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HPV E2、E5致癌机制及相关疫苗研究进展

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中华疾病控制杂志 2024年第1期28卷 96-100页

作者：崔湘杰史荔陶玉芬中国医学科学院医学生物学研究所史荔实验室昆明650118

宫颈癌是影响女性的常见恶性肿瘤之一,其中高危型HPV的持续感染是导致宫颈癌的主要病因。在宫颈癌的发生发展过程中,除了HPV E6、E7与宫颈癌病变有主要的关系外,其他一些早期蛋白如E2、E5也发挥了重要的作用。如E2可以启动并维持病毒的... 详细信息

宫颈癌是影响女性的常见恶性肿瘤之一,其中高危型HPV的持续感染是导致宫颈癌的主要病因。在宫颈癌的发生发展过程中,除了HPV E6、E7与宫颈癌病变有主要的关系外,其他一些早期蛋白如E2、E5也发挥了重要的作用。如E2可以启动并维持病毒的复制,而E5可以与E6、E7癌蛋白合作,促进感染细胞增殖。本研究仅就HPV E2、E5在宫颈癌发生发展中的机制以及相关的治疗性疫苗研究进展进行综述。

关键词：宫颈癌人乳头瘤病毒 E2蛋白 E5蛋白疫苗

COX6B2在胃癌组织中高表达并影响患者的远期预后:基于抑制p53信号调控胃癌细胞的增殖及细胞周期

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南方医科大学学报 2024年第2期44卷 289-297页

作者：沈梦迪赵娜邓晓晶邓敏蚌埠医学院第一附属医院消化内科安徽蚌埠233004 蚌埠医学院安徽省生化药物研究工程中心安徽蚌埠233030

目的分析COX6B2在胃癌组织中的表达对患者远期预后的影响及其作用机制。方法基于公共数据库、患者病历资料分析COX6B2在胃癌和癌旁组织中表达量及其对患者预后的影响;富集分析COX6B2在胃癌中可能发挥的作用;应用慢病毒转染技术干预COX6B... 详细信息

目的分析COX6B2在胃癌组织中的表达对患者远期预后的影响及其作用机制。方法基于公共数据库、患者病历资料分析COX6B2在胃癌和癌旁组织中表达量及其对患者预后的影响;富集分析COX6B2在胃癌中可能发挥的作用;应用慢病毒转染技术干预COX6B2的表达;通过CCK-8、流式细胞术及免疫印迹实验验证其生物学功能。结果TCGA数据库、免疫组化、免疫印迹和荧光定量PCR检测显示,COX6B2在胃癌组织中高表达(P<0.05);Kaplan-Meier plotter数据库和K-M曲线显示,COX6B2高表达组生存期短(P<0.05);统计分析发现COX6B2在胃癌组织高表达与临床病理分期、CEA及CA19-9密切相关(P<0.05),COX6B2高表达、CEA≥5μg/L及CA19-9≥37 kU/L均是影响患者术后5年生存率的独立危险因素(P<0.05)且COX6B2表达量对患者远期预后有一定预判价值(P<0.05);GO及KEGG富集结果显示,COX6B2主要参与细胞周期的调控等;CCK-8和流式检测显示,上调COX6B2促进细胞增殖,通过增加G1/S期细胞比例调控细胞周期(P<0.05)。免疫印迹结果显示,COX6B2抑制胃癌细胞中p53和p21的表达(P<0.05)。结论COX6B2在胃癌组织中高表达且影响患者远期预后,其可能通过调控细胞周期而影响胃癌恶性增殖的过程。

关键词：胃癌 COX6B2 细胞周期细胞增殖远期预后 p53

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应用KMB17细胞培养柯萨奇病毒B族1、2、3型的研究

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中国病原生物学杂志 2024年第1期19卷 10-14页

作者：邓自君靳玮华李艳艳张伟杨凤梅张名陈丽雄徐鸿界李明学刘权唐洁段素琴孙文亭李咏洁马绍辉赵远杨明和占龙杨净思中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650018

