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山羊Aichivirus C的分离鉴定及演化分析

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畜牧兽医学报 2024年

作者：程玉婷阿比克哈莫杨晨张丁中任云鑫岳华汤承西南民族大学畜牧兽医学院西南民族大学畜牧兽医学院

C型爱知病毒（AichivirusC）是新近证实的致山羊腹泻病毒，本研究旨在分离山羊AichivirusC并分析其基因组特征。在四川某暴发腹泻的山羊场采集腹泻粪便9份，1只病死羔羊的组织样本13份，进行常见的腹泻病原检测。采用Vero细胞系对山羊Ai... 详细信息

C型爱知病毒（AichivirusC）是新近证实的致山羊腹泻病毒，本研究旨在分离山羊AichivirusC并分析其基因组特征。在四川某暴发腹泻的山羊场采集腹泻粪便9份，1只病死羔羊的组织样本13份，进行常见的腹泻病原检测。采用Vero细胞系对山羊AichivirusC阳性样本进行病毒分离，以PCR、间接免疫荧光试验和电镜技术对分离毒株进行鉴定，并扩增获得其基因组序列。结果显示：通过RT-PCR方法从9份山羊腹泻粪便样本中检出AichivirusC阳性8份，羔羊的组织样本中检出AichivirusC阳性8份，其它常见的腹泻病原在上述粪便和组织样本中均未检出。使用Vero细胞系成功从阳性样品中分离到2株山羊AichivirusC，其病毒滴度分别为106.5TCID50·mL-1和105.9TCID50·mL-1。获得两条近乎全长基因组序列，与GenBank中山羊源 Aichivirus C毒株的核苷酸相似性为78.8%～97.4%，与国内SWUN/F11/2019 毒株的核苷酸相似性为97.0%～97.4%。此外，本研究还从5份临床阳性样本中扩增出VP0、VP3和VP1基因完整序列。基于基因组的演化分析显示：获得的两个病毒株与SWUN/F11/2019 毒株在系统发育树上聚为一支。并且，这些毒株的VP0和VP1基因编码蛋白也有独特的氨基酸突变。综上所述，本研究分离得到2株山羊Aichivirus C，获得了其近乎全长基因组序列，与国内SWUN/F11/2019 毒株亲缘关系最近，其VP0和VP1基因具有独特的分子特征。本结果丰富了国内山羊源Aichivirus C的分子遗传信息，为进一步研究山羊Aichivirus C的致病性和分子生物学特征提供了参考。

关键词：山羊腹泻 C型爱知病毒分离鉴定分子特征

施马伦贝格病毒实时荧光RT-RAA快检方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年

作者：陈嘉仪黄晓琪王炜杰莫竣喻王苏艳丹珍翁姆陈劲松张瑞周泷李彦敏张志东西南民族大学畜牧兽医学院

旨在建立一种快速检测施马伦贝格病毒(SBV)的方法。本研究对于SBV S基因，设计特异性引物和探针，通过优化反应条件，建立SBV反转录重组酶介导核酸恒温扩增(RT-RAA)检测方法。结果显示，该方法在38℃条件下，8 min内即可特异性检出SBV... 详细信息

旨在建立一种快速检测施马伦贝格病毒(SBV)的方法。本研究对于SBV S基因，设计特异性引物和探针，通过优化反应条件，建立SBV反转录重组酶介导核酸恒温扩增(RT-RAA)检测方法。结果显示，该方法在38℃条件下，8 min内即可特异性检出SBV，与口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、非洲马瘟病毒(AHSV)、塞内卡谷病毒(SVV)、水疱性口炎病毒(VSV)无交叉反应，其敏感性为 103拷贝/反应，且批内和批间重复性变异系数均小于5%。对模拟阳性和阴性绵羊样品的检出率为100%，与SBV 的RT-qPCR检测结果一致。本研究成功建立了一种快速、敏感、特异的SBV实时荧光RT-RAA方法，为SBV防控提供新技术手段。

关键词：施马伦贝格病毒重组酶介导核酸恒温扩增方法快速检测

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MLKL在小鼠皮肤伤口愈合过程中的作用

中国农业大学学报 2024年第10期 230-238页

作者：包文慧赵佳敏巩志国白云洁于琢雅刘博毛伟张双翼内蒙古农业大学兽医学院

为探究MLKL对肌成纤维细胞和巨噬细胞间相互作用过程中的调控作用及对小鼠皮肤伤口愈合的影响，分别构建野生型C57BL/6J小鼠和MLKL基因敲除(MLKL-/-)小鼠背部创伤模型，分析皮肤伤口愈合情况。体外培养野生型C57BL/6J和MLKL-/-小鼠肌成... 详细信息

