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基于气相色谱-质谱法测定茶叶中8种卡西酮类新精神活性物质

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食品科学 2024年第16期45卷 262-267页

作者：唐庆强王君张惠琴王巧霞曹晓钢吴春灯杨方福州海关技术中心福建福州350001 三明海关综合技术服务中心福建三明365001 拉萨海关技术中心西藏拉萨850002 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心上海200135 福州大学生物科学与工程学院福建福州350108

在优化前处理条件和色谱分离的基础上,建立同时测定茶叶中常见8种卡西酮类新精神活性物质的气相色谱-质谱测定方法。优化样品的提取、净化、色谱及质谱条件,最终选择用碱化甲醇提取,N-丙基乙二胺填料和HLB固相萃取小柱净化,经DB-17MS毛... 详细信息

在优化前处理条件和色谱分离的基础上,建立同时测定茶叶中常见8种卡西酮类新精神活性物质的气相色谱-质谱测定方法。优化样品的提取、净化、色谱及质谱条件,最终选择用碱化甲醇提取,N-丙基乙二胺填料和HLB固相萃取小柱净化,经DB-17MS毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25μm)分离,使用电子电离源,选择离子监测模式进行质谱监测。结果表明:该方法在0~200μg/L质量浓度范围具有良好的线性关系,相关系数(R^(2))均大于0.998;方法的检出限(R_(SN)=3)和定量限(R_(SN)=10)分别为7、25μg/kg;在阴性样品中进行1、2、10倍定量限3个水平的加标回收实验,8种卡西酮类化合物的加标回收率为67.2%~117.6%,相对标准偏差(n=6)为4.3%~12.3%。该方法稳定性好、灵敏度高,能够满足茶叶样品中卡西酮的检测要求。

关键词：卡西酮茶叶气相色谱-质谱新精神活性物质筛查

离子色谱-串联质谱法测定工业废水中的六价铬残留

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分析试验室 2021年第7期40卷 842-846页

作者：胡贝贞宋伟华蔡海江张昊董文洪绍兴海关综合技术服务中心绍兴312000 绍兴市水环境科学研究院有限公司绍兴312000

基于弱阴离子交换(WAX)小柱富集水样中的六价铬,三价铬则不被小柱保留而直接被去除,采用AS20柱分离、KOH溶液为淋洗液洗脱,采用串联四极杆质谱在电喷雾电离负离子模式下多反应监测模式(MRM)测定六价铬。研究了样品的净化条件、三价铬的... 详细信息

基于弱阴离子交换(WAX)小柱富集水样中的六价铬,三价铬则不被小柱保留而直接被去除,采用AS20柱分离、KOH溶液为淋洗液洗脱,采用串联四极杆质谱在电喷雾电离负离子模式下多反应监测模式(MRM)测定六价铬。研究了样品的净化条件、三价铬的去除和色谱质谱条件。结果表明,六价铬质量浓度在1.0~200μg/L范围内呈良好的线性,相关系数(R2)优于0.9995,方法定量限(LOQ)和检出限(LOD)分别为为1.0和0.3μg/L,加标回收率在72.5%~94.0%之间,相对标准偏差(RSD)为5.2%~8.6%。用所建立的方法对本地区代表性的51个工业废水样品进行了测定。

关键词：六价铬工业废水离子色谱-串联质谱残留

GC-MS法测定保健食品中他汀类药物含量的不确定度评定

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食品与机械 2022年第6期38卷 82-87页

作者：张丽霞郭庆园华启诚李向梅华南农业大学食品学院广东广州510000 清远海关综合技术服务中心广东清远511515 广州海关技术中心广东广州510000

目的:利用不确定度评定对水—氯化钠前处理保健食品的检测方法进行评价分析。方法:通过建立数学模型,分析不确定度来源,拟合各不确定度分量、合成不确定度及扩展不确定度。结果:试验中不确定度来源于标准曲线拟合、定容体积、标准溶液... 详细信息

目的:利用不确定度评定对水—氯化钠前处理保健食品的检测方法进行评价分析。方法:通过建立数学模型,分析不确定度来源,拟合各不确定度分量、合成不确定度及扩展不确定度。结果:试验中不确定度来源于标准曲线拟合、定容体积、标准溶液配制、重复性以及样品的称取。保健食品中美伐他汀、洛伐他汀以及辛伐他汀含量分别为0.0992,0.1010,0.0995mg/kg,扩展不确定度对应为0.0032,0.0056,0.0051mg/kg,k=2。结论:采用水—氯化钠前处理方法可以降低基质干扰并减少因重复性引入的不确定度。

