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刚地弓形虫CDPK1蛋白结构与抗原表位的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2024年第9期19卷 1009-1013,1019页

作者：殷荷党甜甜李佳铭李光琪田婷婷吴赓赵志军宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏医学检验临床医学研究中心宁夏医科大学临床医学院

目的对刚地弓形虫钙依赖性蛋白激酶1(Toxoplasma gondii Calcium-dependent protein kinases1,TgCDPK1)的蛋白结构及抗原表位进行分析,为弓形虫病疫苗的研制提供参考依据。方法在NCBI数据库中检索TgCDPK1蛋白的氨基酸序列,分别采用ProtP... 详细信息

目的对刚地弓形虫钙依赖性蛋白激酶1(Toxoplasma gondii Calcium-dependent protein kinases1,TgCDPK1)的蛋白结构及抗原表位进行分析,为弓形虫病疫苗的研制提供参考依据。方法在NCBI数据库中检索TgCDPK1蛋白的氨基酸序列,分别采用ProtParam、ProtScale、MotifyScan、TMHMM 2.0、SMART、SOPMA、Phyre2、IEDB、PSORT、STRING、PREDICTED ANTIGENIC PEPTIDES及SYFPEITHI在线分析网站预测TgCDPK1蛋白的氨基酸组成、理化性质、蛋白翻译后修饰位点、结构域、功能域、二级结构、三级结构、互作蛋白、抗原决定簇、B细胞抗原表位及T细胞抗原表位等。结果TgCDPK1蛋白由582个氨基酸组成,其分子式是C_(2898)H_(4573)N_(785O888)S_(925),分子质量单位(Mr)为65.42142×10^(3),理论等电点为6.04,不稳定指数为36.980,脂溶性指数为79.91;该蛋白存在36个蛋白翻译后修饰位点;不含跨膜结构域,但含4个EF-手钙结合域及1个蛋白激酶结构域;蛋白二级结构中52.96%为α-螺旋,14.00%为延长链,7.90%为β-转角,35.05%为无规则卷曲;共含24个抗原决定簇,平均抗原倾向指数为1.0237;TgCDPK1蛋白抗原表位分布广泛,含有8个B细胞抗原表位、14个CTL细胞表位和12个Th细胞表位。结论TgCDPK1蛋白含有多种抗原表位,免疫原性高,可作为弓形虫病疫苗研制的候选蛋白。

关键词：刚地弓形虫钙依赖性蛋白激酶1 生物信息学分析免疫原性

基于磁共振成像T_(2)弛豫时间图技术评价皮肌炎/多发性肌炎病情的相关研究

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中华内科杂志 2024年第4期63卷 401-405页

作者：张璠徐健王兴强程宇琪陈伟昆明医科大学第一附属医院风湿免疫科昆明650032 云南省中医(风湿病)临床医学研究中心昆明650021 昆明医科大学第一附属医院精神科昆明650032 昆明医科大学第一附属医院医学影像科昆明650032

探讨磁共振成像(MRI)T_(2)弛豫时间图(T_(2)mapping)在皮肌炎(DM)、多发性肌炎(PM)病情评估中的运用价值。选2016年10月至2017年12月昆明医科大学第一附属医院风湿免疫科确诊的DM或PM患者33例(肌炎组),另选同期健康志愿者8例(健康对照组... 详细信息

探讨磁共振成像(MRI)T_(2)弛豫时间图(T_(2)mapping)在皮肌炎(DM)、多发性肌炎(PM)病情评估中的运用价值。选2016年10月至2017年12月昆明医科大学第一附属医院风湿免疫科确诊的DM或PM患者33例(肌炎组),另选同期健康志愿者8例(健康对照组)。检测肌炎组患者血清肌酸激酶(CK)、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、补体C3、补体C4。采用炎性肌病活动评价工具-肌肉(MDAAT-muscle)、炎性肌病活动评价工具-整体(MDAAT-all)、健康评估量表(HAQ)、生活质量量表-36(SF-36)、徒手肌力测定(MMT-8)评分及MRI T_(2)弛豫时间图肌肉(骨盆和大腿22块肌肉)T_(2)值评价疾病状态。结果显示,肌炎组患者CK为457.2(165.6,1229.2)IU/L,ESR为20(10,42)mm/1h,CRP为3.25(2.38,10.07)mg/L,补体C3为0.90(0.83,1.06)g/L,补体C4为0.18(0.14,0.23)g/L。MMT-8评分为(57.12±16.23)分,MDAAT-muscle为5.34(4.00,6.00)分,MDAAT-all为(34.63±12.62)分,HAQ为1.55(0.66,2.59)分,SF-36为(44.66±7.98)分。与健康对照组总肌肉T_(2)值比,肌炎组T_(2)值升高[(54.99±11.60)ms比(36.62±1.66)ms,P<0.001],其中缝匠肌、髂腰肌、梨状肌、臀小肌、臀中肌受累较重。肌炎组总肌肉T_(2)值与CK、MDAAT-muscle、MDAAT-all、HAQ呈正相关(r值分别为0.461、0.506、0.347、0.510,均P<0.05);与补体C4、SF-36、MMT-8评分呈负相关(r值分别为-0.424、-0.549、-0.686,均P<0.05)。提示MRI T_(2)弛豫时间图能客观反映DM/PM患者病情。

