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抗康柏西普抗体筛选用ELISA检测方法的建立

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中国新药杂志 2016年第5期25卷 583-588页

作者：白灏文柏茜朱文漓柯潇成都康弘生物科技有限公司成都610036

目的:为评价康柏西普免疫原性,建立一种恒河猴血清中的抗康柏西普抗体检测方法。方法:建立一种以康柏西普为包被蛋白、羊抗人Ig G Kappa light chain抗体为检测抗体的ELISA检测方法,并验证其精密度和专属性。同时运用细胞增殖实验确定... 详细信息

目的:为评价康柏西普免疫原性,建立一种恒河猴血清中的抗康柏西普抗体检测方法。方法:建立一种以康柏西普为包被蛋白、羊抗人Ig G Kappa light chain抗体为检测抗体的ELISA检测方法,并验证其精密度和专属性。同时运用细胞增殖实验确定阳性样品抗康柏西普抗体的活性。结果:所建立的检测方法最佳包被浓度为5μg·m L-1,检测抗体的最佳稀释倍数为2 500倍。阳性判断阈(cut point)为0.162,批内和批间变异系数均未超过15%。康柏西普浓度在小于10μg·m L-1时对检测无干扰。24个血清样品中,抗康柏西普抗体阳性率为62.5%,HUVEC细胞增殖实验显示无阳性血清具有中和康柏西普生物学活性的能力。结论:经验证,该方法可应用于抗康柏西普抗体的检测,为临床前及临床研究提供支持。

关键词：康柏西普抗药物抗体 ELISA

RP-HPLC-ELSD法测定康柏西普眼用注射液中辅料吐温20的含量

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药物分析杂志 2014年第6期34卷 1073-1076页

作者：朱文漓吴娟叶尚宇罗荣乔怀耀柯尊洪郝晓锋柯潇邬智刚成都康弘生物科技有限公司成都610036

目的：建立反相高效液相色谱法联用蒸发光散射检测器测定康柏西普眼用注射液中辅料吐温20含量的分析方法。方法：采用Agilent Poroshell 120 SB-C18（2.7 μm，4.6 mm×150 mm）色谱柱，以乙腈-纯水为流动相进行梯度洗脱（0-5 min，... 详细信息

目的：建立反相高效液相色谱法联用蒸发光散射检测器测定康柏西普眼用注射液中辅料吐温20含量的分析方法。方法：采用Agilent Poroshell 120 SB-C18（2.7 μm，4.6 mm×150 mm）色谱柱，以乙腈-纯水为流动相进行梯度洗脱（0-5 min，5%B；5-6 min，5%B→60%B；6-10 min，60%B→80%B；10-15 min，80%B；15-15.01 min，80%B→5%B；15.01-20 min，5%B），流速0.5 mL·min^-1，蒸发光散射检测器漂移管温度为45 ℃，雾化压力设为2.8×10^5 Pa。结果：吐温20进样量在1.12-6.72 μg范围内，与色谱峰面积呈良好线性关系（R^2〉0.999）；高、中、低浓度样品的回收率均在100%±10%范围内。结论：本法经方法学验证可用于康柏西普眼用注射液中辅料吐温20含量的检测。

关键词：康柏西普眼用注射液聚山梨酯20 吐温20 非离子表面活性剂药用辅料检测反相高效液相色谱法蒸发光散射检测

Caco-2细胞模型评价白术对人参皂苷Rg1肠吸收影响

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中药药理与临床 2023年第5期39卷 51-55页

作者：罗波赵建棋李娇黄凌恺罗前东唐灿成都医学院成都610500 成都普康生物科技有限公司成都611130

目的:运用Caco-2细胞模型研究白术提取物对人参皂苷Rg1肠吸收的影响。方法:建立Caco-2细胞模型及使用高效液相色谱测定人参皂苷Rg1含量方法,考察在最适细胞生长浓度下,白术提取物对人参皂苷Rg1表观渗透系数(Papp)和转运量的影响。结果:... 详细信息

目的:运用Caco-2细胞模型研究白术提取物对人参皂苷Rg1肠吸收的影响。方法:建立Caco-2细胞模型及使用高效液相色谱测定人参皂苷Rg1含量方法,考察在最适细胞生长浓度下,白术提取物对人参皂苷Rg1表观渗透系数(Papp)和转运量的影响。结果:本研究成功构建了Caco-2细胞模型及人参皂苷Rg1的高效液相色谱含量测定方法,研究显示,与正常对照组相比,模型对照组中200μg/mL白术提取物可显著促进400μg/mL人参皂苷Rg1在肠道的吸收,Papp增加超过3倍(P<0.01)。结论:提示白术提取物对人参皂苷Rg1肠吸收有较好的促进作用。