为探究MLKL对肌成纤维细胞和巨噬细胞间相互作用过程中的调控作用及对小鼠皮肤伤口愈合的影响，分别构建野生型C57BL/6J小鼠和MLKL基因敲除(MLKL-/-)小鼠背部创伤模型，分析皮肤伤口愈合情况。体外培养野生型C57BL/6J和MLKL-/-小鼠肌成纤维细胞及骨髓源巨噬细胞，使用小鼠耳源肌成纤维细胞培养上清液（Myofibroblast conditioned medium,MFbCM）处理野生型C57BL/6J小鼠M1和M2型巨噬细胞，检测M1型巨噬细胞IL-6、TNF-α及NO的分泌量。检测M2型巨噬细胞精氨酸酶（Arginase）及几丁质酶3样分子（Ym1）的表达量。结果显示，1)相比于野生型C57BL/6J小鼠，MLKL-/-小鼠伤口收缩更为缓慢。在损伤后第5、7和10天，野生型C57BL/6J小鼠创面收缩率显著高于MLKL-/-小鼠（P<0.001）。2)MLKL缺失显著降低伤口表面Ym1和Arginase的表达，在损伤后第5、7和10天差异显著（P<0.001）。此外，MLKL的缺失影响了MFbCM上调M2型巨噬细胞Ym1和Arginase表达的能力。表明MLKL可能参与调控MFbCM诱导的M2型巨噬细胞分泌活动。3)MFbCM可促进M1型巨噬细胞IL-6、TNF-α和NO的表达，且依赖于MLKL的存在，表明MLKL可能参与调控MFbCM诱导的M1型巨噬细胞分泌活动。综上，本研究确定了MLKL参与巨噬细胞和肌成纤维细胞间相互作用，这种相互作用在伤口愈合的每个阶段都是必不可少的。因此，该研究将有助于更好地理解MLKL在创伤愈合中的作用，为创面愈合提供新的治疗策略。

关键词： MLKL 创伤愈合巨噬细胞肌成纤维细胞

一株铜绿假单胞菌噬菌体全基因组分析及与抗生素体外联合应用效果

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 727-738页

作者：王晋宇张凯川王芮杰高铎蒋祺丰贾坤华南农业大学兽医学院广州510642

旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分... 详细信息

旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分离到一株铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB,TEM显示病毒颗粒具有一个平均直径为73.02 nm的二十面体头部和一个平均长度为155.57 nm的长尾部,属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,具有双链DNA基因组,宿主谱较窄,耐低温(-20℃)并且在37℃达到最适温度,有良好的酸碱耐受性,在pH为3~12时保持活性,最佳MOI为0.001,一步生长曲线显示潜伏期为10 min,爆发量为50 PFU·cell^(-1),吸附性试验表明PaVOB在10 min的吸附率为99.1%。PaVOB基因组全长为72179 bp,(G+C)%含量为54.81%,与VB PaeP FBPa1亲缘关系小于0.1,ORF预测显示,PaVOB包括74个ORF,软件预测均未发现毒力基因、耐药基因和tRNA存在。此外,抗生素联合应用结果显示,PaVOB与头孢曲松联合应用有协同作用,在效价为107 PFU·mL^(-1)时与恩诺沙星产生协同作用,与庆大霉素产生无关作用。铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB对环境适应能力强,且基因组信息清晰,能够选择性地与不同抗生素联合应用发挥协同作用,具有治疗临床耐药铜绿假单胞菌感染的可能性。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体生物学特性基因组学抗生素联合应用

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猪小肠内容物中苯甲酸和马尿酸高效液相色谱检测方法的建立

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饲料研究 2024年 128-133页

作者：张寒蒋永嘉刘为王志强肖霞扬州大学兽医学院兽医药理毒理教研室

试验为建立猪小肠内容物中苯甲酸及其代谢物马尿酸的高效液相色谱（HPLC）测定方法，采用乙酸乙酯为提取剂，亚铁氰化钾-乙酸锌为蛋白沉淀剂提取样品中的苯甲酸，流动相为甲醇∶0.02%磷酸水；水、亚铁氰化钾-乙酸锌共同提取样品中的马... 详细信息