关键词：皮肌炎多发性肌炎磁共振成像 T_(2)弛豫时间图

BZW1高表达促进胃癌细胞的侵袭和转移:基于调控Wnt//β-catenin通路和促进上皮间质转化

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南方医科大学学报 2024年第2期44卷 354-362页

作者：张文静张诺杨子张小凤孙奥飞王炼宋雪耿志军李静胡建国蚌埠医学院第一附属医院检验科安徽蚌埠233004 蚌埠医学院第一附属医院胃肠外科安徽蚌埠233004 蚌埠医学院第一附属医院中心实验室安徽蚌埠233004 炎症相关性疾病基础与转化研究安徽省重点实验室安徽蚌埠233004

目的明确碱性亮氨酸拉链蛋白1(BZW1)在胃癌中的表达情况,并探讨其对胃癌患者预后的影响及其可能的作用机制。方法分别采用TIMER、UALCAN和Kaplan-Meier Plotter数据库分析BZW1在胃癌组织中的表达情况,与肿瘤分级、分期之间的相关性及对... 详细信息

目的明确碱性亮氨酸拉链蛋白1(BZW1)在胃癌中的表达情况,并探讨其对胃癌患者预后的影响及其可能的作用机制。方法分别采用TIMER、UALCAN和Kaplan-Meier Plotter数据库分析BZW1在胃癌组织中的表达情况,与肿瘤分级、分期之间的相关性及对患者预后的影响。纳入2014年1月~2016年12月在我院行胃癌根治术的102例患者,分析BZW1在胃癌组织中的表达水平、对胃癌疾病进展和患者术后5年生存率的影响。体外采用慢病毒转染的方式构建上调和下调BZW1表达的胃癌细胞系(MGC803),分析BZW1对MGC803细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的作用。采用KEGG富集分析预测BZW1在胃癌中的可能作用机制,并进一步采用Western blot实验进行体外验证。结果生物信息学分析结果显示,BZW1在胃癌和癌旁组织中的表达量差异有统计学意义(P实验显示,上调BZW1可促进MGC803细胞的迁移和侵袭(P实验发现,上调BZW1可促进MGC803细胞N-cadherin与Vimentin的表达(P实验进一步证实,上调BZW1可促进Wnt3a、β-Catenin及C-myc的表达(P<0.05),而下调则相反(P<0.05);使用Wnt通路抑制剂XAV-939可显著削弱上调BZW1对MGC803细胞中EMT关键分子的蛋白N-cadherin、Vimentin及E-cadherin的调控作用(P<0.05)。结论BZW1在胃癌组织中高表达并影响患者预后,可能与调控Wnt/β-catenin信号促进胃癌细胞EMT进程相关。

关键词：胃癌碱性亮氨酸拉链蛋白1 预后上皮-间质转化 Wnt/β-catenin

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运动训练对老年大鼠骨质疏松及RANK/RANKL/OPG信号通路的影响

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中国老年学杂志 2024年第9期44卷 2133-2138页

作者：王金玲黄夏荣黄福锦屈萌艰尹林伟胡文韬甘邵婷贾飞阳孙光华周君南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学科南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学中心南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学实验室

目的研究运动训练对老年大鼠骨质疏松及核转录因子(NF)-κB受体活化因子(RANK)/RANK配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路的影响。方法 16只24月龄雄性SD大鼠随机分为模型组和运动组，每组8只，采用自然衰老的方法复制老年骨质疏松动物... 详细信息

