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芜菁酸性多糖对肺损伤小鼠过氧化损伤及细胞凋亡的影响

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天然产物研究与开发 2024年

作者：海力茜·陶尔大洪吴美美卡迪尔亚·库尔班欧阳成宣王鑫徐茜新疆医科大学药学院

研究芜菁酸性多糖（Brassica rapa L. acidic polysachharide-1，BRAP-1）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的肺损伤小鼠的保护作用及机制。建立LPS诱导肺损伤小鼠模型进行BRAP-1干预，通过生化试剂检测小鼠肺泡灌洗液中髓过氧... 详细信息

研究芜菁酸性多糖（Brassica rapa L. acidic polysachharide-1，BRAP-1）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的肺损伤小鼠的保护作用及机制。建立LPS诱导肺损伤小鼠模型进行BRAP-1干预，通过生化试剂检测小鼠肺泡灌洗液中髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、过氧化氢(H2O2)水平；Western blot法检测肺组织中蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-4，5-bisphosphate 3-kinase，PI3K）、细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）、磷酸化蛋白激酶B（phospho-protein kinase B，p-AKT）蛋白表达水平及与凋亡相关的B淋巴细胞瘤-2样蛋白关联X蛋白（b-cell lymphoma-2-associated X protein，BAX）、半胱氨酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2样蛋白（b-cell lymphoma-2，BCL-2）表达水平。结果表明与模型组相比，BRAP-1不同程度降低小鼠肺泡灌洗液中MDA、MPO、H2O2及肺组织中PI3K、AKT蛋白表达水平以及凋亡因子BAX、凋亡关键因子Cleaved Caspase-3蛋白表达水平，增强抗凋亡因子BCL-2蛋白表达水平。BRAP-1可通过清除肺损伤小鼠的肺组织自由基、抑制氧化应激，调节肺组织细胞凋亡，从而起到保护作用。

关键词：芜菁酸性多糖肺损伤过氧化损伤细胞凋亡

酒花提取物调控Wnt/β-catenin信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠的作用及机制研究

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中药新药与临床药理 2024年第09期 1337-1343页

作者：李敏扎克艳·地力夏提胡君萍杨建华新疆医科大学药学院新疆医科大学第一附属医院药学部

目的探讨酒花提取物对去卵巢骨质疏松大鼠的作用及机制。方法将60只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(戊酸雌二醇，0.105 mg·kg-1)和酒花提取物低、中、高剂量组(65.625、131.120、196.875 mg·kg-1)，每组10只。除... 详细信息

目的探讨酒花提取物对去卵巢骨质疏松大鼠的作用及机制。方法将60只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(戊酸雌二醇，0.105 mg·kg-1)和酒花提取物低、中、高剂量组(65.625、131.120、196.875 mg·kg-1)，每组10只。除假手术组外，其余各组大鼠均切除双侧卵巢，术后灌胃给药，每日1次，连续给药90 d。采用HE染色法观察大鼠骨组织病理形态变化，测定骨形态计量学参数，计算骨小梁数目（Tb.N）、骨小梁厚度（***）、骨小梁分离度（***）和骨小梁面积百分数（***）；测定大鼠骨组织生物力学指标：最大载荷、弹性模量、断裂强度；采用ELISA法测定大鼠血清雌激素（E2）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP5b）、骨钙素（OC）、骨特异性碱性磷酸酶（BALP）含量；采用全自动生化仪测定大鼠血清碱性磷酸酶（ALP）含量；采用RT-PCR及Western Blot法检测大鼠胫骨组织OPG、RANKL、ERα、ERβ、Wnt16、β-catenin mRNA及蛋白表达水平。结果与假手术组相比，模型组大鼠胫骨骨小梁断裂，骨髓腔变大，呈现骨质疏松结构；胫骨Tb.N、***、***明显降低（P<0.05）,***明显升高（P<0.05）；股骨的最大载荷、弹性模量和断裂强度均明显降低（P<0.05）；血清E2含量明显降低（P<0.05）,TRACP5b、OC、ALP、BALP含量均明显升高（P<0.05）；胫骨组织的OPG、OPG/RANKL、ERα、ERβ、β-catenin、Wnt16 mRNA及蛋白表达明显下调（P<0.05）,RANKL mRNA及蛋白表达明显上调（P<0.05）。与模型组相比，阳性对照组及酒花提取物高剂量组的上述指标均明显回调（P<0.05）。结论酒花提取物对绝经后骨质疏松症具有一定的防治作用，其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路，进而调控OPG/RANK/RANKL信号通路有关。

