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酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制Jurkat T细胞增殖

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第3期26卷 214-217页

作者：毛成全邢飞跃郭中峰方志远暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响,探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制。方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat ... 详细信息

目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响,探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制。方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat T细胞表面分子CD69和CD25表达的影响;利用噻唑蓝(MTT)比色法观察AG490对Jurkat T细胞增殖的影响;采用碘化丙锭(PI)染色检测AG490对Jur-kat T细胞周期的影响;应用Annexin V-FITC和PI双染色检测AG490对Jurkat T细胞凋亡的影响;Western blot检测AG490对Jurkat T细胞中ICBP90蛋白表达的影响以确定其与AG490抑制Jurkat T细胞增殖的关系。结果:随着AG490浓度从1 mmol/L增至30 mmol/L,细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期和G2/M期,导致Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达显著降低;AG490对细胞的抑制作用于24 h最为明显,抑制率可达27.37%,呈剂量依赖关系;AG490不能明显抑制Jurkat T细胞的活化或促进其凋亡。结论:AG490能明显抑制Jurkat T细胞的生长,其抑制作用可能通过下调Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达与细胞周期阻滞有关,而不是通过促进细胞凋亡而实现。

关键词： AG490 Jurkat T细胞增殖周期 ICBP90

芹菜素对小鼠T淋巴细胞体外增殖、细胞周期和凋亡的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第4期24卷 337-340页

作者：梁兆端曾耀英黄秀艳贺芳暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的：研究芹菜素（AP）对小鼠T细胞体外增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法：无菌分离小鼠淋巴结和胸腺细胞,MTT法检测不同浓度（25、50、100、150、200μmol/L）的AP对多克隆刺激剂刀豆蛋白A（ConA）诱导的T细胞增殖的影响,PI染色结合... 详细信息

目的：研究芹菜素（AP）对小鼠T细胞体外增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法：无菌分离小鼠淋巴结和胸腺细胞,MTT法检测不同浓度（25、50、100、150、200μmol/L）的AP对多克隆刺激剂刀豆蛋白A（ConA）诱导的T细胞增殖的影响,PI染色结合流式细胞术（FCM）分析细胞周期的分布,Annexin V-FITC/PI双染色结合FCM检测AP对T细胞凋亡的影响,以及AP与地塞米松（DEX）共同作用下T细胞凋亡的变化,并用MTT法检测该药物浓度对T细胞的毒性作用。结果：25-200μmol/LAP对T细胞无药物毒性作用,并明显抑制ConA诱导的T细胞增殖（P〈0·01）,使细胞周期停滞在G0/G1期,且呈剂量依赖关系;各浓度AP对T细胞凋亡均具有抑制作用,并明显抑制DEX诱导的T细胞凋亡（P〈0·01）,且呈剂量依赖关系。结论：在一定浓度范围内,AP明显抑制ConA诱导的小鼠T细胞体外增殖,使细胞周期停滞G0/G1期,并明显抑制T细胞凋亡。

关键词：芹菜素 T淋巴细胞增殖周期凋亡

细胞外信号调节激酶1/2的阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞增殖的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第2期23卷 102-105页

作者：滕振平邢飞跃王通李莉平暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的特异性阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞体外增殖的影响。方法分离小鼠淋巴结细胞,藉羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,用多克隆刺激剂刀豆A蛋白(ConA)或者佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺... 详细信息

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的特异性阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞体外增殖的影响。方法分离小鼠淋巴结细胞,藉羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,用多克隆刺激剂刀豆A蛋白(ConA)或者佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激,以流式细胞术分析PD98059对淋巴细胞增殖的影响;利用碘化丙锭(PI)染色分析PD98059对细胞周期的影响。结果CFDA-SE染色分析显示,当浓度为5、10、20、30、40μmol/L时,PD98059对ConA诱导的淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用,并呈现明显的剂量依赖关系(r=0.985,P<0.01)。选择最佳浓度30μmol/L的PD98059,观察其对不同时间淋巴细胞增殖的影响,结果发现,随着时间的延长,PD98059对淋巴细胞增殖的抑制作用明显降低(P<0.01),但抑制率随时间的延长而明显升高。细胞周期分析进一步表明,PD98059可阻止ConA刺激的淋巴细胞进入S期和G2/M期,而亚二倍体峰变化并不明显。PD98059对PDB+Ion刺激的淋巴细胞细胞周期的影响与ConA刺激相似,不同的是S期和G2/M期的变化较ConA的作用更明显。结论PD98059对小鼠淋巴细胞的增殖有明显地抑制作用,并可阻止其进入S期和G2/M期,提示ERK1/2信号通路的活化在淋巴细胞增殖中起重要作用。