试验为建立猪小肠内容物中苯甲酸及其代谢物马尿酸的高效液相色谱（HPLC）测定方法，采用乙酸乙酯为提取剂，亚铁氰化钾-乙酸锌为蛋白沉淀剂提取样品中的苯甲酸，流动相为甲醇∶0.02%磷酸水；水、亚铁氰化钾-乙酸锌共同提取样品中的马尿酸，流动相为甲醇∶20 mmol/L乙酸铵溶液，紫外检测波长230 nm。结果显示：在猪小肠内容物中苯甲酸添加浓度为0.10～10.00μg/g内线性关系良好（R2=0.999 4）；检测限为0.05μg/g，定量限为0.10μg/g；添加浓度在0.10、0.50、1.00、5.00、10.00μg/g时，回收率为（101.62±4.49）%，批内和批间变异系数分别低于4.80%和9.96%。猪小肠内容物中马尿酸添加浓度在0.30～10.00μg/g内线性关系良好（R2=1.000 0）；检测限和定量限分别为0.10μg/g和0.30μg/g；马尿酸添加浓度在0.50、1.00、5.00、20.00μg/g时，回收率为（90.3±4.00）%，批内和批间变异系数分别低于5.93%和5.26%。研究表明，此方法苯甲酸及马尿酸预处理方法简单省时，无须固相萃取及使用有毒有害溶剂，节约成本，为猪小肠内容物中苯甲酸及马尿酸的检测提供参考。

关键词：猪苯甲酸马尿酸 HPLC 小肠内容物

猫泛白细胞减少症病毒A91S变异株对猫的致病性及基因组特征研究

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畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2560-2568页

作者：周宁汤承许佳岳华陈曦西南民族大学畜牧兽医学院成都610041

猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus, FPV)是一种对猫危害严重的病原。近年来,一种VP2 91位氨基酸残基由A突变为S的FPV变异株(FPV A91S变异株)已经在国内广泛流行,但目前还未见该变异株对猫致病性的报道,本试验旨在探究FP... 详细信息

猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus, FPV)是一种对猫危害严重的病原。近年来,一种VP2 91位氨基酸残基由A突变为S的FPV变异株(FPV A91S变异株)已经在国内广泛流行,但目前还未见该变异株对猫致病性的报道,本试验旨在探究FPV A91S变异株对猫的感染特性及其分子特征。利用F81细胞分离FPV A91S变异株,并研究其血凝特性、对猫的致病性及其基因组特征。成功分离到一株FPV A91S变异株,纯化后病毒滴度为10~(4.6 )TCID_(50)·mL^(-1);该毒株能在pH 6.0~6.5、4和37℃条件下有效凝集猪红细胞;分离株经口服成功感染幼猫,引起呕吐、腹泻、白细胞急剧降低、眼睑脓性分泌物等症状,并在5 d内导致猫死亡;大体和组织病理变化发现严重的肠道和肺出血。获得该毒株近乎全长的基因组序列,其VP2蛋白的关键位点氨基酸符合典型FPV特征。除了VP2 A91S的突变外,其NS1蛋白也有3个独特的氨基酸突变(D23N、I443V和H596Q),这些特征导致FPV A91S毒株在进化树中单独聚为一支,具有独特的遗传进化趋势。本研究首次探究了FPV A91S变异株的血凝性和对猫的致病性,为进一步了解FPV的生物学特性和遗传变异提供参考。

关键词：猫泛白细胞减少症病毒 FPV VP2 A91 S变异体血凝性致病性遗传进化

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基于CRISPR-Cas12a系统的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法的建立

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黑龙江畜牧兽医 2024年第8期 68-76页

作者：林冬媛谢龙飞李芙蓉梁玮珩熊文广华南农业大学兽医学院广州510642

为了建立一种特异性强、灵敏度高的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法,试验将聚合酶链式反应(PCR)与成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated, CRISPR-... 详细信息

为了建立一种特异性强、灵敏度高的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法,试验将聚合酶链式反应(PCR)与成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated, CRISPR-Cas)系统相结合,首先根据鼠伤寒沙门氏菌的spy基因序列3′末端的保守区设计crRNA及靶标序列扩增引物,根据可视化检测原理设计单链DNA(single-stranded DNA, ssDNA)荧光报告探针;然后对靶标序列进行PCR扩增,将扩增产物加入CRISPR-Cas12a系统,在蓝光下通过肉眼观察是否产生绿色荧光实现对靶标的检测;最后进行特异性试验和灵敏度试验。结果表明:建立的方法仅能检测到鼠伤寒沙门氏菌,检测不到除鼠伤寒沙门氏菌外其他血清型的沙门氏菌及大肠杆菌、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌,能检测到循环数为14个的PCR产物和0.53 copies/μL的重组质粒,灵敏度优于常规PCR方法和实时荧光定量PCR方法。说明本试验建立的方法可以实现鼠伤寒沙门氏菌的可视化检测,具有特异性强、灵敏度高的特点。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白12a(CRISPR-Cas12a)系统可视化检测方法聚合酶链式反应(PCR)