关键词：水—氯化钠 GC-MS 不确定度他汀类药物保健食品

番茄褐色皱果病毒SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用

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植物检疫 2022年第1期36卷 25-33页

作者：李献锋胡淑青魏霜丁钿冯黎霞于璇胡学难广州海关技术中心广东广州510623 从化海关综合技术服务中心广州白云机场海关综合技术服务中心

根据番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)外壳蛋白(coat protein,CP)的保守基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR Green I的ToBRFV实时荧光RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、灵敏度检测,对自然感染ToBRF... 详细信息

根据番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)外壳蛋白(coat protein,CP)的保守基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR Green I的ToBRFV实时荧光RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、灵敏度检测,对自然感染ToBRFV的番茄、辣椒种子进行了检测验证。结果表明,构建的实时荧光RT-PCR检测ToBRFV阳性的番茄种子总RNA和重组质粒标准品的检测低限分别为0.2 ng/μL和50.0拷贝/μL,均为普通RT-PCR检测灵敏度的100倍;对番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)、番茄环斑病毒(tomato ringspot virus,ToRSV)、番茄黑环病毒(tomato black ring virus,TBRV)、番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)、辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)、烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)和烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,TRSV)等7种病毒均无扩增反应,具有很好的特异性。对50份疑似感染了ToBRFV的番茄和辣椒种子样品检测结果表明,与常规RT-PCR和已报道的2种实时荧光RT-PCR方法相比,本研究建立的实时荧光RT-PCR方法具有准确率高、特异性强、灵敏度高的特点,适用于低丰度ToBRFV的种子检测。

关键词：番茄褐色皱果病毒 SYBR Green I实时荧光RT-PCR 种子检测

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大肠菌群分子生物学检测方法研究进展

质量安全与检验检测 2024年第6期34卷 44-46页

作者：吴佩洁陈果李瑾李艳玲颜素娟李丹丹邱索平从化海关综合技术服务中心广东广州510900 茂名海关综合技术服务中心海口海关技术中心

大肠菌群是评价卫生质量的重要指标之一,是常见的必检项目,其检测结果已被应用于食品卫生、生产加工、消毒效果、公共场所等多个领域。大肠菌群传统的检测方法是培养法,培养法是公认的金标方法,但耗时较长,难以满足快速检测的需求,因此... 详细信息

大肠菌群是评价卫生质量的重要指标之一,是常见的必检项目,其检测结果已被应用于食品卫生、生产加工、消毒效果、公共场所等多个领域。大肠菌群传统的检测方法是培养法,培养法是公认的金标方法,但耗时较长,难以满足快速检测的需求,因此有必要研究大肠菌群快速检测方法。本文归纳总结了近年来大肠菌群分子生物学检测方法,为今后快速检测方法的进一步研究提供帮助。

关键词：大肠菌群分子生物学 PCR 荧光定量PCR

顶空气质联用法测定塑料制品中三聚甲醛和1,3-二氧戊烷残留量

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化学工程与技术 2021年第5期11卷 267-273页

作者：杨旦旦魏魏刘艇飞台州海关综合技术服务中心浙江台州

建立了塑料制品中三聚甲醛和1,3-二氧戊烷残留量的顶空–气相色谱–质谱联用检测方法。样品以N,N-二甲基乙酰胺为溶剂溶解,经90℃,30 min静态顶空后,采用气质联用法测定,外标法定量。三聚甲醛和1,3-二氧戊烷在1.0~20 μg范围内呈良好线... 详细信息

建立了塑料制品中三聚甲醛和1,3-二氧戊烷残留量的顶空–气相色谱–质谱联用检测方法。样品以N,N-二甲基乙酰胺为溶剂溶解,经90℃,30 min静态顶空后,采用气质联用法测定,外标法定量。三聚甲醛和1,3-二氧戊烷在1.0~20 μg范围内呈良好线性关系,相关系数(r2)均大于0.999,方法定量限为1.0 mg/kg。1.0、2.0、5.0 μg添加水平下的加标回收率为91.8%~102%,RSD为2.8%~9.2% (n = 6),该方法操作简便、准确可靠,可满足塑料制品中三聚甲醛和1,3-二氧戊烷残留量的定性和定量检测,可应用于塑料制品中三聚甲醛和1,3-二氧戊烷特定迁移量的筛检,节约成本,提高检测效率。

关键词：顶空气质联用三聚甲醛 1¸3-二氧戊烷塑料制品

鞘氨醇单胞菌与枯草芽孢杆菌对油品降解条件的优化

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中国口岸科学技术 2024年第3期6卷 91-96页

作者：张杰姚依妮王琦章超赵亚运沈飚何明郑蔚涛湖州海关综合技术服务部湖州313000 舟山海关综合技术服务中心舟山316000 湖州海关湖州313000 宁波海关综合技术服务中心宁波315000