目的采用人胚肺二倍体细胞(human embryonic lung diploid cell)KMB17株对柯萨奇病毒B族(Coxsackievirus B,CVB)1、2、3型进行适应性培养,探索应用KMB17细胞培养CVB1-3型病毒的相关参数,为基于KMB17细胞研发CVB多价疫苗提供参考。方法 ... 详细信息

目的采用人胚肺二倍体细胞(human embryonic lung diploid cell)KMB17株对柯萨奇病毒B族(Coxsackievirus B,CVB)1、2、3型进行适应性培养,探索应用KMB17细胞培养CVB1-3型病毒的相关参数,为基于KMB17细胞研发CVB多价疫苗提供参考。方法将CVB 1-3型分别设置8个不同的感染复数(mulitiplicity of infection, MOI)梯度(0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4),在KMB17细胞上进行培养观察,对病毒培养结果进行统计分析。结果 CVB 1-3型病毒均能KMB17细胞中复制,并使细胞产生明显的细胞病变(cytopathic effect, CPE)。其中CVB 1型在KMB17细胞上适宜的种毒MOI值为0.25~0.3,病毒收获液的平均滴度为7.25 lgCCID50/mL,适宜MOI范围内病毒培养时间的95%置信区间为96.1~97.6 h;CVB 2型在KMB17细胞上适宜的种毒MOI值为0.20~0.25,病毒收获液平均滴度为7.375 lgCCID50/mL,适宜MOI范围内病毒培养时间的95%置信区间为74.8~76.8 h。CVB 3型在KMB17细胞上适宜的种毒MOI值为0.30~0.35,病毒收获液的平均滴度为7.25 lgCCID50/mL,适宜MOI范围内病毒培养时间的95%置信区间为82.7~84.7 h。结论 KMB17为一株理想的用于CVB1、2、3型培养的基质细胞,可为基于KMB17细胞研发CVB多价疫苗提供参考。

关键词： KMB17细胞柯萨奇病毒B 1、2、3型病毒培养

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核定位人源α-突触核蛋白转基因小鼠的建立

中国实验动物学报 2024年第3期32卷 307-316页

作者：韦梦晨范胜涛吴海婷张艺薇王子鸥黄璋琼北京协和医学院中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

目的建立一种核定位人源α-突触核蛋白(α-synuclein, α-syn)转基因小鼠,并探究人源α-syn核输入对小鼠行为的影响。方法构建hSNCA-NLS和EGFP的慢病毒载体,利用显微注射法建立转基因小鼠模型,通过PCR和Western Blot方法鉴定转基因首... 详细信息

目的建立一种核定位人源α-突触核蛋白(α-synuclein, α-syn)转基因小鼠,并探究人源α-syn核输入对小鼠行为的影响。方法构建hSNCA-NLS和EGFP的慢病毒载体,利用显微注射法建立转基因小鼠模型,通过PCR和Western Blot方法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型和蛋白表达情况。采用免疫荧光鉴定人源α-syn在小鼠脑组织中的共定位情况,同时采用旷场、转棒、O迷宫实验评价转基因小鼠的行为改变情况。结果 hSNCA-NLS基因成功插入小鼠基因组中,人源α-syn成功表达,并且有明显的核定位现象。进一步研究发现,核定位人源α-syn转基因小鼠在2月龄时开始表现出了运动功能障碍,发生了星形胶质细胞增生和炎症反应,于9月龄时表现出了明显的焦虑样症状,γ-氨基丁酸(GABA)基因表达减少,这些表现一直持续到小鼠12月龄。结论成功构建了核定位人源α-syn转基因小鼠,小鼠表现出明显的运动功能障碍和焦虑样症状。该模型的成功建立可以为研究α-syn核定位现象在帕金森病中的作用提供一定的研究基础。

关键词：人源α-突触核蛋白小鼠核定位转基因运动功能障碍

两种呼吸道合胞病毒PreF三聚体重组蛋白疫苗的制备和免疫原性评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第2期44卷 101-109页