关键词：酒花提取物骨质疏松症去卵巢大鼠 Wnt/β-catenin信号通路 OPG/RANK/RANKL信号通路

胀果甘草多糖佐助的树突状细胞疫苗对H22肝癌荷瘤小鼠的免疫治疗作用

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中国医院药学杂志 2024年第1期44卷 35-41页

作者：俞永婷娜迪热木·肖克拉提卢泳强周朝曦丛媛媛新疆医科大学药学院新疆乌鲁木齐830011

目的:制备胀果甘草多糖佐助的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗,研究其对H22肝癌荷瘤小鼠的免疫治疗作用。方法:从小鼠骨髓中分离培养得到骨髓源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC),用H22肝癌抗原致敏DC,再加入一... 详细信息

目的:制备胀果甘草多糖佐助的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗,研究其对H22肝癌荷瘤小鼠的免疫治疗作用。方法:从小鼠骨髓中分离培养得到骨髓源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC),用H22肝癌抗原致敏DC,再加入一定浓度的胀果甘草多糖佐剂制备DC疫苗,用倒置显微镜观察DC形态变化、流式细胞仪检测DC疫苗表型。建立H22肝癌荷瘤小鼠模型,按数字表法随机分为模型组、阳性组、DC组、TNF-α组、GiP组和GiP-B1组,用胀果甘草多糖佐助的DC疫苗免疫治疗荷瘤小鼠2次。末次给药后第5天处死小鼠,检测脏器指数及抑瘤率;酶联免疫法检测小鼠血清中IL-12(P70)、IFN-γ、IL-4和IL-10细胞因子含量;HE染色观察小鼠肝脏和肿瘤组织病理形态变化;免疫组化检测肿瘤组织Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。结果:胀果甘草多糖作为DC疫苗佐剂,能够上调DC表面标志分子的表达水平(P<0.05);胀果甘草多糖佐助的DC疫苗能够减缓肝癌小鼠肿瘤生长速度,升高肝癌小鼠脾脏指数和胸腺指数(P<0.05),增加肝癌小鼠血清中IL-12和IFN-γ含量(P<0.05),降低IL-10和IL-4含量(P<0.05),提高肿瘤组织Bax/Bcl-2比值(P<0.01)。结论:胀果甘草多糖作为DC疫苗的佐剂,可以体外诱导DC成熟及活化,胀果甘草多糖佐助的DC疫苗对肝癌小鼠具有一定的免疫治疗作用,其抗肿瘤作用机制可能与促进DC成熟增加IL-12和IFN-γ的分泌,介导细胞免疫,并促进肿瘤细胞凋亡有关。

关键词：胀果甘草多糖树突状细胞树突状细胞疫苗免疫治疗抗肿瘤作用

拉曼光谱技术在管花肉苁蓉多糖纯化过程中含量快速测定研究

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化学研究与应用 2024年第6期36卷 1230-1235页

作者：王宇张思程张辉沈静姚军新疆医科大学药学院新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院药学部新疆乌鲁木齐830054

采用拉曼光谱技术结合化学计量学建立管花肉苁蓉中多糖大孔吸附树脂纯化过程的分析模型。收集管花肉苁蓉中多糖的大孔吸附树脂洗脱液,采用苯酚-硫酸显色法测定其多糖含量,采集洗脱液的拉曼光谱信息。通过PCA主成分分析分检测异常光谱,利... 详细信息

采用拉曼光谱技术结合化学计量学建立管花肉苁蓉中多糖大孔吸附树脂纯化过程的分析模型。收集管花肉苁蓉中多糖的大孔吸附树脂洗脱液,采用苯酚-硫酸显色法测定其多糖含量,采集洗脱液的拉曼光谱信息。通过PCA主成分分析分检测异常光谱,利用Kennard-Stone算法将样本集划分为训练集和预测集,通过卷积平滑法(SG)、标准正态变量(SNV)、多重散射校正(MSC)、一阶导数(FD)、二阶导数(SD)以及它们的组合进行预处理优化模型,采用连续投影算法(SPA)和稳定性竞争性自适应重加权采样(sCARS)进行变量选择,采用随机森林(RF)、偏最小二乘法(PLS)和支持向量机(SVM)建立模型,采用决定系数(R^(2))、均方根误差(RMSE)和剩余预测偏差(RPD)对模型进行评价。结果表明,三种模型的R^(2)值均>0.95,RPD均>4,RMSE均技术结合化学计量学法可用于管花肉苁蓉中多糖的纯化过程质量评价。

