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基于免疫信息学的结核分枝杆菌多阶段多表位疫苗构建

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第6期39卷 494-500页

作者：宁钰蔡一涵刘晓玲谷晨晨孟祥英乔晋娟潍坊医学院医学检验学院临床微生物学教研室山东潍坊261053

目的构建一种包含结核分枝杆菌(MTB)早期分泌蛋白和潜伏感染相关抗原表位的多阶段多表位疫苗。方法运用免疫信息学方法预测12个MTB蛋白的B细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和辅助性T细胞(HTL)表位,从中筛选具有抗原性且无细胞毒性和致敏性... 详细信息

目的构建一种包含结核分枝杆菌(MTB)早期分泌蛋白和潜伏感染相关抗原表位的多阶段多表位疫苗。方法运用免疫信息学方法预测12个MTB蛋白的B细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和辅助性T细胞(HTL)表位,从中筛选具有抗原性且无细胞毒性和致敏性的表位构建多表位疫苗,并进行理化性质分析、二级结构预测,3D建模,模型精制、质量验证,与Toll样受体4(TLR4)受体分子对接,最后进行免疫模拟。结果MTB表位疫苗共包含12个B细胞表位、11个CTL表位和12个HTL表位,具有灵活、稳定的球形构象,热稳定性和亲水性好,可与TLR4稳定相互作用。免疫模拟表明该疫苗能够同时激发有效的细胞和体液免疫应答。结论提出了一种基于免疫信息学技术的多阶段多表位MTB疫苗构建策略,该疫苗可能对活动期和潜伏性MTB感染有预防作用。

关键词：结核分枝杆菌(MTB) 疫苗免疫信息学潜伏性结核感染表位

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表面活性素杀螺活性实验研究

中国血吸虫病防治杂志 2023年第4期35卷 394-397页

作者：杨成汤兴丽潘中武皖南医学院微生物学与免疫学教研室安徽芜湖241002

目的观察表面活性素对钉螺的影响,以期为应用芽胞杆菌杀灭钉螺提供实验基础。方法 2022年9月,于芜湖市血吸虫病流行区现场采集钉螺。剔除血吸虫感染阳性钉螺后,采用室内浸杀法,以2、1、0.5、0.25、0.125 mg/mL和0.062 5 mg/mL表面活性... 详细信息

目的观察表面活性素对钉螺的影响,以期为应用芽胞杆菌杀灭钉螺提供实验基础。方法 2022年9月,于芜湖市血吸虫病流行区现场采集钉螺。剔除血吸虫感染阳性钉螺后,采用室内浸杀法,以2、1、0.5、0.25、0.125 mg/mL和0.062 5 mg/mL表面活性素于26℃分别浸泡60只钉螺24、48 h和72 h,同时设超纯水对照组,观察表面活性素杀螺效果,计算钉螺半数致死浓度(LC_(50))。参考上述浸泡杀螺活性实验结果选择表面活性素实验浓度,分别以0.5 mg/mL浓度表面活性素(实验组)和超纯水(对照组)浸泡处理钉螺,采用碘化丙啶(PI)荧光法于荧光显微镜下观察钉螺血淋巴细胞PI摄取情况。结果经0.062 5 mg/mL表面活性素浸杀24 h,钉螺死亡率为5.0%(3/60);2 mg/mL表面活性素浸杀72 h,钉螺死亡率为100.0%(60/60);而对照组未发现钉螺死亡,不同组间钉螺死亡率差异有统计学意义(χ^(2)_(24h)=180.150,χ^(2)_(48h)=176.786,χ^(2)_(72h)=216.487,P均学意义(χ^(2)=150.264,P<0.05)。表面活性素浸杀钉螺24、48 h和72 h LC_(50)值分别为0.591、0.191 mg/mL和0.054 mg/mL。荧光显微镜下可见,经0.5 mg/mL表面活性素浸杀24 h后,实验组钉螺摄入PI染料的血淋巴细胞数显著高于对照组(χ^(2)=6.690,P<0.05)。结论表面活性素具有杀灭钉螺活性,可能与其改变钉螺血淋巴细胞膜完整性有关。

关键词：钉螺表面活性素杀螺活性血淋巴细胞

自然杀伤（NK）细胞应对结核分枝杆菌感染的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：任芹杨国平大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室

结核病（TB）是由结核分枝杆菌（MTB）感染引起的严重威胁人类健康的慢性传染病。自然杀伤（NK）细胞作为先天免疫的重要组成部分，在应对MTB感染时，NK细胞可分化出不同亚群，表现出受体和功能的多样性；并通过分泌细胞因子，串联其他... 详细信息

