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miR-126过表达和ADAM9基因沉默对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2024年第2期50卷 310-319页

作者：魏海峰倪志强魏雁虹王起来李首庆马寅芙谭岩方艳秋吉林省人民医院生物治疗与基因诊断重点实验室吉林长春130021

目的:探讨微小RNA-126(miR-126)过表达和解整联蛋白金属蛋白酶9(ADAM9)基因沉默对胃癌细胞生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养人胃低分化腺癌SGC-7901细胞和人正常胃黏膜上皮NGEC细胞,提取细胞中总RNA,采用实时荧光定量P... 详细信息

目的:探讨微小RNA-126(miR-126)过表达和解整联蛋白金属蛋白酶9(ADAM9)基因沉默对胃癌细胞生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养人胃低分化腺癌SGC-7901细胞和人正常胃黏膜上皮NGEC细胞,提取细胞中总RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2种细胞中miR-126和ADAM9 mRNA表达水平。将处于对数生长期的SGC-7901细胞分为miR-126过表达组(miR-126-OE组)和ADAM9基因沉默组(ADAM9 siRNA组),以LipofectamineTM 2000为载体分别转染miR-126模拟物(miR-126 mimics)和敲低ADAM9的RNA寡核苷酸,并设置相应的阴性对照组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平。TargerScan网站预测miR-126的靶基因并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-126和ADAM9的靶向调控关系,采用RT-qPCR法和Western blotting法检测转染miR-126 mimics后SGC-7901细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平。结果:RT-qPCR法检测,与人正常胃黏膜上皮NGEC细胞比较,胃癌SGC-7901细胞中miR-126表达水平明显降低(P基因48和72 h后,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞增殖活性均明显降低(P实验检测,与相应阴性对照组比较,48 h后miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞迁移率明显降低(P室实验检测,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P基因预测,ADAM9的3´-UTR含有与miR-126-3p互补的核苷酸序列。双荧光素酶报告基因实验,ADAM9是miR-126靶向负调控的下游基因。SGC-7901细胞转染miR-126 mimics 48 h后,与mimics NC组比较,miR-126 OE组细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P基因高表达。miR-126过表达可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖活性、迁移和侵袭能力,其机制可能与miR-126靶向负调控ADAM9并抑制胃癌细胞的上皮-间质转化(EMT)进程有关。

关键词：胃肿瘤微小RNA-126 靶基因解整联蛋白金属蛋白酶9 上皮-间质转化

香草扶正合剂对Lewis肺癌小鼠肿瘤血管生成及糖酵解相关酶HK2、LDH-A基因表达的影响

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中华中医药杂志 2024年第7期39卷 3717-3723页

作者：程权王硕傅华洲西湖大学医学院附属杭州市第一人民医院杭州310006 浙江萧山医院杭州311202

目的:探讨香草扶正合剂(XCFZ)对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤效应机制。方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,顺铂组,XCFZ低、中、高剂量组,联合组,每组10只;造模第2天开始,XCFZ低、中、高剂量组分别给予X... 详细信息

目的:探讨香草扶正合剂(XCFZ)对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤效应机制。方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,顺铂组,XCFZ低、中、高剂量组,联合组,每组10只;造模第2天开始,XCFZ低、中、高剂量组分别给予XCFZ 0.93、1.86、3.72 g/mL灌胃;顺铂组以0.64 mg/mL顺铂溶液0.1 mL/2 d腹腔注射,同时以双蒸水0.2 mL/d灌胃,联合组以XCFZ中剂量灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量0.9%氯化钠溶液给药,每天1次,连续给药14d;称取小鼠体质量、瘤重、脾脏及胸腺重量,并计算抑瘤率、脾指数、胸腺指数,HE染色观察肿瘤组织形态学变化,qRT-PCR检测肿瘤组织中HK2、LDH-A mRNA表达,免疫组化及Western Blot检测瘤组织VEGFR-2、VEGF、PI3K、Akt蛋白的表达。结果:联合组抑瘤率最高,其次为顺铂组和XCFZ中剂量组。与模型组比较,XCFZ高、中剂量组及联合组脾指数显著升高(P基因表达来抑制肺癌增殖转移。

关键词：香草扶正合剂肺癌血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体-2 PI3K/Akt信号通路己糖激酶2 乳酸脱氢酶机制

类风湿关节炎患者还原型叶酸载体1基因多态性与甲氨蝶呤疗效、血药浓度及不良反应的相关性

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中华检验医学杂志 2024年第3期47卷 278-285页

