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蜱信息化合物研究进展

动物医学进展 2023年第5期44卷 113-116页

作者：孙艳张艳艳王正荣薄新文省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000

蜱是一种重要专性吸血的生物,可传播多种病原体和人兽共患病。蜱虫通过信息化合物进行化学通讯,蜱虫的信息化合物包括蜱信息素和种间素(他感化合物)。论文综述了蜱信息素、蜱种间素(他感化合物)以及这两种信息化合物的协同作用,为干扰... 详细信息

蜱是一种重要专性吸血的生物,可传播多种病原体和人兽共患病。蜱虫通过信息化合物进行化学通讯,蜱虫的信息化合物包括蜱信息素和种间素(他感化合物)。论文综述了蜱信息素、蜱种间素(他感化合物)以及这两种信息化合物的协同作用,为干扰蜱类的搜寻定位寄主、控制蜱虫危害和减少蜱媒病传播提供理论依据。

关键词：蜱化学通讯种内信息素种间素(他感化合物)

不同品种绵羊发情周期LEPRb mRNA表达分析

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生物技术通报 2017年第5期33卷 139-144页

作者：卢守亮李良远高磊沈敏万鹏程石国庆代蓉新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传育种与健康养殖国家重点实验室石河子832000

为了探讨LEPR在绵羊季节性发情中的表达特点,以季节性发情的中国美利奴和常年发情的多浪羊为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术检测繁殖季节不同发情阶段LEPRb m RNA在下丘脑、卵巢和子宫组织中的表达变化。结果显示,在发情间期、前期... 详细信息

为了探讨LEPR在绵羊季节性发情中的表达特点,以季节性发情的中国美利奴和常年发情的多浪羊为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术检测繁殖季节不同发情阶段LEPRb m RNA在下丘脑、卵巢和子宫组织中的表达变化。结果显示,在发情间期、前期和发情期中国美利奴卵巢和子宫组织LEPRb的相对表达水平都低于下丘脑,但在发情后期卵巢和子宫LEPRb的相对表达水平显著高于下丘脑。不同发情时期,两品种绵羊同一组织的LEPRb的表达变化幅度有所差异,但趋势相似。且中国美利奴各组织LEPRb的表达水平都高于常年发情的多浪羊。LEPRb的表达变化与绵羊发情存在相关关系。

关键词：绵羊 LEPRb 表达水平发情周期实时定量PCR

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绵羊体细胞核移植去核前程序的优化

生物工程学报 2017年第5期33卷 730-742页

作者：郭延华张译元王立民唐红李迎利周平省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000 石河子市兽医卫生检疫所新疆石河子832000

目前绵羊体细胞克隆效率仍然很低,本研究拟对去核前的操作环节进行优化。主要为卵巢保存时间(3 h和3–5 h)、卵母细胞体外成熟时间(18 h和24 h)、供核细胞贴壁率(10%和30%)和盲吸法去核时间(16 hpm和18 hpm)等4个方面优化。以成熟率、... 详细信息

目前绵羊体细胞克隆效率仍然很低,本研究拟对去核前的操作环节进行优化。主要为卵巢保存时间(3 h和3–5 h)、卵母细胞体外成熟时间(18 h和24 h)、供核细胞贴壁率(10%和30%)和盲吸法去核时间(16 hpm和18 hpm)等4个方面优化。以成熟率、融合率和重构胚胎发育能力作为评价参数。结果表明:在卵巢保存方面,卵巢保存3 h组卵母细胞成熟率显著高于3–5 h组卵母细胞成熟率(60.18%vs 52.50%)(P0.05);在体外成熟时间方面,体外成熟18 h组和24 h组卵母细胞成熟率差异极显著(53.81%vs 89.06%)(P0.05);在融合率方面,贴壁率30%组极显著高于贴壁率10%组(80.85%vs 57.69%)(P0.05),具有贴比率差异性的细胞在细胞生长平台期表现出差异性;在去核时间方面,16 hpm组和18 hpm组胚胎卵裂率差异显著,囊胚发育力差异不显著(P>0.05),16 hpm组获得一只克隆羊,重复16 hpm获得4只妊娠克隆羊。组织微卫星序列经SDS-PAGE分析,DNA指纹与供体细胞相同。结论:去核前程序的优化保证了材料的质量,为提高克隆胚胎数量和质量奠定基础,可以获得体细胞克隆羊。