目的研究运动训练对老年大鼠骨质疏松及核转录因子(NF)-κB受体活化因子(RANK)/RANK配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路的影响。方法 16只24月龄雄性SD大鼠随机分为模型组和运动组，每组8只，采用自然衰老的方法复制老年骨质疏松动物模型。另随机挑选8只3月龄雄性SD大鼠为青年组。运动组进行8 w跑台运动训练。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清骨代谢指标[Ⅰ型前胶原羧基末端肽(PICP)、Ⅰ型前胶原氨基末端肽(PINP)、Ⅰ型胶原交联C-末端肽(CTX-Ⅰ)、Ⅰ型胶原交联N-末端肽(NTX-Ⅰ)];双能X线检测骨密度；显微CT(Micro-CT)检测骨微结构；分别应用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹技术测定左股骨组织中RANK、RANKL、OPG mRNA和蛋白表达水平。结果与青年组比较，模型组血清NTX-Ⅰ、CTX-Ⅰ、RANKL、RANK mRNA及蛋白表达升高，PICP、PINP、OPG mRNA及蛋白表达降低，右股骨和腰椎骨密度降低，右胫骨和第5腰椎的骨体积分数、骨小梁数量减少，骨小梁间隔增宽，差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与模型组相比，运动组血清NTX-Ⅰ、RANKL、RANK mRNA及RANK蛋白表达降低，PICP、PINP、OPG mRNA及蛋白表达升高，右股骨和腰椎骨密度升高，右胫骨的骨体积分数、骨小梁数量增加，骨小梁间隔变窄，第5腰椎的骨小梁间隔变窄，差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论运动训练可提高老年大鼠的骨密度、改善骨微结构，调节骨代谢，其作用机制可能与调控RANK/RANKL/OPG信号通路有关。

关键词：运动骨质疏松核转录因子(NF)-κB受体活化因子(RANK)/RANK配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路

液相色谱串联质谱法检测去乙酰毛花苷、地高辛血浆浓度及其临床应用

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中国医院药学杂志 2024年第2期44卷 171-177页

作者：陈寒梅吴迪李骞郑巧玲张峻昆明医科大学第一附属医院临床药学中心云南昆明650032 昆明医科大学第一附属医院临床医学研究中心云南昆明650032

目的:建立一种检测血浆中去乙酰毛花苷(cedilanid D,CDL)和地高辛(digoxin,DIG)浓度的液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)并探索CDL的合理监测指标及安全治疗范围。方法:质谱采用ESI正离子模式,以Kinetex®2.6μm C_(18)100·作为分析柱,以地... 详细信息

目的:建立一种检测血浆中去乙酰毛花苷(cedilanid D,CDL)和地高辛(digoxin,DIG)浓度的液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)并探索CDL的合理监测指标及安全治疗范围。方法:质谱采用ESI正离子模式,以Kinetex®2.6μm C_(18)100·作为分析柱,以地高辛-D3为内标,流动相为10 mmol·L^(-1)乙酸铵(0.1%甲酸)-甲醇(0.1%甲酸),梯度洗脱;样品前处理为乙腈蛋白沉淀法结合氮气吹干后复溶;对该LC-MS/MS法进行较为系统的方法学验证。EMIT法使用VIVA-E 2000进行检测,使用Siemens®地高辛检测试剂盒。根据制定的纳入标准和排除标准收集了122例使用CDL患者的血样,均使用LC-MS/MS法和EMIT法检测。结果:该LC-MS/MS法经方法学验证,CDL在0.16~10.3 ng·mL^(-1)、DIG在0.16~9.89 ng·mL^(-1)范围内线性良好,且精密度、准确度、提取回收率及基质效应符合检测要求。对两种方法检测结果的分析显示EMIT法所测DIG浓度(E-DIG浓度)高于LC-MS/MS法所测DIG与CDL浓度之和[L-(DIG+CDL)浓度](P0.05),截断值分别为2.46 ng·mL^(-1)、1.78 ng·mL^(-1)。结论:对于使用CDL的患者,以CDL与DIG浓度之和反映CDL的安全性可能更为合适,而EMIT法检测结果高于LC-MS/MS法,其中毒浓度须根据不同检测方法作相应调整。

关键词：去乙酰毛花苷地高辛血浆浓度高效液相色谱串联质谱法

电针对脑缺血再灌注损伤大鼠及神经细胞自噬的影响

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中国老年学杂志 2024年第10期44卷 2443-2448页

作者：黄夏荣封蔚彬胡莉芝谭金曲周桂娟王金玲尹林伟周君刘红雅曾亚华南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学中心南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学科南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学实验室南华大学衡阳医学院附属第一医院神经内科