作者：李明赵敏侯良学焦鹏商丘市第一人民医院药学部商丘476000 商丘市第一人民医院肿瘤放疗科商丘476000 商丘市第一人民医院急诊重症科商丘476000

目的探究类风湿关节炎(RA)患者还原型叶酸载体1(RFC1)基因多态性与甲氨蝶呤(MTX)疗效、血药浓度及不良反应的关系。方法采用病例对照研究方法,收集2018年1月20日至2021年1月20日在商丘市第一人民医院行MTX治疗的268例RA患者,男性82例,女... 详细信息

目的探究类风湿关节炎(RA)患者还原型叶酸载体1(RFC1)基因多态性与甲氨蝶呤(MTX)疗效、血药浓度及不良反应的关系。方法采用病例对照研究方法,收集2018年1月20日至2021年1月20日在商丘市第一人民医院行MTX治疗的268例RA患者,男性82例,女性186例,年龄(52.47±10.29)岁。检测其RFC1 G80A位点的基因型,检测初次服用MTX 48 h后的血药浓度,观察并统计治疗6个月后的疗效及不良反应。比较不同组别间RFC1 G80A位点基因型的差异,采用共线性诊断和logistic回归分析MTX疗效和血药浓度的影响因素。采用卡方检验比较不同基因型患者间不良反应的发生率。结果RFC1 G80A位点基因型(GG/GA/AA)及基因频率(G/A)分布在有效组和无效组中的差异有统计学意义(χ^(2)=6.583,P=0.037;χ^(2)=6.249,P=0.012),AA型治疗有效率59.26%(32/54)高于GG型36.49%(27/74)(χ^(2)=6.516,P=0.011);Logistic回归分析显示AA基因型患者相对于GG型的MTX治疗有效率的OR(95%CI)值为2.491(1.206~5.144)。AA型患者的48 h血药浓度为1.15(0.75,1.35)μmol/L,与GG型[0.74(0.61,1.18)μmol/L]和GA型[0.84(0.69,0.99)μmol/L]相比,差异有统计学意义(χ^(2)=7.152,P=0.028)。Logistic回归分析显示AA型患者48 h血药浓度较高的概率约为GG型的2.583(1.238~5.390)倍。肝功能损伤在3种不同基因型(GG/GA/AA)间的发生率差异有统计学意义(χ^(2)=12.606,P=0.002)。结论RFC1 G80A位点多态性能够影响RA患者的MTX疗效、血药浓度及肝功能损伤,AA型患者相对GG型疗效更好、血药浓度较高,但肝功损伤率也更高。

关键词：关节炎类风湿甲氨蝶呤还原型叶酸载体1 基因多态性

miRNA-92a通过mTOR糖酵解调节CD4+T细胞在多发性硬化中的机制研究

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神经解剖学杂志 2024年第2期40卷 211-218页

作者：杜欣韵贾慧黄佼浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院风湿免疫科杭州310000 浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院消化科杭州310000

目的:研究microRNA-92a(miRNA-92a或miR-92a)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统CD4^(+)T细胞分化中的作用,以及miR-92a通过糖酵解途径调控T淋巴细胞分化的过程,并以哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)为下游关键分子靶点,探讨... 详细信息

目的:研究microRNA-92a(miRNA-92a或miR-92a)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统CD4^(+)T细胞分化中的作用,以及miR-92a通过糖酵解途径调控T淋巴细胞分化的过程,并以哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)为下游关键分子靶点,探讨miR-92a影响EAE病理过程的分子机制。方法:利用C57BL/6J或miR-92a-/-小鼠成功构建EAE模型后,分离脊髓CD4^(+)T细胞体外培养,采用流式细胞术检测1型辅助性T(Th1)细胞1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)细胞比例,利用Seahorse能量代谢分析仪检测细胞糖酵解水平,利用RT-qPCR检测相关基因变化水平;诱导体外培养的初始CD4^(+)T细胞分化为Th1或Treg细胞,在此基础上调控miR-92a水平并结合糖酵解激动剂或抑制剂,检测细胞分化比例;利用Western Blot检测C57BL/6J或miR-92a^(-/-)小鼠CD4^(+)T细胞中mTOR和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达变化,用质粒转染过表达mTOR后,检测CD4^(+)T细胞糖酵解水平和细胞分化水平。结果:miR-92a可导致EAE后CD4^(+)T细胞分化比例失衡,即Th1和Th17细胞比例增加,Th2和Treg细胞比例减少;miR-92a通过促进糖酵解调控CD4^(+)T细胞分化,抑制糖酵解后促进Treg细胞分化;miR-92a表达的增加能够通过激活mTOR信号通路提高细胞糖酵解水平,从而影响细胞分化。结论:miR-92a通过激活mTOR信号通路促进T淋巴细胞糖酵解,破坏CD4^(+)T细胞分化平衡,从而参与多发性硬化(MS)和EAE的病理过程。