关键词：核移植卵巢保存时间贴壁率去核时间克隆羊

基于cox2基因的细粒棘球绦虫环介导等温扩增检测方法的初步建立

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第2期35卷 169-172页

作者：张艳艳叶倩王正荣薄新文新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832000 石河子大学石河子832000

目的建立一种安全、快速、高效的细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)的诊断方法——环介导等温扩增方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。方法根据细粒棘球绦虫线粒体细胞色素c氧化酶亚基2(cytochrome c oxidase subunit 2,cox2)基因序列,设计4条LAMP引物,建立LAMP检测方法,采用LAMP法和常规PCR法检测细粒棘球绦虫、泡状带绦虫(Cysticercus tenuicollis)、扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)、羊曲子宫绦虫(Thysaniezia ovilla)、中点无卵黄腺绦虫(Avitellina centripunctata)、鞭毛线虫(flagella nematodes)、肝片吸虫(Fasciola hepatica)、多房棘球绦虫(***)和捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)等9种寄生虫的DNA以验证LAMP法的特异性;分别用LAMP法和常规PCR法检测梯度稀释的含cox2基因片段的细粒棘球绦虫标准质粒后,比较两者的敏感性。采用LAMP、PCR和夹心ELISA法检测50份犬粪样,计算细粒棘球绦虫cox2基因的阳性率,评价所建立的LAMP法检测效果。结果LAMP法的特异性验证结果表明,仅在以细粒棘球绦虫DNA为模板的反应体系中出现特异性产物。LAMP法在细粒棘球绦虫标准质粒浓度为16.09 ag/μl时仍可见梯状条带,而常规PCR法仅可检测到浓度为16.9 fg/μl以上的质粒,LAMP法灵敏性是常规PCR法的1 000倍。对50份犬粪中细粒棘球绦虫DNA的检测结果显示,PCR、LAMP和夹心ELISA法检测结果相同,阳性率为8.0%(4/50)。结论基于细粒棘球绦虫线粒体cox2基因的LAMP检测方法操作方便、特异性较强、敏感性较高,适于细粒棘球绦虫感染犬的快速检测。

关键词：细粒棘球绦虫细胞色素c氧化酶亚基2基因环介导等温扩增

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绵羊MYL基因家族的鉴定与组织表达分析

畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1551-1564页

作者：杨杨余乾刘昱成杨华赵卓王立民周平杨庆勇代蓉新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832000 华中农业大学信息学院武汉430070

为了解肌球蛋白轻链(myosin light chain,MYL)基因家族在绵羊中的分子进化关系及表达变化,本研究利用生物信息学方法对绵羊MYL基因家族进行鉴定和系统分析。各选取了3只军垦白肉羊、新疆细毛羊和湖羊成年公羊各组织样品,采用qRT-PCR方... 详细信息

为了解肌球蛋白轻链(myosin light chain,MYL)基因家族在绵羊中的分子进化关系及表达变化,本研究利用生物信息学方法对绵羊MYL基因家族进行鉴定和系统分析。各选取了3只军垦白肉羊、新疆细毛羊和湖羊成年公羊各组织样品,采用qRT-PCR方法验证家族成员MYL1、MYL6B和MYLPF基因的表达情况。结果显示,12个MYL基因分布在9条染色体上,编码由147~211氨基酸组成的亲水性蛋白质,无信号肽和跨膜结构域,二级结构以α-螺旋为主。根据基因结构、保守结构域和基序分布等特征,可以将这些基因家族成员分为3个组。共线性分析结果表明,MYL2和MYL10、MYL2和MYLPF存在片段复制,且这些片段受到较强的选择压力。蛋白互作网络显示MYH10与绵羊MYL家族成员均存在互作关系。MYLs的组织表达模式差异较大,其中MYL1、MYL2、MYL6B和MYLPF在骨骼肌组织中高水平表达。基因克隆测序结果显示,扩增得到目的基因的CDS全长,qRT-PCR结果表明,MYL1、MYL6B和MYLPF在军垦白肉羊肌肉组织中的表达水平显著高于其他组织(P绵羊MYL基因家族的功能以及优化绵羊肉用性能提供了线索。