石油烃污染持续时间长、去除难度大,如何优化石油成分的降解条件,有效去除石油烃污染日益受到国内外重视。鞘氨醇单胞菌的细胞外膜中不含脂多糖,但是却含有一种鞘糖脂,它所形成的疏水表面更有利于细胞摄取胞外物质。本实验选择易被微生... 详细信息

石油烃污染持续时间长、去除难度大,如何优化石油成分的降解条件,有效去除石油烃污染日益受到国内外重视。鞘氨醇单胞菌的细胞外膜中不含脂多糖,但是却含有一种鞘糖脂,它所形成的疏水表面更有利于细胞摄取胞外物质。本实验选择易被微生物所降解的柴油作为碳源,设计实验对多噬香鞘氨醇单胞菌降解柴油的温度、振荡器转速、pH、石油污染物浓度、投菌量、表面活性剂等条件进行优化。实验结果显示,多噬香鞘氨醇单胞菌在柴油浓度0.1 g/L,35℃,pH=7.2,转速为220 r/min^(-1)时降解效果较好。实验还针对枯草芽孢杆菌能分泌表面活性剂的特点,分析鞘氨醇单胞菌与枯草芽孢杆菌共同降解的可行性,包括以生物炭为载体来防止细菌的相互干扰,以期在后续实验中提高降解效率。

关键词：鞘氨醇单胞菌鞘糖脂多噬香鞘氨醇单胞菌优化表面活性剂枯草芽孢杆菌生物炭

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辣椒脉斑驳病毒的多基因联合检测与鉴定

中国农业科学 2020年第16期53卷 3412-3420页

作者：杨宏凯杨晶文沈建国蔡伟高芳銮福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州海关技术中心榕城海关综合技术服务中心

【目的】辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是辣椒生产上危害严重的病毒,也是口岸检疫的重要病毒之一。本文旨在建立一种快速检测ChiVMV的多基因联合检测方法,实现ChiVMV的快速、准确鉴定。【方法】利用DAS-ELISA、RT-... 详细信息

【目的】辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是辣椒生产上危害严重的病毒,也是口岸检疫的重要病毒之一。本文旨在建立一种快速检测ChiVMV的多基因联合检测方法,实现ChiVMV的快速、准确鉴定。【方法】利用DAS-ELISA、RT-PCR方法对印度进境辣椒进行检测以确定是否携带有ChiVMV。根据ChiVMV外壳蛋白(coat protein,CP)和圆柱状内含体蛋白(cytoplasmic inclusion protein,CI)保守区域分别设计引物,筛选两个基因(CP和CI)的特异性引物组合,通过设定不同的引物用量组合以及对退火温度等条件进行优化,探索最佳的反应条件,建立多基因联合检测方法。利用建立的多基因联合检测体系对包含ChiVMV在内的辣椒病毒进行检测,以验证该体系特异性。同时对ChiVMV阳性样品的不同浓度cDNA进行扩增,测定其检测灵敏度。此外,对田间辣椒样本进行检测,以验证体系的实际应用效果。【结果】通过对印度进境辣椒的DAS-ELISA检测,发现样品提取液与ChiVMV呈阳性反应;利用CP861-F/CP861-R特异性引物对进行RT-PCR,扩增出与预期大小相一致的特异性片段,确认该批辣椒样品携带有ChiVMV。多基因联合检测体系中,应用引物对CP337-F/CP337-R、CI655-F/CI655-R分别扩增出长度为337、655 bp的特异性目的片段。经优化后的反应体系和程序为cDNA 2μL、CP337-F/CP337-R各0.625μL(10μmol·L)、CI655-F/CI655-R各1.375μL(10μmol·L)、2×PCR Master Mix12.5μL、ddH2O 6.5μL,退火温度50℃,共35个循环。建立的多基因联合检测方法具有良好的特异性和灵敏度,两个基因检测灵敏度均为10-4数量级。实际应用检测结果表明,该方法可从感染ChiVMV的样品中同时扩增出CP和CI的特异性目的片段。【结论】建立的多基因联合检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点,可为辣椒脉斑驳病毒的快速检测提供可靠的技术支持。

关键词：辣椒脉斑驳病毒外壳蛋白基因圆柱状内含体蛋白基因多基因联合检测

福建省茶树病毒种类鉴定及多重PCR检测技术的建立

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中国农业科学 2024年第4期57卷 698-710页

作者：陈细红蔡伟虞赟李敏王念武杜振国沈建国高芳銮福建农林大学植物病毒研究所福州海关技术中心/福建省检验检疫技术研究重点实验室榕城海关综合技术服务中心

【目的】明确福建省茶树主要病毒种类和分布情况，并建立同时快速检测多种病毒的多重PCR检测技术。【方法】2019—2023年，从福建省福州、南平、宁德、泉州、漳州、厦门、三明、莆田和龙岩9个地市区采集具有褪绿、皱缩和坏死等疑似病毒... 详细信息