作者：张恒肖红剑李海巍杨耀云段金梅李智华中国医学科学院医学生物学研究所病原体感染防控教育部重点实验室(北京协和医学院)昆明650031

目的通过基因序列设计及优化,构建质粒并表达纯化出4种呼吸道合胞病毒(RSV)PreF蛋白,对其免疫原性进行评价。方法分别用Human和CHO密码子优化Coronin-1A和T4三聚体蛋白基因序列,并添加到RSV F蛋白序列后,将上述质粒转染Expi293F细胞进... 详细信息

目的通过基因序列设计及优化,构建质粒并表达纯化出4种呼吸道合胞病毒(RSV)PreF蛋白,对其免疫原性进行评价。方法分别用Human和CHO密码子优化Coronin-1A和T4三聚体蛋白基因序列,并添加到RSV F蛋白序列后,将上述质粒转染Expi293F细胞进行蛋白质表达,收获上清经镍柱纯化后,制备出4种三聚体蛋白,并进行SDS-PAGE分析及Western blot鉴定。于0周和3周免疫动物,采血后进行结合抗体和中和抗体活性检测。结果SDS-PAGE分析及Western blot鉴定结果表明,制备及表达的4种蛋白质具有稳定的三聚体结构;抗原抗体亲和力试验表明,4种三聚体蛋白与RSV特异性单抗8897、D25、Motavizumab、AM14和Palivizumab的亲和力均很强;免疫血清的结合抗体效价和中和抗体效价结果表明,初次免疫后,两种T4三聚体蛋白诱导的抗体水平更高,再次免疫后,Human密码子优化的三聚体蛋白抗体增长幅度较高。结论两种不同的异源三聚体基序添加均可产生有效的三聚体PreF蛋白,并能在小鼠体内诱导出有效的结合抗体和中和抗体。

关键词：呼吸道合胞病毒 PreF三聚体蛋白抗体效价

呼吸道合胞病毒PreF和PostF重组蛋白疫苗的免疫原性评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第2期44卷 110-119页

作者：陈佳敏肖红剑杨耀云张恒李智华李倩倩中国医学科学院医学生物学研究所病原体感染防控教育部重点实验室(北京协和医学院)昆明650031 云南大学生命科学学院昆明650091

目的对比呼吸道合胞病毒(RSV)融合前F蛋白(PreF)和融合后F蛋白(PostF)的免疫原性差异。方法通过SDS-PAGE及Western blot鉴定PreF和PostF的表达,使用Octet仪器检测F蛋白与特异性抗体的亲和力,用PreF和PostF免疫小鼠,检测免疫血清的结合... 详细信息

目的对比呼吸道合胞病毒(RSV)融合前F蛋白(PreF)和融合后F蛋白(PostF)的免疫原性差异。方法通过SDS-PAGE及Western blot鉴定PreF和PostF的表达,使用Octet仪器检测F蛋白与特异性抗体的亲和力,用PreF和PostF免疫小鼠,检测免疫血清的结合抗体与中和抗体差异。结果PreF经改造后以稳定的三聚体形式存在,与单抗D25、8897、AM14、Palivizumab以及Motavizumab均具有很高的亲和力,但PostF缺乏表位Ø构象,并呈现单体构象,与D25、8897、AM14并无明显结合。PreF和PostF免疫小鼠的研究发现,AS01佐剂比铝佐剂更能诱导出高滴度结合抗体和针对RSV Long株的中和抗体。PreF与PostF免疫后诱导的结合抗体与PreF的结合能力相当,PostF免疫后诱导的结合抗体与PostF的结合水平显著高于PreF。结论PreF拥有更多的抗体结合表位,改造后稳定的PreF三聚体重组蛋白能够诱导更强的中和抗体。同时,AS01佐剂免疫效果优于铝佐剂。因此,基于PreF稳定的三聚体结构改造及佐剂的研发对于RSV疫苗的发展至关重要。

关键词：呼吸道合胞病毒重组F蛋白融合前构象佐剂免疫评价

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病毒性疾病基因修饰小鼠模型的研究进展

病毒学报 2024年第3期40卷 609-617页

作者：吴海婷范胜涛张才星李牧遥张艺薇黄璋琼北京协和医学院中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118 澳门科技大学中国澳门999078

