猪圆环病毒2型ORF2可溶性表达条件的优化

作     者：徐进 李厚伟 孙永珍 谢梅梅 郭晓庆 XU Jin;LI Houwei;SUN Yongzhen;XIE Meimei;GUO Xiaoqing

作者机构：河南后羿生物工程股份有限公司河南郑州451161 郑州市兽用生物制品工程技术研究中心.河南郑州451161 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第50卷第1期

页      面：118-124页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：郑州市自主创新示范工程(10KJGC22) 郑州航空港区科技攻关计划项目(郑港科【2010】12号) 

主　　题：猪圆环病毒2型 ORF2基因 可溶性表达 优化 

摘      要：为探索猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2基因在大肠杆菌中高效可溶性表达的条件,扩增ORF2基因构建重组表达质粒p ET30a-ORF2,转化入大肠杆菌BL21（DE3）感受态获得重组表达菌;通过改变菌体培养温度和时间、诱导温度和时间、溶解氧量、IPTG及CaCl_2浓度,实现目的蛋白高效可溶性表达。结果表明：重组表达质粒p ET30a-ORF2经酶切及测序证明构建正确,重组表达质粒在大肠杆菌BL21（DE3）中实现可溶性表达,其最佳表达条件为：在500 mL培养瓶中加入200 mL LB卡那霉素阳性培养基,菌体于37℃培养4 h后,分别加入IPTG及Ca Cl2至终浓度为0.6 mmol/L及0.06 mol/L,30℃诱导表达4 h;重组Cap蛋白的最高表达量占总蛋白的55.9%。说明优化后可实现猪圆环病毒Cap蛋白的可溶性表达,这为进一步研究该蛋白的结构及其生物学特性奠定了基础。