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犊牛腹泻症的病原学检测及鉴定

新疆农业科学 2024年第6期61卷 1535-1543页

作者：苗书魁王俊伟陆桂丽汪萍王杰魏玉荣魏婕米晓云沙依兰·卡依扎新疆畜牧科学院兽医研究所(新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心)/新疆动物疫病研究重点实验室乌鲁木齐830013

【目的】研究新疆某规模化牛场犊牛腹泻症的主要病原。【方法】采用RT-PCR方法,检测14份腹泻犊牛粪便中的病毒,对4头死亡犊牛肝组织进行细菌分离培养及鉴定、小鼠致病性和药物敏感性试验。将分离的致病菌扩增16S rDNA基因片段并测序,并... 详细信息

【目的】研究新疆某规模化牛场犊牛腹泻症的主要病原。【方法】采用RT-PCR方法,检测14份腹泻犊牛粪便中的病毒,对4头死亡犊牛肝组织进行细菌分离培养及鉴定、小鼠致病性和药物敏感性试验。将分离的致病菌扩增16S rDNA基因片段并测序,并将其结果在NCBI中用BLAST搜索同源序列,分析遗传进化特性。【结果】该牛场犊牛腹泻的病原为牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)、牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)、大肠埃希氏杆菌(Escherichia coli,***)和肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae,***)。14份粪便中,BCoV检出率为64.29%,BRV检出率为50.00%;4份肝组织中,***检出率为100.00%,***检出率为50.00%。分离的2种致病菌***和***对阿米卡星敏感,对其它16种抗生素均耐药。【结论】该牛场引起犊牛腹泻的主要病原为BCoV、BRV、***和***,存在病毒与细菌的混合感染。选择阿米卡星药物防治***和***。

关键词：犊牛腹泻病原学检测鉴定

布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因突变特征分析

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中华地方病学杂志 2024年第2期43卷 94-97页

作者：郑莹马晓菁刘丽娅叶锋谷文喜易新萍新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830011

目的分析布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因的突变特征。方法选取分离自新疆维吾尔自治区的4株布鲁氏菌利福平耐药株(JSY-26、G-9、WSY-13、AW-3株)DNA,采用PCR扩增利福平rpoB基因,并对核苷酸序列进行测序。以布鲁氏菌利福平耐药标准株(RB51... 详细信息

目的分析布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因的突变特征。方法选取分离自新疆维吾尔自治区的4株布鲁氏菌利福平耐药株(JSY-26、G-9、WSY-13、AW-3株)DNA,采用PCR扩增利福平rpoB基因,并对核苷酸序列进行测序。以布鲁氏菌利福平耐药标准株(RB51株)和利福平敏感株(ALT-8株)的rpoB基因序列为参照,应用Mega 7.0软件比对分析4株布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因利福平耐药决定区(rifampicin resistance determination region,RRDR)内外的碱基突变位点及类型。结果经序列比对分析,JSY-26和WSY-13株均在rpoB基因RRDR 1576 bp处发生单碱基点突变,碱基由鸟嘌呤(guanine,G)突变为腺嘌呤(adenine,A);G-9株在rpoB基因RRDR 1606 bp处发生单碱基点突变,碱基由胞嘧啶(cytosine,C)突变为A。AW-3株在rpoB基因RRDR外2536、2537、2626、2636、2654 bp处出现3种类型共5处突变,分别为插入突变3处[胸腺嘧啶(thymine,T)插入1次、C插入2次],缺失突变1处(C缺失),单碱基点突变1处(由G突变为C)。结论布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因RRDR突变以单碱基点突变为主,RRDR外则出现多位点插入和缺失突变。

关键词：布鲁氏菌利福平耐药 rpoB基因

绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因的分子特征及抗原性分析

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江苏农业科学 2024年第17期 58-64页

作者：操义恒贾开文党士荣胡亚辉王巧梅俞杰郭云霞周霞黄新钟发钢韩猛立吴桐忠张倩石河子大学动物科技学院新疆农垦科学院畜牧兽医研究所

为研究绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因的分子特征、抗原性及其遗传进化关系，采用PCR技术对绵羊肺源大肠杆菌XJ10菌株的cyaA基因进行扩增、克隆并测序，应用定量PCR检测cyaA基因在不同培养阶段的mRNA表达量，利用在线软件对其进行编码蛋白分... 详细信息