结核病（TB）是由结核分枝杆菌（MTB）感染引起的严重威胁人类健康的慢性传染病。自然杀伤（NK）细胞作为先天免疫的重要组成部分，在应对MTB感染时，NK细胞可分化出不同亚群，表现出受体和功能的多样性；并通过分泌细胞因子，串联其他免疫细胞发挥对MTB的抗感染作用，从而增强机体的抗MTB免疫应答反应。

关键词：自然杀伤(NK)细胞感染与免疫 NK细胞表型与受体抗结核免疫综述

低HMGB1含量的肿瘤细胞裂解物增强树突状细胞的抗肺癌作用

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南方医科大学学报 2023年第6期43卷 906-914页

作者：潘中武李思琪王耀辉刘海军桂琳董博翰皖南医学院医学微生物学与免疫学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院生物化学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院药学院安徽芜湖241002

目的探讨低含量高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的肿瘤细胞裂解物(TCL)对树突状细胞抗肺癌作用的影响。方法反复冻融的方法制备Lewis肺癌细胞TCL。Western blot检测TCL中HMGB1蛋白的表达情况。用30 nmol/L甘草酸(GA)抑制Lewis肺癌细胞中HMGB1... 详细信息

目的探讨低含量高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的肿瘤细胞裂解物(TCL)对树突状细胞抗肺癌作用的影响。方法反复冻融的方法制备Lewis肺癌细胞TCL。Western blot检测TCL中HMGB1蛋白的表达情况。用30 nmol/L甘草酸(GA)抑制Lewis肺癌细胞中HMGB1的表达,进而制备低含量HMGB1的TCL(LH-TCL)。用未处理的Lewis肺癌细胞制备正常含量HMGB1的TCL(NH-TCL)。分为不同剂量NH-TCL负载DC组、LH-TCL负载DC组及PBS对照组,用流式细胞术检测体外诱导的小鼠树突状细胞(DC)表面CD11b、CD11c、CD86表达或细胞凋亡,用酶联免疫吸附试验检测DC细胞IL-12分泌情况。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组,用流式细胞术检测小鼠脾细胞表面CD69的表达情况,酶联免疫吸附试验检测小鼠脾细胞TNF-β的分泌。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组,并设5∶1、10∶1、20∶1三个效靶比进行体外杀伤实验,采用CCK8法检测小鼠脾细胞杀伤肿瘤细胞的活性。分为未活化DC组、NH-TCL活化的DC组、LH-TCL活化的DC组及PBS对照组,通过体内抑瘤实验,评估DC过继免疫细胞疗法抑制小鼠皮下移植瘤生长的效果。结果GA作用后的Lewis肺癌细胞制备的TCL中,HMGB1的含量显著降低(P<0.05)。与NH-TCL相比,LH-TCL具有更好的减少DC凋亡的能力(P<0.001),并促进DC表面CD86的表达和IL-12的分泌,而负载LH-TCL的DC也能更好地激活脾淋巴细胞并诱导更强的抗肿瘤免疫作用(P<0.01)。在体外,负载LH-TCL的DC激活脾淋巴细胞对Lewis肺癌细胞的杀伤活性显著提高(P<0.01);在实验动物体内,免疫负载LH-TCL的DC可明显抑制肿瘤组织生长(P<0.05)。结论用LH-TCL负载DC,可以增强DC诱导的抗肿瘤免疫作用,提高DC过继免疫细胞治疗的疗效,为该免疫治疗方法的改进提供了一个新的途径。

关键词：肿瘤细胞裂解物小鼠脾细胞肺癌细胞抗肿瘤免疫高迁移率族蛋白B1

贝莱斯芽孢杆菌Y6杀螺活性及其机制的初步研究

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中国血吸虫病防治杂志 2021年第3期33卷 248-253,261页

作者：杨成乔云龙刘辉潘中武皖南医学院微生物学与免疫学教研室芜湖241002 皖南医学院药学院

目的评价芽孢杆菌Y6实验室内杀螺活性,初步探讨其杀螺作用机制。方法应用形态学、生理生化特性及16S r DNA基因序列同源性分析,对菌株Y6进行生物学鉴定。配制浓度分别为0.005、0.010、0.015 g/m L的芽孢杆菌Y6悬液,采用浸泡法评价其室... 详细信息