关键词：管花肉苁蓉多糖拉曼光谱纯化过程化学计量学

基于网络药理学和实验验证探讨毛菊苣治疗肝纤维化作用机制

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中国现代应用药学 2024年第3期41卷 303-312页

作者：杨建华耿若愚臧薇李茜杜超胡君萍新疆医科大学第一附属医院乌鲁木齐830054 新疆医科大学药学院乌鲁木齐830017 河北廊坊市药品检验所河北廊坊065000

目的采用网络药理学和实验验证的方法探究毛菊苣抗肝纤维化的作用机制。方法借助TCMSP、Pubchem、SwissTargetPrediction、Genecards等数据库构建“成分-靶点-通路”作用网,STRING数据库预测毛菊苣抗肝纤维化作用靶点,应用DAVID数据库进... 详细信息

目的采用网络药理学和实验验证的方法探究毛菊苣抗肝纤维化的作用机制。方法借助TCMSP、Pubchem、SwissTargetPrediction、Genecards等数据库构建“成分-靶点-通路”作用网,STRING数据库预测毛菊苣抗肝纤维化作用靶点,应用DAVID数据库进行KEGG和GO富集分析,AUTODOCK对活性成分和关键靶点进行分子对接。用PDGFBB诱导活化细胞,验证秦皮甲素、秦皮乙素、菊苣酸、咖啡酸、绿原酸和异绿原酸等6个化合物对HSC-T6细胞的增殖、凋亡以及对肝纤维化指标的影响,Western blotting检测各成分对HSC-T6细胞中Ras、ERK1、ERK2、C-fos、JNK蛋白表达。结果网络药理学筛选到成分与肝纤维化的共同靶点239个,PPI分析显示SRC、STAT3、HSP90AA1等靶点为关键靶点,KEGG分析结果显示毛菊苣影响的通路包括癌症通路、代谢通路等,GO分析预测毛菊苣主要影响信号转导等过程,分子对接结果显示与成分能够良好结合的靶点蛋白为MAPK1,与蛋白能够良好结合的成分为秦皮乙素、咖啡酸和绿原酸。6种化合物对PDGF-BB诱导HSC-T6细胞活化增殖的抑制作用均强于模型组,且均具有逆转肝纤维化指标的作用,其中秦皮乙素活性最强(P<0.01)。与模型组相比,6种化合物干预后HSC-T6细胞中的Ras、ERK1、ERK2、C-fos、JNK表达量均有所下降。结论毛菊苣中各成分均有不同的抗肝纤维化作用,其作用与抑制ERK/RAS通路激活的有关。

关键词：毛菊苣肝纤维化网络药理学分子对接实验验证

复合益生菌酸马奶对AD大鼠记忆功能及肠道菌群的影响

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中国乳品工业 2024年第9期52卷 5-13,21页

作者：伊再提古丽·外力卡丽比奴尔·艾尔肯徐志伟马健宝古丽巴哈尔·卡吾力新疆医科大学药学院乌鲁木齐830011

文章探讨了复合益生菌酸马奶对AD大鼠的缓解作用及肠道菌群的影响。72只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(甘露特纳胶囊)、复合益生菌酸马奶高、中、低剂量组并建立AD大鼠模型。持续灌胃60 d并收集粪便供16S rRNA测序;检... 详细信息

