆菌中高效可溶性表达的条件,扩增ORF2基因构建重组表达质粒p ET30a-ORF2,转化入大肠杆菌BL21（DE3）感受态获得重组表达菌;通过改变菌体培养温度和时间、诱导温度和时间、溶解氧量、IPTG及CaCl_2浓度,实现目的蛋白高效可溶性表达。结果表明：重组表达质粒p ET30a-ORF2经酶切及测序证明构建正确,重组表达质粒在大肠杆菌BL21（DE3）中实现可溶性表达,其最佳表达条件为：在500 mL培养瓶中加入200 mL LB卡那霉素阳性培养基,菌体于37℃培养4 h后,分别加入IPTG及Ca Cl2至终浓度为0.6 mmol/L及0.06 mol/L,30℃诱导表达4 h;重组Cap蛋白的最高表达量占总蛋白的55.9%。说明优化后可实现猪圆环病毒Cap蛋白的可溶性表达,这为进一步研究该蛋白的结构及其生物学特性奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型 ORF2基因可溶性表达优化

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一例规模化猪场猪流行性腹泻防控案例分析

养猪 2018年第1期 107-109页

作者：林艳代洪波周远程四川华神兽用生物制品有限公司四川成都610200

四川某规模化养猪场发生腹泻疫情,通过胶体金、PCR、病原菌分离等实验室检测确诊为猪流行性腹泻病毒感染。疫病初期通过返饲与疫苗免疫等方式进行防控,疫情未得到有效控制。为快速控制疫情,结合猪流行性腹泻病毒的发病与排毒规律,提出"... 详细信息

四川某规模化养猪场发生腹泻疫情,通过胶体金、PCR、病原菌分离等实验室检测确诊为猪流行性腹泻病毒感染。疫病初期通过返饲与疫苗免疫等方式进行防控,疫情未得到有效控制。为快速控制疫情,结合猪流行性腹泻病毒的发病与排毒规律,提出"切断传染源-构筑高水平免疫屏障-加强饲养管理"的疫情防控方案,即封锁发病猪舍、加强人员与消毒管理、合理返饲、产前两次疫苗接种。方案执行1个月以后,腹泻疫情得到有效控制,发病率由90%以上降低到10%以内。在仔猪腹泻防控中,预防接种只能提供基础防护屏障,一旦发生疫情,唯有切断传染源、加强饲养管理才能快速控制疫情。

关键词：规模化猪场腹泻疫情防护屏障案例分析

凡纳滨对虾对蛋白质和氨基酸营养需求的研究进展

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饲料工业 2010年第A1期31卷 55-60页

作者：怀明燕王晨辉李坤林奥特奇生物制品（中国）有限公司 101407 杭州保安康生物技术有限公司

文章综述国内外有关凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）对蛋白质和必需氨基酸需要的研究进展，并详细分析影响其定量研究结果的主要因素，以期为凡纳滨对虾的生产应用和相关研究提供科学依据。

关键词：凡纳滨对虾蛋白质氨基酸