【目的】明确福建省茶树主要病毒种类和分布情况，并建立同时快速检测多种病毒的多重PCR检测技术。【方法】2019—2023年，从福建省福州、南平、宁德、泉州、漳州、厦门、三明、莆田和龙岩9个地市区采集具有褪绿、皱缩和坏死等疑似病毒感染症状的茶树样品1 869份，采用高通量测序技术结合PCR和RT-PCR检测的方法对茶树病毒病的病原进行鉴定，并将PCR扩增获得的特异性目的片段进行克隆和测序，对获得的序列进行系统发育分析；同时，根据GenBank上已报道的病毒序列设计特异性引物，通过退火温度、引物浓度、循环数等反应条件和反应程序的优化，建立同时检测福建茶树主要病毒的多重PCR检测技术，并测定该技术的特异性、灵敏度及实际应用效果。【结果】从所采集的茶树病样上检出3种病毒，按检出率从高到低依次为油茶双生病毒（oil tea associated geminivirus,OTaGV）(48.90%)、茶树坏死环斑病毒（tea plant necrotic ring blotch virus,TPNRBV）(26.75%)和茶树潜隐病毒1(camellia cryptic virus 1,CCV1)(17.98%)；在检出病毒的1 258份样品中，有807份为OTaGV、TPNRBV或CCV1单独侵染，检出率分别为37.20%、21.38%和5.56%；其余451份样品为2种或3种病毒复合侵染，复合侵染检出率达35.85%,OTaGV+CCV1、TPNRBV+CCV1、TPNRBV+OTaGV、OTaGV+CCV1+TPNRBV 4种类型复合侵染检出率分别为17.49%、0.40%、14.71%、3.26%。在地理分布上，OTaGV在福州、南平、宁德、泉州、漳州、厦门、三明、莆田和龙岩9个地区均有分布，其中漳州OTaGV检出率最高，为96.77%;CCV1在福州、南平、宁德、泉州、漳州、三明、莆田和龙岩8个地区均有分布，其中三明CCV1检出率最高，为66.00%;TPNRBV在福州、南平、宁德、泉州和漳州5个地区均有分布，其中泉州TPNRBV检出率最高，为79.13%；在福建省9个地区中，厦门地区仅检出OTaGV，三明、莆田和龙岩地区检出OTaGV和CCV1，其他5个地区同时检出OTaGV、TPNRBV和CCV1；福州、南平、宁德、泉州、漳州、三明、莆田7个地区检测到病毒复合侵染，其中漳州地区病毒复合侵染检出率最高（85.00%）、宁德地区病毒复合侵染检出率最低（23.03%）。利用测定的CCV1和TPNRBV部分基因序列构建系统发育树，结果表明本研究获得的CCV1分离物（FW）与已报道的福建分离物FJ-SH104(GenBank登录号：ON807095)亲缘关系最近、TPNRBV分离物（FU）与福建分离物QZHA92(GenBank登录号：OQ948454)亲缘关系最近。经优化建立的多重PCR检测技术特异性强，仅OTaGV、TPNRBV和CCV1能扩增出特异性目的片段，而其他病毒及健康茶树样品上均未扩增出特异性目的片段；多重PCR灵敏度最低可以检测到稀释至10-4倍的OTaGV、TPNRBV和10-3倍的CCV1；利用该多重PCR检测技术对茶园中采集的60份病样进行检测，检测结果与单一PCR检测结果完全相符。【结论】OTaGV、TPNRBV和CCV1是当前福建茶树上主要病毒种类，其中OTaGV为福建地区首次报道，该病毒可侵染茶树也为首次发现；在检出的3种病毒中，以OTaGV发生分布范围最广，其次为CCV1、TPNRBV；福建地区茶树病毒目前仍以单独侵染为主，但同时存在较多的复合侵染，复合侵染类型包括TPNRBV+CCV1、TPNRBV+OTaGV、CCV1+OTaGV和OTaGV+CCV1+TPNRBV；建立的多重PCR检测技术特异性强、灵敏度高，可用于茶园茶树上OTaGV、CCV1和TPNRBV3种病毒的快速检测。研究结果可为福建茶树病毒病的综合防控提供理论依据和技术支持。

关键词：茶树病毒病原鉴定多重PCR 分子检测福建省