关键词：细胞外信号调节激酶1/2 淋巴细胞增殖细胞周期

山奈酚对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第12期25卷 1106-1108,1111页

作者：慕静静曾耀英黄秀艳赵晓慧宋兵暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养。流式细胞术结合双色荧光抗体染... 详细信息

目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养。流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;MTT法检测KA对T细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期。结果:终浓度为10、20和40μmol/L的KA可以显著抑制ConA刺激的T细胞CD69的表达,由ConA组的(39.11±1.17)%,分别降低为(30.64±0.23)%、(27.95±0.04)%和(5.63±0.37)%(P<0.05);MTT法结果显示,KA对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;PI染色结果显示,随着KA浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期。结论:KA可显著抑制ConA刺激下的小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖;它能抑制T淋巴细胞进入细胞分裂期。

关键词：山奈酚 T淋巴细胞活化增殖细胞周期流式细胞术

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葫芦素B抗肿瘤作用及其机制研究进展

中国药理学与毒理学杂志 2012年第1期26卷 112-115页

作者：张延亭欧阳东云何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

葫芦素是从葫芦科等植物中分离的三萜类天然产物,具有多种药理作用。葫芦素B是葫芦素家族的重要成员,对多种肿瘤具有抑制作用,是潜在的抗肿瘤药物。葫芦素B能够抑制肿瘤细胞STAT3转录因子的活化,干扰丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路,诱... 详细信息

葫芦素是从葫芦科等植物中分离的三萜类天然产物,具有多种药理作用。葫芦素B是葫芦素家族的重要成员,对多种肿瘤具有抑制作用,是潜在的抗肿瘤药物。葫芦素B能够抑制肿瘤细胞STAT3转录因子的活化,干扰丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路,诱导细胞周期阻滞于G2/M期,诱导肿瘤细胞凋亡,引起细胞骨架变化。越来越多的研究表明,葫芦素B的抗肿瘤作用可能与其破坏肌动蛋白细胞骨架的活性密切相关。本文综述了葫芦素B的抗肿瘤作用及其可能的机制。

关键词：葫芦素B 抗肿瘤药 STAT3转录因子细胞骨架微丝

连翘提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第6期24卷 557-559,563页

作者：尹乐乐曾耀英侯会娜暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广东广州510632

目的:分析连翘(FS)对小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和体外NO释放的影响。方法:无菌收集小鼠腹腔巨噬细胞和羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记大肠杆菌DH5α,短期培养3h后流式细胞术(FCM)分析FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬的影响。... 详细信息

目的:分析连翘(FS)对小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和体外NO释放的影响。方法:无菌收集小鼠腹腔巨噬细胞和羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记大肠杆菌DH5α,短期培养3h后流式细胞术(FCM)分析FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬的影响。用LPS体外刺激活化腹腔巨噬细胞,Griess Reagent试剂盒检测并分析FS对巨噬细胞体外释放NO的影响。结果:FCM分析显示,终浓度为40、80、160mg/L的FS对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬具有明显的促进作用(P<0.05)。不同终质量浓度的FS对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞体外NO的释放均有抑制作用(P<0.05)。结论:FS可以促进小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和抑制NO体外的释放。

关键词：连翘提取物腹腔巨噬细胞吞噬 NO释放

可溶性HLA-A~*0203-BSP原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

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中国生物工程杂志 2006年第9期26卷 5-10页

作者：贾仟涛徐丽慧迟晓云查庆兵李丰耀何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心

目的：构建HLA—A＊0203重链胞外域羧基端融合生物素化酶BirA底物肽（BSP）的融合蛋白CHLA-A＊0203一BSP的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达。方法：以RT-PCR方法从HLA—A28供者外周血单个核细胞（PBMC）中克隆HLA-A＊0203重链基因... 详细信息