关键词：绵羊 MYL 基因家族生物信息学分析基因表达

细粒棘球绦虫TSP2基因的克隆及生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2021年第8期16卷 916-921页

作者：王宁赵鹏鹏张艳艳马勋王正荣薄新文石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所

目的克隆细粒棘球绦虫发育相关基因Tetraspain 2-TSP2(TSP2),并对其进行生物学分析。方法通过在线检索WormBas ParaSite网站中Eg细粒棘球绦虫基因组数据库,获得TSP1的cDNA序列并设计特异性引物。提取细粒棘球绦虫原头蚴总RNA,以此模板,R... 详细信息

目的克隆细粒棘球绦虫发育相关基因Tetraspain 2-TSP2(TSP2),并对其进行生物学分析。方法通过在线检索WormBas ParaSite网站中Eg细粒棘球绦虫基因组数据库,获得TSP1的cDNA序列并设计特异性引物。提取细粒棘球绦虫原头蚴总RNA,以此模板,RT-PCR扩增TSP2基因,将PCR产物克隆到pMD19-T载体后进行测序,并进行生物信息学分析。通过SYBR Green I qRT-PCR方法分析TSP2基因在原头蚴、包囊壁以及成虫中mRNA的相对表达量。结果克隆的TSP2基因序列与WormBas ParaSite中已登录的细粒棘球绦虫跨膜蛋白EGR05083.1同源性为100%。TSP2基因cDNA全长621个核苷酸,编码206个氨基酸的TSP2蛋白,理论等电点为7.33,不稳定指数为47.50,为不稳定蛋白。脂肪系数为109.71,亲水性疏水性平均值为0.987,为疏水性可溶性蛋白。TSP2编码的蛋白含有4个跨膜区,4个优势B抗原表位,属于跨膜蛋白家族,该蛋白具有3个开放阅读框。qRT-PCR显示,TSP2基因在细粒棘球绦虫原头蚴、包囊壁及成虫中均有转录,转录水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论细粒棘球绦虫TSP2基因其编码蛋白含有优势B抗原表位,为包虫病重组免疫诊断抗原和亚单位疫苗的研发奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫 TSP2 生物信息学分析 qRT-PCR

细粒棘球绦虫TSP 3基因的生物信息学分析及原核表达

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中国病原生物学杂志 2022年第11期17卷 1297-1302页

作者：陆宝燕王宁赵鹏鹏县锦雯王正荣薄新文省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000 石河子大学动物科技学院

目的为分析细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)TSP3基因的生物信息学特性并表达其非跨膜区蛋白。方法本研究利用PCR扩增Eg-TSP3全长基因及非跨膜区序列,采用生物信息学软件对Eg-TSP3蛋白的理化性质、结构特点及亲缘进化关系进行分析... 详细信息

目的为分析细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)TSP3基因的生物信息学特性并表达其非跨膜区蛋白。方法本研究利用PCR扩增Eg-TSP3全长基因及非跨膜区序列,采用生物信息学软件对Eg-TSP3蛋白的理化性质、结构特点及亲缘进化关系进行分析;利用RT-QPCR分析TSP3在细粒棘球绦虫不同发育阶段中的相对转录水平;并构建重组质粒,经双酶切鉴定,将其转化至大肠埃希菌*** BL21(DE3)后,采用SDS-PAGE检测TSP3蛋白的表达,通过western blot对蛋白进行抗原性分析。结果生物信息学分析结果显示,Eg-TSP3基因全长681 bp,编码226个氨基酸,蛋白分子式为C_(1113)H_(1772)N_(270)O_(297)S_(20),无信号肽,有4个跨膜区,理论相对分子质量约24×10^(3),含有5个B细胞抗原表位,为稳定的胞内蛋白。Eg-TSP3的氨基酸序列与绦虫属的氨基酸序列一致性为90%以上,进化关系中两者亲缘性极近,与人的氨基酸序列一致性为42.2%,进化关系中两者亲缘性较远。TSP3基因在细粒棘球绦虫的原头蚴、包囊壁以及成虫阶段均有转录,且转录水平无显著差异。双酶切鉴定及测序分析,证明成功构建重组质粒pET32a-TSP3,重组质粒转化BL21后成功诱导表达蛋白,Western blot结果显示,该蛋白具有良好的反应原性。结论本研究初步表明Eg-TSP3蛋白是一个具有潜在研究价值的疫苗免疫靶点,为进一步研究囊型包虫病的疫苗候选分子奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫 TSP3 生信分析原核表达