目的评价芽孢杆菌Y6实验室内杀螺活性,初步探讨其杀螺作用机制。方法应用形态学、生理生化特性及16S r DNA基因序列同源性分析,对菌株Y6进行生物学鉴定。配制浓度分别为0.005、0.010、0.015 g/m L的芽孢杆菌Y6悬液,采用浸泡法评价其室内杀螺效果。检测芽孢杆菌Y6悬液浸泡后钉螺软体组织内Y6菌体含量和糖原含量变化,初步探讨其杀螺机制。结果 Y6菌落呈乳白色、不透明,在营养琼脂培养基表面有菌膜形成;革兰氏染色呈阳性,杆状;芽孢位于菌体中间,呈无色透明折光小体,被菌体包裹;卵磷脂酶试验呈阳性,Y6菌体16S r DNA基因序列与多株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensisis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)同源性均为100%,将菌株Y6鉴定为贝莱斯芽孢杆菌。0.005、0.010、0.015 g/m L芽孢杆菌Y6悬液浸泡24、48、72 h后,钉螺死亡率分别为28.3%、31.7%和81.6%,43.3%、58.3%和93.3%及63.3%、78.3%和98.3%;随着悬液浓度增加、浸泡时间延长,菌株Y6悬液杀螺效果提高。采用染色镜检法和平板菌落计数法观察发现,菌株Y6悬液浸泡后的死螺体内Y6菌体含量最高、活螺体内最低;经芽孢杆菌Y6悬液浸泡后,死螺、濒死螺和活螺软体组织内平均糖原含量分别为(0.68±0.06)、(1.09±0.16)μg/mg和(2.56±0.32)μg/mg(F=59.519,P <0.05),活螺软体组织内平均糖原含量显著高于死螺(t=14.073,P <0.05)和濒死螺(t=10.027,P <0.05),而濒死螺软体组织内平均糖原含量显著高于死螺(t=5.983,P <0.05)。结论贝莱斯芽孢杆菌Y6对钉螺具有较好杀灭效果,其杀螺机制可能是菌体侵染致螺体内糖原代谢紊乱而引起钉螺死亡。

关键词：钉螺贝莱斯芽孢杆菌杀螺效果糖原

lncRNA MALAT1及GAS5的多态性与肝细胞癌遗传易感性的关联

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中华疾病控制杂志 2023年第5期27卷 587-592页

作者：卫美蓉王笑峰罗兵西京学院医学院基础医学教研室西安710123 青岛大学医学院基础医学院微生物学教研室青岛266021

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)人肺腺癌转移相关的转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALATl)及生长阻滞特异性转录本5(growth arrest specific transcript 5,GAS5)基因多态性与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)易感性的关联。方法收集225例HCC患者的癌组织及220例健康体检者外周静脉血标本,提取癌组织及血标本的DNA分别当作本病例对照研究的病例组与对照组。同时利用TaqMan MGB等位基因分型试剂盒对两组病例MALAT1 rs11227209及GAS5 rs55829688位点的单核苷酸多态性(single nucleotide olymorphism,SNP)进行检测,采用SPSS 17.0软件分析实验结果。结果MALAT1 rs11227209位点基因型频率(CC、CG、GG)在病例组中分布为:46.2%、42.7%、11.1%,在对照组中分布为:50.0%、42.7%、7.3%。分别进行纯合突变基因型CC与显性模型CG+GG基因型组比较,以及纯合野生基因型GG与隐性模型CG+CC基因型组的比较,发现两组基因型分布差异无统计学意义(χ^(2)=0.636,P=0.425;χ^(2)=1.933,P=0.164)。GAS5 rs55829688基因型频率(TT、TC、CC)在病例组中的分布为:45.3%、43.6%、11.1%,在对照组中的分布为:57.7%、38.2%、4.1%。病例组CC基因型人群分布高于对照组(OR=3.459,95%CI:1.546~7.738,P=0.003)。病例组C等位基因携带频率也高于对照组(OR=1.624,95%CI:1.208~2.184,P=0.001);C等位基因为风险基因,个体携带C等位基因可以增加罹患HCC的风险(OR=1.647,95%CI:1.132~2.395,P=0.009)。遗传易感性分层分析结果显示,女性患者携带GAS5 rs55829688 CT+TT基因型可降低HCC的发病风险(OR=0.161,95%CI:0.045~0.580,P=0.005),且≥50岁人群分组中若携带该位点CT+TT基因型,则HCC发病风险也降低(OR=0.232,95%CI:0.074~0.728,P=0.012)。结论GAS5 rs55829688位点SNP与HCC的发病风险相关,携带CC基因型个体HCC的发病风险增高。同时年龄及性别和GAS5 rs55829688位点的SNP可能会共同影响HCC的发病风险。而MALAT1 rs11227209位点SNP与HCC发病风险无相关性。