文章探讨了复合益生菌酸马奶对AD大鼠的缓解作用及肠道菌群的影响。72只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(甘露特纳胶囊)、复合益生菌酸马奶高、中、低剂量组并建立AD大鼠模型。持续灌胃60 d并收集粪便供16S rRNA测序;检测大鼠行为学变化、海马CA1区神经元形态变化及海马区BDNF蛋白表达量;检测血清5-羟色胺(5-HT)、γ-氨基丁酸(GABA)、白细胞介素-1β、白细胞介素-18、肿瘤坏死因子-α的浓度。与模型组比较,阳性对照组和复合益生菌酸马奶高剂量组有效区域进入次数显著增加,逃避潜伏期缩短,原平台所在象限滞留时间百分比增加;阳性对照组和复合益生菌酸马奶各剂量组神经细胞受损程度低于模型组;与模型组相比,阳性对照组和复合益生菌酸马奶高剂量组AD大鼠海马区BDNF蛋白和血清5-HT、GABA含量显著增加,IL-1β、IL-18、TNF-α显著降低;阳性对照组、复合益生菌酸马奶高剂量组的肠道菌群多样性与正常对照组接近,复合益生菌酸马奶对海马体的学习及记忆力有积极影响。

关键词：复合益生菌酸马奶阿尔茨海默肠道菌群

去氢骆驼蓬碱诱发PC12细胞凋亡时对线粒体融合分裂的影响

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医药导报 2024年第2期43卷 174-183页

作者：巩月红赵美玲马瑞佳林玉霞赵军王建华新疆医科大学第一附属医院药学部乌鲁木齐830054 新疆医科大学药学院乌鲁木齐830054 新疆医科大学第七附属医院药学部乌鲁木齐830028

目的探讨去氢骆驼蓬碱(HM)对PC12细胞线粒体功能损伤和线粒体融合分裂相关蛋白表达水平的影响。方法PC12细胞分为细胞对照组、HM组、线粒体分裂抑制剂Mdivi-1组、HM+Mdivi-1组、线粒体裂变激动剂WY14643组、HM+WY14643组,药物浓度均为1... 详细信息

目的探讨去氢骆驼蓬碱(HM)对PC12细胞线粒体功能损伤和线粒体融合分裂相关蛋白表达水平的影响。方法PC12细胞分为细胞对照组、HM组、线粒体分裂抑制剂Mdivi-1组、HM+Mdivi-1组、线粒体裂变激动剂WY14643组、HM+WY14643组,药物浓度均为1、10、25、50、100μmol·L^(-1),处理24 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,显微镜观察细胞形态;MitoTracker Red探针染色观察线粒体形态和纵横轴长度比值,JC-1染色检测线粒体膜电位,试剂盒检测ROS、ATP水平和乳酸脱氢酶(LDH)活性,免疫荧光染色法和Western blotting检测胱天蛋白酶3(caspase-3)、促凋亡蛋白(Bax)、细胞色素C(cyt-c)和线粒体融合蛋白(Mfn2)、线粒体分裂蛋白(Drp-1)的表达水平;电穿孔法转染Drp1的干扰序列,筛选转染效果好的siRNA序列,协同药物干预,通过荧光法、MTT法、免疫印迹法检测相关指标。结果MTT结果显示,与细胞对照组比较,HM组、Mdivi-1组、HM+Mdivi-1组、WY14643组和HM+WY14643组存活率显著下降(P实验选择20μmol·L^(-1)浓度的HM、Mdivi-1和HM+Mdivi-1作为构建PC12细胞模型的工作浓度;显微镜和MitoTracker Red探针染色观察发现,药物组细胞密度呈不同程度减少,树枝状突起减少变圆;线粒体形态趋向圆形,纵横轴长度比值分别为细胞对照组(3.33±0.72)、HM组(2.19±0.58)、Mdivi-1组(2.45±0.44)、HM+Mdivi-1组(1.43±0.62)。JC-1染色检测结果显示,与细胞对照组相比,HM组线粒体模电位显著下降(P活性上升(P药物干预组PC12细胞存活率下降,Drp1和Mfn2表达下调,均差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论HM可通过ROS累积降低PC12细胞膜电位及ATP,进而激活caspase-3凋亡途径促使细胞凋亡,线粒体融合分裂可能参与HM造成PC12细胞的损伤,启动细胞线粒体途径凋亡。

关键词：去氢骆驼蓬碱 PC12细胞线粒体融合分裂线粒体功能损伤神经毒性损伤

大蒜辣素在大鼠体内转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸的鉴别

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新疆医科大学学报 2024年第09期 1281-1287页