随着腺相关病毒、慢病毒载体转染及靶向核酸酶等基因修饰技术迅速发展,其被广泛应用于构建病毒性疾病基因修饰小鼠模型,这对于研究病毒的结构、功能及致病机制具有重要的价值。本文就近年来构建的基因修饰小鼠病毒感染模型进行梳理,讨... 详细信息

随着腺相关病毒、慢病毒载体转染及靶向核酸酶等基因修饰技术迅速发展,其被广泛应用于构建病毒性疾病基因修饰小鼠模型,这对于研究病毒的结构、功能及致病机制具有重要的价值。本文就近年来构建的基因修饰小鼠病毒感染模型进行梳理,讨论基因修饰技术在多种病毒性疾病小鼠模型中的研究进展,分析这些模型对在病毒性疾病的预防和治疗中的应用前景,以期为病毒性疾病相关的治疗药物和疫苗研究提供参考。

关键词：基因修饰病毒性疾病小鼠模型

数字聚合酶链式反应技术及其在疾病检测中的研究进展

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分析化学 2024年第1期52卷 13-21页

作者：包旭东胡孝林万其武张洪罗阳重庆大学医学院智慧检验与分子医学中心重庆大学生物工程学院国家卫健委出生缺陷与生殖健康重点实验室山东大学第二医院检验医学中心

数字聚合酶链式反应（Digital polymerase chain reaction, d PCR）技术是通过将反应体系均分到数万个独立的PCR反应单元进行单分子级扩增，并结合泊松分布实现单拷贝核酸分子精确定量分析的PCR技术。dPCR技术具有灵敏度高、无需标准曲... 详细信息

数字聚合酶链式反应（Digital polymerase chain reaction, d PCR）技术是通过将反应体系均分到数万个独立的PCR反应单元进行单分子级扩增，并结合泊松分布实现单拷贝核酸分子精确定量分析的PCR技术。dPCR技术具有灵敏度高、无需标准曲线等优势，被广泛应用于疾病检测领域。随着阶梯乳化和三维成像等技术的引入，dPCR技术在检测精度、多重检测和检测速度等方面得到极大改进，显著提升了其临床疾病诊断性能。本文追溯了dPCR技术的发展历程，对其在肿瘤和感染等疾病检测中的应用进行了综述，分析了dPCR技术发展存在的挑战与机遇，以期为dPCR技术未来的开发利用提供参考，推动临床检验分子技术高质量发展。

关键词：数字聚合酶链式反应微流控芯片疾病诊断单分子检测评述

来源：博看期刊

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光学显微成像助力肿瘤精准医疗

中国激光 2024年第9期51卷 42-60页

作者：杨彬岳蜀华王璞北京航空航天大学生物与医学工程学院北京市生物医学工程高精尖创新中心北京100083

精准医疗是当下肿瘤诊疗的核心问题,即针对不同的病人定制治疗方案,以获得更好的治疗效果和预后。因肿瘤生物机制及诊疗方案的复杂性,现行基于基因测序和传统表型功能检测的肿瘤精准医疗临床实践,难以有效制定可覆盖大部分病患和药物选... 详细信息

精准医疗是当下肿瘤诊疗的核心问题,即针对不同的病人定制治疗方案,以获得更好的治疗效果和预后。因肿瘤生物机制及诊疗方案的复杂性,现行基于基因测序和传统表型功能检测的肿瘤精准医疗临床实践,难以有效制定可覆盖大部分病患和药物选择的治疗方案。光学显微成像技术能够对肿瘤组织和细胞中的基因组、蛋白组和代谢组信息进行定量分析和空间定位,识别特定病患肿瘤分子特征和生化反应异常,从而建立起肿瘤基因组和表型组的认知桥梁。本文介绍了不同光学显微成像技术在肿瘤精准医疗领域的相关研究和应用,包括多重免疫荧光(mIF)、荧光原位杂交(FISH)和相干拉曼散射(CRS)等光学显微成像技术。这些技术可以从肿瘤微环境、分子特征和代谢组学等角度进行深入洞察,在肿瘤精准医疗领域发挥着重要作用.

关键词：肿瘤精准医疗二代测序表型功能检测光学显微成像相干拉曼散射中红外光热成像