目的：构建HLA—A＊0203重链胞外域羧基端融合生物素化酶BirA底物肽（BSP）的融合蛋白CHLA-A＊0203一BSP的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达。方法：以RT-PCR方法从HLA—A28供者外周血单个核细胞（PBMC）中克隆HLA-A＊0203重链基因的cDNA，并测序鉴定，然后以PCR方法构建HLA-A＊0203一BSP的原核表达载体，在大肠杆菌BL21（DE3）菌株中诱导表达并以免疫印迹鉴定。结果：DNA测序显示，从3名HLA-A2＊供者PBMC中克隆的cDNA中，只有从供者2获得编码HLA-A＊0203重链基因的cDNA。将编码重链胞外域1-276的序列和编码BSP的序列融合，构建HLA-A＊0203-BSP融合蛋白的原核表达载体并经测序验证。该融合蛋白在BL21（ED3）中获得高效表达，约占菌体总蛋白的30％；产物相对分子质量约为34kDa，与理论大小一致。Western印迹分析显示融合蛋白完全存在于包涵体中。结论：成功克隆HLA-A＊0203重链基因的cDNA，构建HLA-A＊0203-BSP融合蛋白的原核表达载体，并在大肠杆菌中获得高效表达，为制备HLA-A＊0203四聚体打下基础。

关键词：人类白细胞抗原胞外域融合蛋白原核表达包涵体

去乙酰化酶抑制剂TSA通过激活ERK和p38抑制间充质干细胞成脂分化

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中国生物化学与分子生物学报 2012年第1期28卷 35-41页

作者：龚雨琴季煜华李智耀王奎栋暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

本文研究了丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号通路在组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACis)曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)抑制间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)C3H10T1/2成脂分化中的调节机制.首先利用MTT法检测TSA对其增殖活性的影响;Western印迹法首先检测MAPKs信号通路中pERK和p-p38蛋白在间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化过程中的表达情况,以及不同浓度、不同时间TSA处理对pERK和p-p38蛋白差异变化情况;其次再用Western印迹检测TSA对成脂分化过程中间充质干细胞pERK和p-p38蛋白表达的影响.MTT结果显示,TSA浓度在1 nmol/L～100 nmol/L范围内抑制C3H10T1/2细胞的增殖活性,且TSA浓度约为60 nmol/L时即抑制一半以上的C3H10T1/2细胞增殖活性.Western印迹结果显示,TSA处理5 min～80 min,及浓度在1 nmol/L～100 nmol/L范围内激活MAPK信号通路中pERK和p-p38蛋白的表达;C3H10T1/2细胞成脂分化过程中,胞内pERK和p-p38蛋白的表达呈现下调趋势;而TSA抑制了成脂分化过程中C3H10T1/2细胞内pERK和p-p38蛋白的表达变化.本研究结果提示,在C3H10T1/2细胞成脂分化过程中,MAPK信号途径分子pERK和p-p38表达下调;TSA可能是通过活化pERK和p-p38进而抑制间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化.

关键词：曲古抑菌素A(TSA) 丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路 C3H10T1/2细胞成脂分化

芹菜素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的抑制作用

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现代免疫学 2007年第6期27卷 481-487页

作者：梁兆端黄秀艳肇静娴曾耀英暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广州510632

研究芹菜素（apigenin,AP）对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,探讨其作用机制,以及将其开发为免疫抑制药物的可能。无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度（25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L和200μmol/L）的芹菜素预孵育4... 详细信息

研究芹菜素（apigenin,AP）对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,探讨其作用机制,以及将其开发为免疫抑制药物的可能。无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度（25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L和200μmol/L）的芹菜素预孵育4 h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白A（concanavalin A,ConA）诱导T细胞活化和增殖,并用MTT法检测该药物浓度对T细胞的毒性作用。荧光标记抗体双染色结合流式细胞术,检测各浓度AP对ConA诱导的小鼠T细胞表达早期、中期和晚期活化抗原CD69、CD25和CD71的影响;以二乙酰羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯（carboxyfluoresceindiacetate-succinim-idyl ester,CFDA-SE）染色结合流式细胞术,检测各浓度AP对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,并应用ModFit软件分析其增殖指数（proliferation index,PI）。结果显示,25-200μmol/L AP对ConA诱导的T细胞CD69、CD25的表达有显著抑制作用（P〈0.01）,且呈剂量依赖关系;25μmol/L和50μmol/L的AP抑制CD71的表达,但高浓度（大于100μmol/L）才有显著抑制作用（P〈0.01）。各浓度AP对ConA诱导的T细胞增殖均有显著抑制作用（P〈0.01）,且呈剂量依赖关系。表明在一定浓度范围内,AP可显著抑制ConA诱导的小鼠T细胞体外活化及增殖,有望通过进一步研究将其开发成免疫抑制药物。

关键词：芹菜素 T淋巴细胞活化增殖