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山银花和姜黄提取物对肉鸡肠道发育、消化酶活性、养分表观代谢率和免疫调节作用的影响

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饲料工业 2024年

作者：徐大海史万玉河北农业大学动物医学院/中兽医学院

，试验旨在研究山银花和姜黄提取物对肉鸡肠道发育、消化酶活性、养分表观代谢率和免疫调节作用的影响。1日龄健康WOD168雏鸡随机分为5组，每组5个重复，试验组按中药提取物添加剂量不同分为A、B、C组（750 g/t、500 g/t，250 g/t）。... 详细信息

，试验旨在研究山银花和姜黄提取物对肉鸡肠道发育、消化酶活性、养分表观代谢率和免疫调节作用的影响。1日龄健康WOD168雏鸡随机分为5组，每组5个重复，试验组按中药提取物添加剂量不同分为A、B、C组（750 g/t、500 g/t，250 g/t）。设置抗生素对照组（D组）和空白对照组(E组)。试验分1～21、22～35日龄两个阶段。结果显示：21日龄和35日龄时，A、B组肠道绒毛高度、VCR值、IgA、IgG、IgM含量组均显著高于D、E组（P<0.05）。B组各周龄诱导产生的AI H9抗体显著高于D、E组（P<0.05）。A、B组肠道脂肪酶和α-淀粉酶的活性均显著高于D、E组（P<0.05）。35日龄A组粗脂肪、钙表观消化率、碳粒廓清率均显著高于D、E组（P<0.05），A、B、C组的外周血淋巴细胞转化率显著高于D、E组（P<0.05）。综上所述：饲粮添加山银花和姜黄提取物能够改善肠道发育，提高消化酶的活性，促进脂肪和钙的消化吸收，提高鸡群非特异性和特异性免疫应答。同时本试验研究发现使用抗生素影响肠道发育，降低消化酶活性，降低粗蛋白、钙、磷的表观消化率，显著降低IgG的含量。

关键词：山银花和姜黄提取物肉鸡肠道发育消化酶活性养分表观代谢率免疫调节作用

桑杜口服液对环磷酰胺致鸡免疫抑制的调节作用

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中国家禽 2024年

作者：杨海峰崔怡李艳艳陈晓兰邱树磊李金贵江苏农牧科技职业学院扬州大学兽医学院

为研究桑杜口服液对鸡免疫抑制的调节作用，试验采用环磷酰胺（40 mg/kg）建立鸡免疫抑制模型，并给予鸡传染性法氏囊病活疫苗（B87株）免疫和不同剂量桑杜口服液（分别为4.8 g/kg、9.6 g/kg和19.2 g/kg）处理，由此将120只13日龄雏鸡... 详细信息

为研究桑杜口服液对鸡免疫抑制的调节作用，试验采用环磷酰胺（40 mg/kg）建立鸡免疫抑制模型，并给予鸡传染性法氏囊病活疫苗（B87株）免疫和不同剂量桑杜口服液（分别为4.8 g/kg、9.6 g/kg和19.2 g/kg）处理，由此将120只13日龄雏鸡随机均分为6组，通过抗体水平检测、组织切片和RT-qPCR等技术评估不同剂量桑杜口服液对环磷酰胺诱导免疫抑制的调节作用。结果显示：9.6 g/kg和19.2 g/kg桑杜口服液预处理可有效缓解环磷酰胺造成的B87疫苗抗体生成减少、法氏囊指数下降和法氏囊滤泡损伤现象。此外，在鸡传染性法氏囊病活疫苗（B87株）免疫的基础上，环磷酰胺处理显著降低白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)和γ-干扰素（IFN-γ）mRNA表达量（P0.05），而9.6 g/kg桑杜口服液处理显著降低IL-2 mRNA表达量（P<0.05）,19.2 g/kg桑杜口服液可显著升高IFN-γ mRNA表达量（P<0.05）。此外，9.6 g/kg和19.2 g/kg桑杜口服液可显著拮抗环磷酰胺对IL-4和IL-10的抑制作用（P<0.05）。研究表明，19.2 g/kg桑杜口服液可以缓解环磷酰胺造成的鸡的免疫抑制。

关键词：桑杜口服液免疫抑制免疫调节鸡