为研究绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因的分子特征、抗原性及其遗传进化关系，采用PCR技术对绵羊肺源大肠杆菌XJ10菌株的cyaA基因进行扩增、克隆并测序，应用定量PCR检测cyaA基因在不同培养阶段的mRNA表达量，利用在线软件对其进行编码蛋白分子特征、抗原性及其遗传进化分析。结果显示，cyaA基因全长2 547 bp,编码848个氨基酸；cyaA基因在细菌对数期的mRNA表达量最高，其次是稳定期及迟缓期，在衰亡期的mRNA表达量最低；氨基酸序列分析发现，分子式为C4 389H6 759N1 193O1 273S30,理论分子质量为97.57 ku,理论等电点为5.82,为酸性亲水性蛋白，稳定性较低；二级结构中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-折叠所占比例分别为42.81%、39.03%、14.27%和3.89%。AC蛋白无信号肽与跨膜区，保守结构域位于1～848位氨基酸，属于腺苷酸环化酶超家族，具有14个开放阅读框，存在81个磷酸化位点。AC蛋白B细胞优势表位共16个，分别位于第44～51、61～65、248～250、259～267、296～304、355～366、436～439、456～456、476～481、489～490、540～559、589～597、634～640、717～722、766～773、806～806区段；遗传进化分析发现大肠杆菌XJ10菌株AC蛋白与志贺氏菌AC蛋白相似性最高。本试验结果为进一步研究大肠杆菌AC蛋白的功能及其作为大肠杆菌疫苗候选抗原奠定了基础。

关键词：绵羊肺源大肠杆菌 cyaA基因分子特征抗原性遗传进化

粪菌移植治疗犊牛无特异病原性腹泻和细菌性腹泻的疗效及其肠道菌群变化

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畜牧兽医学报 2024年

作者：杨作斌史晋成马紫薇陈如龙舒展李鑫王金泉钟旗马雪连姚刚新疆农业大学动物医学学院新疆汗庭牧元养殖科技有限责任公司新疆阿勒泰地区动物疾控中心新疆畜牧科学院兽医研究所

旨在比较粪菌移植（Faecal microbiota transplantation，FMT）治疗犊牛无特异病原性腹泻和细菌性腹泻的疗效和肠道菌群变化。选择8头健康新生犊牛作为健康对照组（Health，H），再选择具有临床腹泻症状的新生犊牛24头，经腹泻相关病原... 详细信息

旨在比较粪菌移植（Faecal microbiota transplantation，FMT）治疗犊牛无特异病原性腹泻和细菌性腹泻的疗效和肠道菌群变化。选择8头健康新生犊牛作为健康对照组（Health，H），再选择具有临床腹泻症状的新生犊牛24头，经腹泻相关病原检测，16头无腹泻相关病原感染的腹泻犊牛分为无特异病原腹泻组（Diarrhea，D），8头感染产志贺毒素大肠埃希菌（Shiga toxin-producing ***，STEC）的腹泻犊牛作为STEC腹泻组（STEC-Diarrhea，SD）。各组犊牛平均日龄为（14.8±6.1）d。通过腹泻病原和腹泻症状筛查选择供体犊牛并制备粪菌液，口服粪菌液（每头250 mL，含40 g单一供体粪便）治疗腹泻犊牛，根据布里斯托粪便分型法（Bristol Stool Scale， BSS）评估治疗有效性。治疗后D组犊牛命名为无特异病原腹泻治疗组（FMT-D），SD组犊牛为STEC腹泻治疗组（FMT-SD）。记录治愈天数和日增重，测定犊牛生理常值、血常规、细胞因子及免疫球蛋白。采集各组犊牛直肠粪便进行16S rRNA基因测序，分析其肠道菌群变化。结果显示，经FMT治疗，D组和SD组犊牛的布里斯托粪便分型分别从6～7型极显著下降为4～5型（P0.05）。FMT-D组和FMT-SD组的平均治愈天数（4.9和4.4）无显著差异（P>0.05）。治疗后150 d，FMT-D组的犊牛日增重与H组无显著差异，而FMT-SD组的日增重显著低于H组（P0.05）。D组和SD组犊牛肠道菌群的丰富度和多样性均显著低于H组（P0.05）。本研究表明，FMT对无特异病原性腹泻和细菌性的犊牛腹泻均有显著治疗效果。FMT治疗显著降低了腹泻犊牛肠道菌群中具有致病性菌属的相对丰度，同时增加了潜在益生菌属的相对丰度，肠道菌群的组成结构趋向健康，犊牛免疫功能显著增强。FMT治疗可能对犊牛的增重和生长产生长期有益影响。但FMT对这两种腹泻犊牛肠道菌群的恢复过程中存在一定差异。