目的观察电针“百会”“水沟”穴对脑缺血再灌注损伤大鼠及神经细胞自噬的影响。方法 SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、干预组各16只。假手术组麻醉后只分离左侧颈总、颈内、颈外动脉，不结扎、插线。模型组、干预组采用Zea Long... 详细信息

目的观察电针“百会”“水沟”穴对脑缺血再灌注损伤大鼠及神经细胞自噬的影响。方法 SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、干预组各16只。假手术组麻醉后只分离左侧颈总、颈内、颈外动脉，不结扎、插线。模型组、干预组采用Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。干预组电针“百会”“水沟”,电流强度1 mA,疏波频率3 Hz,密波频率15 Hz, 1次/d, 20 min/次，连续5 d。假手术组和模型组均不予电针处理，其他处理同干预组。制备模型5 d后，用Longa神经功能评分法对各组进行神经功能评分，2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死体积，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑脊液白细胞介素(IL)-6、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹分别检测缺血区海马组织自噬相关蛋白磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA和蛋白表达。结果与假手术组相比，模型组神经功能评分明显升高，脑梗体积明显增加，脑脊液IL-6、IL-18、TNF-α水平明显升高，PI3K、Akt、mTOR mRNA及蛋白表达明显降低(均P<0.05);与模型组相比，干预组神经功能评分明显降低，脑梗体积明显减小，脑脊液IL-6、IL-18、TNF-α水平明显降低，PI3K、Akt、mTOR mRNA及PI3K、Akt蛋白表达明显增高(均P<0.05)。结论电针“百会”“水沟”穴可能通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，抑制缺血区细胞自噬从而改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能，减少脑梗死体积。

关键词：电针百会水沟脑缺血再灌注损伤自噬

绿原酸减轻脓毒症诱导的小鼠急性肾损伤:基于抑制caspase-1经典细胞焦亡信号通路

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南方医科大学学报 2024年第2期44卷 317-323页

作者：房尚萍孙任珂苏慧翟科程项毓高杨梦娜郭文俊皖南医学院麻醉学院安徽芜湖241002 皖南医学院麻醉学实验实训中心安徽芜湖241002 皖南医学院第一附属医院安徽芜湖241002

目的探讨caspase-1经典的细胞焦亡信号通路在绿原酸治疗急性肾损伤小鼠中的作用及机制。方法将24只C57Bl/6J小鼠随机分成4组,每组6只:假手术组(Sham组)、盲肠结扎穿刺组(CLP组)、CLP+地塞米松组(CLP+DXM组)、CLP+绿原酸组(CLP+CGA组)。S... 详细信息

目的探讨caspase-1经典的细胞焦亡信号通路在绿原酸治疗急性肾损伤小鼠中的作用及机制。方法将24只C57Bl/6J小鼠随机分成4组,每组6只:假手术组(Sham组)、盲肠结扎穿刺组(CLP组)、CLP+地塞米松组(CLP+DXM组)、CLP+绿原酸组(CLP+CGA组)。Sham组小鼠仅开腹未造模,CLP组CLP+DXM组和CLP+CGA组小鼠均盲肠结扎穿刺(CLP)造模。Sham组、CLP组、CLP+DXM组和CLP+CGA组在造模后持续静脉泵注生理盐水10 mg/kg、生理盐水10 mg/kg,注地塞米松1μg/kg和绿原酸15 mg/kg 6 h。各组均在注射药物结束后8 h,比较各组小鼠7 d生存率,肾组织大体形态、HE染色,肾组织细胞凋亡及肾功能相关指标尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、肾损伤分子1(KIM-1);及肾组织NLRP3炎性小体和caspase-1通路关键蛋白表达情况。结果绿原酸干预后提高了小鼠7 d生存率,肾组织肾小球毛细血管充血、肾间质水肿、肾小管上皮细胞肿胀程度明显减轻(P<0.05),降低了肾功能指标BUN、Scr、KIM-1水平;NLRP3炎性小体及caspase-1通路关键蛋白表达。结论绿原酸可能通过抑制NLRP3炎性小体和caspase-1信号通路,改善盲肠结扎穿刺所致急性肾损伤。

关键词：绿原酸急性肾损伤脓毒症细胞焦亡 NLRP3炎性小体

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β-毒素促进金黄色葡萄球菌破坏血脑屏障的实验研究

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陆军军医大学学报 2024年第6期46卷 578-586页