作者：吴莹莹史荣梅李世颖刘睿婷宋百灵马雪红李新霞新疆医科大学药学院新疆胡蒜研究院(有限公司) 新疆大蒜药用研究重点实验室

目的鉴别大鼠给药后大蒜辣素体内转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸，探讨血浆和皮肤组织中S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸的变化情况。方法取SD大鼠，雌雄各半，体重(200±20)g,随机分为8组，分别为空白组及给药后不同时间组，每组每个时间... 详细信息

目的鉴别大鼠给药后大蒜辣素体内转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸，探讨血浆和皮肤组织中S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸的变化情况。方法取SD大鼠，雌雄各半，体重(200±20)g,随机分为8组，分别为空白组及给药后不同时间组，每组每个时间点采用6只大鼠，涂抹大蒜软膏于大鼠背部，分别于0、5、10、15、20、25、30、60 min依次取血液和皮肤组织，UPLC-MS/MS鉴定血液和皮肤组织中大蒜辣素的转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸及变化情况。结果大蒜辣素与半胱氨酸反应产生S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸，30 min即可反应90%以上。血浆中转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸在4 h内稳定。UPLC-MS/MS鉴定并确定了皮肤组织和血浆样品大蒜辣素与内源性半胱氨酸的反应产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸，给予大蒜软膏30 min内血浆和皮肤中S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸的浓度逐步增大，60 min时含量降低。结论大蒜辣素可与血浆和组织中的内源性半胱氨酸快速反应，本研究将为大蒜辣素的后续研究提供重要依据。

关键词：超高效液相色谱-串联质谱大蒜辣素半胱氨酸 S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸

CPB2为晚期肺腺癌EGFR-T790M耐药基因突变的潜在生物标志物

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实用肿瘤杂志 2024年第3期39卷 242-251页

作者：王为民韩志刚俞婷婷新疆医科大学附属肿瘤医院肺内科一病区新疆维吾尔自治区乌鲁木齐830000

目的通过平行反应监测(parallel reaction monitoring,PRM)定量蛋白组学技术验证晚期肺腺癌患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)-T790M耐药突变的生物标志物。方法纳入2018年1月至2018年12月就诊于新疆医科... 详细信息

目的通过平行反应监测(parallel reaction monitoring,PRM)定量蛋白组学技术验证晚期肺腺癌患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)-T790M耐药突变的生物标志物。方法纳入2018年1月至2018年12月就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的口服EGFR-酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)吉非替尼的具有EGFR19del或EGFR 21 L858R基因突变的晚期肺腺癌患者44例。在患者疾病进展后行组织活检,使用下一代测序(next generation sequencing,NGS)方法检测出EGFR-T790M突变患者24例,非EGFR-T790M突变20例。提取44例患者的血清蛋白,通过SDS-PADE进行质量评估,两组分别得到10例质量合格血清蛋白样本。质量合格的血清蛋白样品分别进行丝氨酸蛋白酶酶解,通过PRM方法进行纳米液相色谱-串联质谱分析法(nanometer liquid chromatography-tandem mass spectrometry,nanoLC-MS/MS)检测。运行Skyline软件进行数据分析,得出与EGFR-T790M突变相关的差异表达蛋白。将基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库的各节点映射,进行功能富集分析,并利用京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库提供的绘图模块进行差异表达蛋白表达含量渲染,采用STRING数据库构建差异表达蛋白的蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络,寻找关键差异表达蛋白。结果通过PRM方法确定14种与晚期肺腺癌EGFRT790M突变相关的差异表达蛋白。GO富集分析显示,这些差异表达蛋白在参与细胞组分方面,主要构成细胞外区域的部分;在发挥的分子功能方面,主要为抗原结合、作用于L氨基酸肽的肽酶活性和免疫球蛋白受体结合。KEGG富集通路分析显示,补体和凝血级联反应差异表达蛋白富集指数最高。该通路上的差异蛋白为凝血因子Ⅹ(coagulation factorⅩ,F10)、F9、纤溶酶原(plasminogen,PLG)和羧肽酶B2(carboxypeptidase B2,CPB2)。其中F10为上调蛋白,其余为下调蛋白。PPI网络构建分析显示,CBP2为差异表达蛋白中的关键节点。结论 CBP2是晚期肺腺癌EGFR-T790M耐药突变发生的潜在生物标志物。

关键词：晚期肺腺癌 EGFR-T790M 蛋白组学差异性蛋白