关键词：犊牛腹泻粪菌移植效果评价肠道菌群

新疆动物源携带blaCTX-M且对多黏菌素耐药大肠杆菌的耐药性及传播特性

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中国兽医学报 2024年第2期44卷 312-318页

作者：王芋丹王昊蕊王磊队森·木拉力别克苏战强谢金鑫米晓云佟盼盼新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆畜牧科学院新疆动物疫病研究重点实验室/兽医研究所新疆乌鲁木齐830011

为探究新疆动物源携带blaCTX-M且对多黏菌素耐药大肠杆菌的流行特征,采用K-B纸片法对40株猪、羊、骆驼、马、鸡、鹅、鸽、犬和猫源携带blaCTX-M且对多黏菌素耐药的大肠杆菌进行了药物敏感试验,利用PCR方法进行耐药基因、整合子检测以及... 详细信息

为探究新疆动物源携带blaCTX-M且对多黏菌素耐药大肠杆菌的流行特征,采用K-B纸片法对40株猪、羊、骆驼、马、鸡、鹅、鸽、犬和猫源携带blaCTX-M且对多黏菌素耐药的大肠杆菌进行了药物敏感试验,利用PCR方法进行耐药基因、整合子检测以及质粒复制子分型,通过接合试验对多黏菌素耐药表型的水平转移进行了研究。结果显示,这些大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、复方新诺明、头孢曲松、四环素、链霉素、头孢噻肟和庆大霉素的耐药率为82.5%~100%;对氟苯尼考、磷霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、阿奇霉素、阿米卡星和头孢吡肟耐药率为20.0%~67.5%;对哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦、头孢西丁和亚胺培南的耐药率为2.5%~10.0%,均为多重耐药。40株受试株中,各耐药基因的检出情况,mcr-1,12.5%;blaCTX-M-1,85%;blaCTX-M-9,15%;blaTEM,60%;floR,70%;tetA,55%;tetG,17.5%;sul2,37.5%;sul1,17.5%;aadA1,35%;strA,32.5%;aac,17.5%;未检出mcr2~10、blaCTX-M-2、blaSHV、strB和tetE。共检出4种质粒复制子型,IncFIB,52.5%;IncHI2,20%;IncN,20%;IncFIA,7.5%。9株携带Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ类整合子。40株受试菌均可水平转移多黏菌素耐药表型,但在接合子中未检测出耐药基因、质粒和整合子。结果表明,新疆动物源携带blaCTX-M且对多黏菌素耐药大肠杆菌多重耐药情况严重,耐药基因携带种类多样,均可水平转移多黏菌素耐药表型,应当谨慎使用多黏菌素,以期减缓耐药细菌的发展。

关键词：携带blaCTX-M大肠杆菌多黏菌素耐药流行特征动物新疆

ZBTB4基因多态性与驴体尺性状的关联分析

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中国畜牧杂志 2024年

作者：孙琛富常丝雨曾申明帕热哈提江·吾甫尔付海源中国农业大学动物科学技术学院新疆畜牧科学院畜牧研究所广灵县畜牧兽医服务中心

本研究在课题组前期关于驴体尺性状全基因组关联分析的基础上，探索候选基因ZBTB4在不同驴群体中的遗传多态性，并与体尺性状进行关联分析，寻找与驴体型大小显著相关的分子遗传标记，为驴的专门化品种培育提供参考。试验共挑选阳原驴... 详细信息