关键词：肝细胞癌长链非编码RNA 人肺腺癌转移相关的转录本1 生长阻滞特异性转录本5 单核苷酸多态性易感性

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miR-146a在黏膜免疫中的调控作用

中国感染控制杂志 2022年第3期21卷 297-304页

作者：李艳丽申元英郭乐大理大学基础医学院医学微生物学与免疫学教研室云南大理671000

黏膜免疫是机体整个免疫网络的重要组成部分,又是具有独特结构和功能的独特免疫体系,其在抵抗感染方面起着极其重要的作用,是机体抵抗感染的第一道免疫屏障。近年来,越来越多的研究显示,微小RNA(miRNAs)具有强大的免疫调控功能,其中miR-... 详细信息

黏膜免疫是机体整个免疫网络的重要组成部分,又是具有独特结构和功能的独特免疫体系,其在抵抗感染方面起着极其重要的作用,是机体抵抗感染的第一道免疫屏障。近年来,越来越多的研究显示,微小RNA(miRNAs)具有强大的免疫调控功能,其中miR-146a作为协调免疫反应和炎症信号最重要的miRNAs之一,在包括免疫反应在内的多种生物过程和途径中发挥关键作用。本文综述了miR-146a与黏膜免疫的相关研究进展。

关键词： MicroRNAs miR-146a 黏膜免疫炎症

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大蒜素对白色念珠菌生物被膜形成的作用

菌物学报 2020年第2期39卷 343-351页

作者：熊延靖吴艳红皖南医学院医学微生物学与医学免疫学教研室安徽芜湖241002

生物被膜的形成是白色念珠菌产生耐药性的重要原因之一。本研究首先构建白色念珠菌体外生物被膜模型,通过倒置显微镜和甲基四氮盐(XTT)法检测大蒜素对白色念珠菌生物被膜形成的影响,同时采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)对白色念珠菌生... 详细信息

生物被膜的形成是白色念珠菌产生耐药性的重要原因之一。本研究首先构建白色念珠菌体外生物被膜模型,通过倒置显微镜和甲基四氮盐(XTT)法检测大蒜素对白色念珠菌生物被膜形成的影响,同时采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)对白色念珠菌生物被膜相关基因ALS1、ALS3、HWP1、MP65、SUN41的表达水平进行检测。结果显示,当大蒜素浓度≥12.5μg/mL时,白色念珠菌生物被膜的生长被抑制,并且在生物被膜形成的早期,大蒜素干预能有效抑制其形成;大蒜素能下调白色念珠菌生物被膜相关基因ALS1、ALS3、HWP1、MP65、SUN41的表达水平。研究结果提示,大蒜素可有效抑制体外白色念珠菌生物被膜的形成,可能与其下调生物被膜相关基因的表达有关。

关键词：白色念珠菌生物被膜大蒜素

环状RNA hsa_circ_0009735对胃癌细胞上皮间质转化、细胞周期和自噬的影响

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吉林大学学报（医学版） 2022年第6期48卷 1498-1509页

作者：刘云朱琳琦邵世和江苏大学医学院检验医学研究所微生物学及检验教研室江苏镇江212013

目的:探讨环状RNA hsa_circ_0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)、迁移、细胞周期和自噬的影响。方法:取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa_circ_0009735小干扰RN... 详细信息

目的:探讨环状RNA hsa_circ_0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)、迁移、细胞周期和自噬的影响。方法:取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa_circ_0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞,将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa_circ_0009735组和阴性对照组;将对照质粒和hsa_circ_0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞,将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa_circ_0009735组和对照质粒组;MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度(0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L^(-1))雷帕霉素组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胃癌组织和细胞中hsa_circ_0009735表达水平,激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、E-钙黏蛋白、Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平。结果:PCR产物经测序发现存在环化位点,与hsa_circ_0009735序列匹配。与癌旁组织比较,胃癌组织中hsa_circ_0009735表达水平升高(P学意义(P>0.05)。与空白组比较,不同浓度雷帕霉素组MGC-803细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),hsa_circ_0009735表达水平降低(P<0.01)。与阴性对照组比较,si-hsa_circ_0009735组MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平降低(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.01),迁移细胞数减少(P<0.01),G1期细胞百分率升高(P<0.05),S期细胞百分率降低(P<0.01),G2期细胞百分率降低(P<0.05),细胞中Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均降低(P<0.05);与对照质粒组比较,OE-hsa_circ-0009735组HGC-27细胞中hsa_circ_0009735表达水平明显升高(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.01),迁移细胞数减少(P<0.01),G1期细胞百分率降低(P<0.01),S期细胞百分率升高(P<0.05),G2期细胞百分率升高(P<0.05),E-钙黏蛋白表达水平降低(P<0.05),Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:胃癌细胞中高表达hsa_circ_0009735可能促进EMT进程,影响细胞迁移和细胞周期,并抑制细胞自噬过程。

关键词： hsa_circ_0009735 胃肿瘤上皮间质转化迁移细胞周期自噬