作者：王哲芬尹靓陈韬吴静琳郑颖昆明医科大学第一附属医院神经内科昆明650032 云南省神经系统疾病临床医学研究中心昆明650032

目的探讨β-毒素(Hlb)在金黄色葡萄球菌通过血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)中的作用。方法通过血琼脂平板划线筛选金葡菌MW2的Hlb高产菌株,验证其对hCMEC/D3模拟BBB细胞模型通透性的影响。采用生物信息学分析筛选hlb基因完整的... 详细信息

目的探讨β-毒素(Hlb)在金黄色葡萄球菌通过血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)中的作用。方法通过血琼脂平板划线筛选金葡菌MW2的Hlb高产菌株,验证其对hCMEC/D3模拟BBB细胞模型通透性的影响。采用生物信息学分析筛选hlb基因完整的金葡菌菌株,利用同源重组的方法构建hlb敲除株,血琼脂平板法检测溶血活性改变。利用BBB细胞模型比较不同菌株对其通透性的影响,再将野生株与hlb敲除株经尾静脉注射构建小鼠血源性脑膜炎/脑微脓肿模型并比较感染72 h脑组织中菌载量。结果金葡菌MW2的Hlb高产菌株对BBB细胞模型破坏导致BBB细胞模型通透性增加的能力较野生株明显增强。NCTC8325-4、COL和RN4220菌株hlb基因无噬菌体插入。成功构建NCTC8325-4Δhlb株,血平板证实敲除株的β-溶血缺失。NCTC8325-4Δhlb株对BBB模型细胞破坏导致BBB细胞模型通透性增加的作用较野生株下降,在小鼠血源性脑膜炎/脑微脓肿模型脑组织中菌载量也较野生株明显降低。结论 β-毒素具有促进金葡菌破坏BBB的作用。

关键词：金黄色葡萄球菌 β-毒素血脑屏障血源性脑膜炎/脑微脓肿模型血脑屏障细胞模型

SACS基因新发纯合突变致Charlevoix-Saguenay型常染色体隐性痉挛性共济失调一家系研究

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中华神经科杂志 2024年第6期57卷 593-599页

作者：李海江庞爱兰张艳兰韩雁冰昆明医科大学第一附属医院神经内科云南省神经系统疾病临床医学研究中心昆明650032

目的:报道 SACS基因新发纯合突变致Charlevoix-Saguenay型常染色体隐性痉挛性共济失调(ARSACS)患者的临床及遗传学特点,提高临床医师对该病的认识。方法:对2022年3月就诊于昆明医科大学第一附属医院神经内科遗传代谢专病门诊的1个近亲... 详细信息

目的:报道 SACS基因新发纯合突变致Charlevoix-Saguenay型常染色体隐性痉挛性共济失调(ARSACS)患者的临床及遗传学特点,提高临床医师对该病的认识。方法:对2022年3月就诊于昆明医科大学第一附属医院神经内科遗传代谢专病门诊的1个近亲结婚家系中的患者和父母进行详细的神经系统体格检查,提取患者及其父母外周血DNA,应用二代测序技术对患者及其父母进行全外显子测序(WES),变异位点经Sanger测序验证,并应用软件对突变位点进行分析。结果:患者为18岁汉族男性,3岁起病,表现为进行性双下肢发僵、行走不稳,体检发现双下肢锥体束征、小脑性共济失调、高足弓和锤状趾。其头颅磁共振成像(MRI)T 2WI和T 2液体衰减反转恢复序列(FLAIR)示双侧脑桥对称性低信号,小脑萎缩,胼胝体变薄。神经电生理检查结果显示感觉运动性周围神经病。眼科检查发现患者双眼共同性外斜视、双眼屈光不正。WES结果显示患者 SACS基因第10号外显子c.6958T>C(***2320His)纯合变异,父母为杂合变异,并经Sanger测序验证。根据美国医学遗传学与基因组学学会指南该变异评级为疑似致病变异(PM1+PM2+PP3+PP4)。故该患者明确诊断为 SACS基因纯合突变c.6958T>C导致的ARSACS。结论:本研究发现 SACS基因1个新的致病变异(c.6958T>C),导致了ARSACS,其主要临床特征为小脑性共济失调、锥体束征和感觉运动性周围神经病,头颅MRI检查T 2WI和T 2FLAIR双侧脑桥对称性低信号有助于缩小鉴别诊断范围。

关键词：共济失调 SACS基因突变全外显子测序