本研究在课题组前期关于驴体尺性状全基因组关联分析的基础上，探索候选基因ZBTB4在不同驴群体中的遗传多态性，并与体尺性状进行关联分析，寻找与驴体型大小显著相关的分子遗传标记，为驴的专门化品种培育提供参考。试验共挑选阳原驴、广灵驴和新疆驴3个中国地方驴品种以及1个未鉴定的小体型驴品种，总计340头成年母驴作为研究对象，通过PCR扩增ZBTB4基因外显子及周围部分序列，通过测序结果寻找单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）位点，并将SNP位点的基因型与驴体尺性状进行关联分析。结果表明：在ZBTB4基因第2内含子（rs1：14342082A>G）和第4外显子（rs2：14345176A>G）上共发现了2个SNP位点。通过对SNP位点与试验驴体尺性状关联分析发现，2个SNP位点的基因型与驴体型大小显著相关，即不同基因型在体高、体长、胸围、管位4种性状上存在显著差异。其中，AA基因型个体的体尺数据显著高于GA和GG基因型，GA基因型个体显著高于GG。综上，ZBTB4基因的2个SNP位点（rs1：14342082A>G，rs2：14345176A>G）可作为驴体尺性状的分子遗传标记，为驴的分子育种和品种选育提供理论支持。

关键词： ZBTB4 体尺性状 SNP 关联分析驴

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奶牛卵泡颗粒细胞在卵泡发育中的作用机制

畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2313-2324页

作者：宋浩然冯肖艺张培培张航牛一凡余洲万鹏程崔凯赵学明中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 青岛农业大学动物科技学院青岛266000 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所石河子832000

随着奶牛产奶量的提高,我国奶业产业链也在不断优化和升级,朝着现代化、规范化和国际化的方向迈进。然而,高产奶牛的繁殖性能却在逐渐降低,目前,这已成为奶牛相关研究工作者面临的共同问题。卵泡发育与繁殖效率关系密切,卵泡正常发育是... 详细信息

随着奶牛产奶量的提高,我国奶业产业链也在不断优化和升级,朝着现代化、规范化和国际化的方向迈进。然而,高产奶牛的繁殖性能却在逐渐降低,目前,这已成为奶牛相关研究工作者面临的共同问题。卵泡发育与繁殖效率关系密切,卵泡正常发育是奶牛发情、排卵等繁殖活动的先决条件。其中,卵泡颗粒细胞能够与卵母细胞和卵泡膜细胞相互作用分泌多种激素和因子,同时,作为多种激素和细胞因子的受体影响卵泡发育。因此,本文总结了关于卵泡颗粒细胞功能与卵泡发育的相关研究,并以卵泡颗粒细胞在卵泡发育过程中的作用和颗粒细胞对卵母细胞的影响为重点进行综述,以期为今后相关研究提供理论参考。

关键词：颗粒细胞卵泡发育奶牛繁殖性能相互作用

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重组pET30a-EgM9蛋白高免兔血清对体外培养细粒棘球绦虫发育的影响

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动物医学进展 2024年第5期45卷 25-29页

作者：余婉蓉班万里王冰洁潘星羽幕永辉刘帅吾力江·卡马力徐晶喻昌盛赵莉张壮志新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆畜牧科学院兽医研究所新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心新疆乌鲁木齐830013 昌吉市动物疾病预防控制中心新疆昌吉831100

探究egM9基因在细粒棘球绦虫性成熟发育过程中的调控机制。利用重组pET30a-EgM9蛋白高免血清对细粒棘球绦虫进行体外干预试验,观察干预后虫体的发育情况。在体外培养模型中,用pET30a-EgM9蛋白高免兔血清作用于体外培养30 d的虫体,通过We... 详细信息