关键词：多发性硬化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白神经炎症糖酵解 miRNA-92a T细胞小鼠

三维超声心动图评估左心室收缩失同步在射血分数保留心衰中的应用研究

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中国超声医学杂志 2024年第3期40卷 293-296页

作者：冒惠崔磊周仲胤如皋市中医院超声科南通市第一人民医院影像科南通市第一人民医院心超室

目的探讨实时三维超声心动图(RT-3DE)对射血分数保留心衰(HFpEF)患者左心室收缩失同步(ISD)的评估价值。方法选取133例慢性心衰患者，根据2016年欧洲心脏病学会的定义分为射血分数保留心衰(HFpEF)组(75例)和射血分数减低心衰(HFrEF)组... 详细信息

目的探讨实时三维超声心动图(RT-3DE)对射血分数保留心衰(HFpEF)患者左心室收缩失同步(ISD)的评估价值。方法选取133例慢性心衰患者，根据2016年欧洲心脏病学会的定义分为射血分数保留心衰(HFpEF)组(75例)和射血分数减低心衰(HFrEF)组(58例),选取61例健康体检者为对照组。在患者入院或诊断后收集常规超声心动图及RT-3DE参数。结果各组间左心室大小、LVEF、左心室壁厚度、E/e′、三维左心室收缩不同步指数(3D-SDI)差异均有统计学意义(P室壁厚度、E/e′、3D-SDI差异有统计学意义(P室射血分数(3D-LVEF)呈负相关(r=-0.354、-0.342、-0.331、-0.333、-0.315、-0.263,P室间隔厚度是HFpEF发生的独立危险因素。结论 RT-3DE对HFpEF患者ISD的评估具有独特的优势，可以为HFpEF患者的诊断提供更加全面和准确的信息，有望成为HFpEF中重要的辅助检查手段。

关键词：实时三维超声心动图射血分数保留型心力衰竭同步性

circCRKL靶向miR-942-5p对骨肉瘤Saos-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响

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中华骨与关节外科杂志 2024年第3期17卷 261-266页

作者：熊涛李秀山荆州市第一人民医院骨科湖北荆州434007

目的:探讨circCRKL靶向miR-942-5p对骨肉瘤Saos-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:回顾性分析2018年1月至2022年12月接受新辅助化疗的41例骨肉瘤患者的临床资料。所有患者在接受此次治疗前均未接受任何抗肿瘤治疗,手术时取骨肉瘤组织... 详细信息

目的:探讨circCRKL靶向miR-942-5p对骨肉瘤Saos-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:回顾性分析2018年1月至2022年12月接受新辅助化疗的41例骨肉瘤患者的临床资料。所有患者在接受此次治疗前均未接受任何抗肿瘤治疗,手术时取骨肉瘤组织和瘤旁组织。采用RT-qPCR评估骨肉瘤组织中circCRKL、miR-942-5p表达情况。分别将pcDNA、pcDNA-circCRKL、si-NC、si-circCRKL、anti-miR-NC、pcDNA-circCRKL+miR-NC、anti-miR-942-5p、pcDNA-circCRKL+miR-942-5p转染Saos-2细胞,运用集落形成、划痕愈合、CCK-8和Transwell实验评估Saos-2细胞克隆数、划痕愈合率、细胞活力以及侵袭数。circCRKL和miR-942-5p的相互作用通过双荧光素酶报告基因法确定。结果:骨肉瘤组织中circCRKL表达下调(P<0.05),miR-942-5p表达上调(P<0.05)。过表达circCRKL后细胞克隆数、划痕愈合率、光密度(OD)值、侵袭数、miR-942-5p相对表达水平显著降低(P均<0.05)。抑制circCRKL表达后miR-942-5p相对表达水平显著升高(P<0.05)。下调miR-942-5p表达后细胞克隆数、划痕愈合率、OD值、侵袭数显著降低(P均<0.05)。circCRKL与miR-942-5p直接结合。上调miR-942-5p表达显著减弱circCRKL过表达对细胞克隆数、划痕愈合率、OD值、侵袭数的影响(P均<0.05)。结论:circCRKL通过靶向下调miR-942-5p来抑制骨肉瘤Saos-2细胞增殖、迁移和侵袭。

关键词：骨肉瘤 circCRKL 增殖迁移侵袭 miR-942-5p

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基于数据挖掘技术优化DRG临床用药目录

中国药房 2024年第13期35卷 1558-1563页

作者：恽琴素周伟贤徐卉刘猛陈荣常州市第一人民医院药学部江苏常州213003 常州市第一人民医院医保办公室江苏常州213003 常州市第一人民医院神经内科江苏常州213003