用CRISPR-Cas9在绵羊成纤维细胞ACTG1导入荧光标记基因

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新疆农业科学 2021年第9期58卷 1747-1755页

作者：郭延华皮文辉绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000

【目的】在绵羊成纤维细胞中,针对ACTG1基因羧基端,定点导入荧光蛋白标记基因,将外源基因定点导入绵羊基因组中,建立有效的方法。【方法】CRISPR-Cas9系统在绵羊成纤维细胞基因组特定区域引起DNA双链断裂,从而诱导细胞修复断裂的的基因... 详细信息

【目的】在绵羊成纤维细胞中,针对ACTG1基因羧基端,定点导入荧光蛋白标记基因,将外源基因定点导入绵羊基因组中,建立有效的方法。【方法】CRISPR-Cas9系统在绵羊成纤维细胞基因组特定区域引起DNA双链断裂,从而诱导细胞修复断裂的的基因组。通过NHEJ修复途径,在特定位点导入外源基因,改善定点导入效率。【结果】采用CRISPaint通用供体模板,结合CRISPR-Cas9系统,在绵羊成纤维细胞ACTG1基因导入荧光标记效率达1.4%,获得了外源基因定点导入的单克隆细胞株。【结论】CRISPR-Cas9系统结合NHEJ,能够有效的将大的外源DNA序列导入绵羊成纤维细胞的预定基因组位点。

关键词：绵羊成纤维细胞 ACTG1 CRISPR-Cas9

细粒棘球绦虫CD151蛋白的生物信息学分析及其编码基因在不同发育阶段的表达

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中国病原生物学杂志 2021年第9期16卷 1041-1046页

作者：赵鹏鹏县锦雯王宁马勋张艳艳孟季蒙王正荣薄新文石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所

目的分析细粒棘球绦虫四跨膜蛋白家族成员CD151(Eg-CD151)分子特性和各发育阶段表达水平,为研发包虫病疫苗奠定基础。方法从NCBI数据库下载Eg-CD151氨基酸序列,利用ProtParam、NetPhos 3.1 Server、GPS-SUMO 2.0、Euk-mPLoc 2.0、SOPMA... 详细信息

目的分析细粒棘球绦虫四跨膜蛋白家族成员CD151(Eg-CD151)分子特性和各发育阶段表达水平,为研发包虫病疫苗奠定基础。方法从NCBI数据库下载Eg-CD151氨基酸序列,利用ProtParam、NetPhos 3.1 Server、GPS-SUMO 2.0、Euk-mPLoc 2.0、SOPMA、SWISS MODEL、SignalP 4.1 Server、TMHMM、SMART、Antibody Epitope Prediction在线生物信息学软件预测Eg-CD151蛋白的理化性质、磷酸化位点、棕榈酰化修饰位点、亚细胞定位、二级结构、三维结构、跨膜区域、结构域、B细胞抗原表位;利用DNAMAN和MEGA进行同源序列分析并建立系统发育进化树。利用实时荧光定量PCR检测不同发育阶段Eg-CD151 mRNA相对表达量。结果Eg-CD151蛋白由170 aa组成,为一种不稳定的跨膜蛋白,无信号肽,含2个跨膜区,分别位于6-28、136-158 aa,3个B细胞抗原表位位于非跨膜区域;存在14个磷酸化位点,包含3个酪氨酸磷酸化位点、5个苏氨酸磷酸化位点、6个丝氨酸磷酸化位点;含一个棕榈酰化位点(139-143 aa);二级结构主要为α-螺旋,占60.00%。同源序列比对显示,Eg-CD151与其终末宿主犬、赤狐及中间宿主牛的CD151进化关系较远。实时荧光定量PCR检测原头蚴、成虫两个发育阶段Eg-CD151 mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论生物信息学分析Eg-CD151存在多个B细胞抗原表位,可作为包虫病诊断及疫苗候选抗原。

关键词：细粒棘球绦虫 CD151 抗原表位生物信息学分析