探究egM9基因在细粒棘球绦虫性成熟发育过程中的调控机制。利用重组pET30a-EgM9蛋白高免血清对细粒棘球绦虫进行体外干预试验,观察干预后虫体的发育情况。在体外培养模型中,用pET30a-EgM9蛋白高免兔血清作用于体外培养30 d的虫体,通过Western blot检测虫体蛋白的免疫反应性,RT-qPCR分析虫体中EgM9基因的表达水平。显微观察表明经高免血清干预后虫体明显向成囊方向发育。Western blot直接法表明高免兔血清可以与虫体蛋白形成复合物,间接法证明EgM9多克隆鼠血清未与上述复合物发生抗原抗体特异性结合。RT-qPCR验证EgM9高免兔血清可刺激虫体中的EgM9基因的表达。说明通过高免血清体外干预,可促进EgM9在基因和转录水平上的表达,为筛选细粒棘球绦虫终末宿主疫苗候选基因提供理论依据。

关键词：细粒棘球绦虫体外培养体外干预

基于全基因组重测序解析皮山红羊群体遗传结构及产羔数候选基因研究

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 624-638页

作者：石兰马梅兰木合塔帕·买买提江杨会国依明·苏来曼新疆农业大学动物科学学院乌鲁木齐830052 新疆畜牧科学院乌鲁木齐830011

[目的]皮山红羊是分布于新疆和田地区的新发现多羔性地方绵羊品种。本研究基于全基因组重测序技术从基因组水平上了解皮山红羊的群体遗传结构及产羔性状受选择信号区域,并对候选基因进行验证。[方法]选择30只连续产2~3羔的经产皮山红羊... 详细信息

[目的]皮山红羊是分布于新疆和田地区的新发现多羔性地方绵羊品种。本研究基于全基因组重测序技术从基因组水平上了解皮山红羊的群体遗传结构及产羔性状受选择信号区域,并对候选基因进行验证。[方法]选择30只连续产2~3羔的经产皮山红羊母羊为高繁组(high fertility, HF),30只连续产单羔的经产皮山红羊母羊为低繁组(low fertility, LF),对这两个群体进行全基因组重测序。应用主成分分析(PCA)、系统进化树、群体遗传结构及全基因组扫描(Fst&θπ)等综合分析法确定候选区域,进一步筛选皮山红羊产羔性状候选基因。采用飞行质谱分型技术对候选基因进行分型验证。[结果]皮山红羊高、低繁殖组群体连锁不平衡(LD)分析衰减曲线相似,系统进化树显示两组群体分化程度不明显。PCA结果显示,两个群体明显聚成一簇,个别个体离群,其位置及相互关系符合进化树结构以及群体结构结果。设置同时达到Top 1%Z(Fst)值和θπ值的窗口为候选区域,共注释229个强选择信号,HF和LF组注释基因分别为86和143个,其中筛选到42个可能与繁殖性状相关的候选基因,如MARF1、CHGA、BMPR1B、IMMP2L、CDK14、ZDHHC3、CCDC71、DSCAML1、LIMK2、P2RY14等。经GO与KEGG通路分析发现,GO功能显著富集在钠离子跨膜转运蛋白活性的调控、凋亡过程的调控、钠离子通道调节剂活性、G蛋白偶联受体结合、G蛋白偶联嘌呤核苷酸受体活性等条目,KEGG显著富集通路主要与信号传递、信号通路、物质代谢等通路有关。分型结果表明,MARF1基因有11个SNPs位点在皮山红羊群体中真实存在,其中,g.14023542 T>A、g.14036507 A>G、g.14046123 C>T位点与群体平均产羔数显著关联,且前2个突变位点呈现强连锁关系(r2>0.3),g.14023542 T>A位点TT基因型具有最多的平均产羔数(1.901±0.675)。[结论]皮山红羊高繁组和低繁组两个群体遗传背景相似,具有一定程度的分化,但分化不明显。MARF1、CHGA、BMPR1B、IMMP2L、CDK14、ZDHHC3、CCDC71、DSCAML1、LIMK2、P2RY14等基因可能是影响皮山红羊产羔性状的候选基因。MARF1基因的3个SNPs位点可作为皮山红羊产羔性状潜在分子选育标记。

关键词：皮山红羊全基因组重测序选择信号产羔数

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