目的优化疾病诊断相关分组(DRG)的临床用药目录,减少患者药品费用,提高DRG结付率。方法选取某院神经内科BR23疾病组作为研究对象,应用数据挖掘技术,探索疾病组的用药规律,并利用药品综合评价方法对重点监测药品进行评分,进而优化疾病... 详细信息

目的优化疾病诊断相关分组(DRG)的临床用药目录,减少患者药品费用,提高DRG结付率。方法选取某院神经内科BR23疾病组作为研究对象,应用数据挖掘技术,探索疾病组的用药规律,并利用药品综合评价方法对重点监测药品进行评分,进而优化疾病组的临床用药目录。选取2022年12月入组该疾病组患者的住院信息作为优化前数据,2023年9月入组该疾病组患者的住院信息作为优化后数据,通过比较两组患者的医疗质量及药品费用数据来评价优化目录的实施效果。结果优化临床用药目录后,该疾病组的结付率由优化前的84.36%上升至104.70%,住院药品费用及住院总费用均显著降低(P<0.05),重点监测药品使用量明显下降。结论数据挖掘技术有助于探索疾病组临床用药规律;药师可以此为依据,通过有效药学干预手段提高DRG结付率。

关键词：疾病诊断相关分组数据挖掘技术临床用药目录重点监测药品药品综合评价

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切开复位空心钉锚钉与关节镜下带袢钢板固定后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折的疗效比较

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中国骨伤 2024年第6期37卷 583-590页

作者：吴荣张占丰翁伟杨红航闵继康孙建伟沈哲源湖州市第一人民医院骨科湖州市骨性关节炎早期诊断及治疗研究重点实验室浙江湖州313000 湖州市第一人民医院康复医学科浙江湖州313000

目的:比较后内侧入路切开复位空心钉联合锚钉固定与关节镜下Endobutton带袢钢板固定后交叉韧带(posterior cruciate ligament,PCL)胫骨止点撕脱骨折的临床疗效。方法:回顾性分析2020年7月至2021年12月收治的38例PCL胫骨止点撕脱骨折患... 详细信息

目的:比较后内侧入路切开复位空心钉联合锚钉固定与关节镜下Endobutton带袢钢板固定后交叉韧带(posterior cruciate ligament,PCL)胫骨止点撕脱骨折的临床疗效。方法:回顾性分析2020年7月至2021年12月收治的38例PCL胫骨止点撕脱骨折患者的临床资料,根据固定方式分为切开复位内固定组(后内侧入路空心钉锚钉系统固定)和关节镜固定组(关节镜下Endobutton带袢钢板固定)。切开复位内固定组20例,男16例,女4例;年龄26~74(42.9±18.8)岁;左侧13例,右侧7例;骨折Meyers-McKeever分型,Ⅱ型12例,Ⅲ型8例;后抽屉试验Ⅱ度14例,Ⅲ度6例。关节镜固定组18例,男11例,女7例;年龄24~70(53.5±13.4)岁;左侧11例,右侧7例;骨折Meyers-McKeever分型,Ⅱ型10例,Ⅲ型8例;后抽屉试验Ⅱ度11例,Ⅲ度7例。比较两组手术时间、出血量、术后即刻复位质量,并于术后6个月时比较膝关节活动度、膝关节后抽屉试验、国际膝关节文件编制委员会(International Knee Documentation Committee,IKDC)主观膝部评分表分级、KT2000稳定性评价及膝关节Lysholm功能评分。结果:38例患者获得随访,时间8~16(12.3±1.9)个月。所有患者未出现切口感染、骨折畸形愈合及不愈合、内固定松动等并发症。术后6个月膝关节X线片示撕脱骨折均已达到影像学愈合标准。切开复位内固定组手术时间、出血量分别为(56.4±7.1)min、(63.2±10.2)ml,关节镜固定组分别为(89.9±7.4)min、(27.7±8.7)ml,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:后内侧入路空心钉锚钉系统固定与关节镜下Endobutton带袢钢板固定PCL胫骨止点撕脱骨折均能取得满意的临床效果,且关节镜下手术出血更少,但同样学习曲线较长,手术时间较传统切开手术更长,术者需根据患者的临床情况及自身的手术倾向做出选择。

关键词：膝关节关节镜骨折固定术内后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折

LncRNA MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA/B介导结直肠癌细胞免疫逃逸

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中国免疫学杂志 2024年第6期40卷 1217-1221,1127页

作者：李鸷吴迪田飞刘洁谢兴明遵义市第一人民医院胃肠外科遵义563000

目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平。结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05)。MEG8靶向调控miR-15a-5p。共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05)。结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸。

关键词：长链非编码RNA母系表达基因8 miR-15a-5p 结直肠癌免疫逃逸 MHCⅠ类相关蛋白A/B