miRNA-92a通过mTOR糖酵解调节CD4+T细胞在多发性硬化中的机制研究

作     者：杜欣韵 贾慧 黄佼 DU Xinyun;JIA Hui;HUANG Jiao

作者机构：浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院风湿免疫科杭州310000 浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院消化科杭州310000 

出 版 物：《神经解剖学杂志》 (Chinese Journal of Neuroanatomy)

年 卷 期：2024年第40卷第2期

页      面：211-218页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：浙江省医药卫生科技计划项目(2020KY703) 

主　　题：多发性硬化 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 神经炎症 糖酵解 miRNA-92a T细胞 小鼠 

摘      要：目的:研究microRNA-92a(miRNA-92a或miR-92a)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统CD4^(+)T细胞分化中的作用,以及miR-92a通过糖酵解途径调控T淋巴细胞分化的过程,并以哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)为下游关键分子靶点,探讨miR-92a影响EAE病理过程的分子机制。方法:利用C57BL/6J或miR-92a-/-小鼠成功构建EAE模型后,分离脊髓CD4^(+)T细胞体外培养,采用流式细胞术检测1型辅助性T(Th1)细胞1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)细胞比例,利用Seahorse能量代谢分析仪检测细胞糖酵解水平,利用RT-qPCR检测相关基因变化水平;诱导体外培养的初始CD4^(+)T细胞分化为Th1或Treg细胞,在此基础上调控miR-92a水平并结合糖酵解激动剂或抑制剂,检测细胞分化比例;利用Western Blot检测C57BL/6J或miR-92a^(-/-)小鼠CD4^(+)T细胞中mTOR和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达变化,用质粒转染过表达mTOR后,检测CD4^(+)T细胞糖酵解水平和细胞分化水平。结果:miR-92a可导致EAE后CD4^(+)T细胞分化比例失衡,即Th1和Th17细胞比例增加,Th2和Treg细胞比例减少;miR-92a通过促进糖酵解调控CD4^(+)T细胞分化,抑制糖酵解后促进Treg细胞分化;miR-92a表达的增加能够通过激活mTOR信号通路提高细胞糖酵解水平,从而影响细胞分化。结论:miR-92a通过激活mTOR信号通路促进T淋巴细胞糖酵解,破坏CD4^(+)T细胞分化平衡,从而参与多发性硬化(MS)和EAE的病理过程。