关键词： Caco-2细胞模型人参皂苷Rg1 白术提取物肠吸收

表达人源补体调节蛋白hCD55对异种胰岛移植的保护作用

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器官移植 2022年第4期13卷 475-482页

作者：李欣潘登科周佳闫杰陈军杜嘉祥龚曼琳电子科技大学医学院成都610054 成都中科奥格生物科技有限公司四川中科奥格生物科技有限公司

目的验证猪胰岛细胞上表达人类簇分化抗原55(hCD55)蛋白能否抑制人血清中补体成分的激活。方法选取4只基因型分别为WT(野生型)、GTKO[α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除]、GTKO/hCD55和hCD55的成年猪,分离WT、GTKO、GTKO/hCD55猪胰... 详细信息

目的验证猪胰岛细胞上表达人类簇分化抗原55(hCD55)蛋白能否抑制人血清中补体成分的激活。方法选取4只基因型分别为WT(野生型)、GTKO[α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除]、GTKO/hCD55和hCD55的成年猪,分离WT、GTKO、GTKO/hCD55猪胰岛细胞,检测其纯度及胰岛素分泌功能,通过琼脂糖凝胶电泳、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术从DNA、RNA和蛋白水平检测hCD55的表达。在新鲜人血清孵育条件下,进行补体依赖的细胞毒性实验和补体沉积检测。结果分离得到的3种基因型猪胰岛细胞纯度>75%,糖刺激指数>1。GTKO/hCD55猪胰岛细胞上表达hCD55信使核糖核酸(mRNA)和hCD55蛋白,能够减少人补体C3c和攻膜复合物C5b-9的沉积,降低细胞毒性。结论猪胰岛细胞上表达hCD55蛋白能够抑制人补体激活,降低补体介导的杀伤作用,表明hCD55蛋白在猪胰岛细胞上可发挥补体保护效果,这为hCD55在异种胰岛移植中的应用提供了理论依据。

关键词：糖尿病猪胰岛细胞转基因人类簇分化抗原55(hCD55) 补体立即经血液介导的炎症反应(IBMIR) C3c C5b-9

半理性设计提升4-α-糖基转移酶歧化活性并应用于工业生产

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食品与发酵工业 2024年

作者：谢静雯李超慧韦猛赵伟张金祥山东福洋生物科技股份有限公司康彤(上海)生物研发有限公司

4-α-糖基转移酶（4-alpha-glucanotransferase， 4αGT）是一种多功能的糖基转移酶，在淀粉工业上具有广泛的应用，如淀粉改性及海藻糖、麦芽寡糖、大环糊精、糖原等淀粉深加工产品的制备。其中，以淀粉为原料制备海藻糖的工业生产过... 详细信息

4-α-糖基转移酶（4-alpha-glucanotransferase， 4αGT）是一种多功能的糖基转移酶，在淀粉工业上具有广泛的应用，如淀粉改性及海藻糖、麦芽寡糖、大环糊精、糖原等淀粉深加工产品的制备。其中，以淀粉为原料制备海藻糖的工业生产过程中，借助4αGT的歧化活性，能够减少葡萄糖、麦芽糖等副产物的含量，从而提升海藻糖产量。在该研究中，采用半理性设计策略对Synechocystis sp. PCC 6803来源4αGT进行了改造。研究基于HotSpot Wizard在线工具及残基所处空间位置选择突变热点，利用4-α-糖基转移酶水解淀粉产生透明圈的能力对18 000个转化子进行高通量筛选，确定了一个对4αGT活性起着关键性作用的位点，对其进行饱和突变，最终获得活性提升的突变体A470F，歧化活性较野生型提升了17%。在工业化生产的条件下，突变体A470F在海藻糖制备上，较野生型也有所提升。通过对突变位点附近底物通道及作用力进行分析，为4αGT的活性改造提供了理论支持，并且为淀粉糖工业的制造效率提升提供了新思路。

关键词：海藻糖 4-α-糖基转移酶半理性设计歧化活性

荧光偏振法测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20的含量

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中国生物制品学杂志 2014年第5期27卷 700-704页

作者：牛冬云连炜邬智刚郝晓峰柯潇成都康弘生物科技有限公司四川成都610036

目的建立测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20(Tween 20)含量的荧光偏振检测方法,并进行验证。方法利用疏水性荧光染料DAF(5-dodecanoylaminofluorescein)与Tween 20胶束内的非极性核心结合,在485 nm激发波长下产生的荧光偏振强度与溶液中... 详细信息

目的建立测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20(Tween 20)含量的荧光偏振检测方法,并进行验证。方法利用疏水性荧光染料DAF(5-dodecanoylaminofluorescein)与Tween 20胶束内的非极性核心结合,在485 nm激发波长下产生的荧光偏振强度与溶液中胶束浓度呈正相关,来确定样品中的Tween 20浓度。对建立的方法进行专属性、准确性、精密性、拟合度验证。结果该方法的专属性较好,可排除检测体系中蛋白的干扰;该方法重复检测3次高(250μg/ml)、中(150μg/ml)、低(50μg/ml)、定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ,25μg/ml)浓度样品的平均回收率均在(100±20)%的可接受范围内,批内和批间变异系数均小于15%;标准曲线拟合度良好。结论立的荧光偏振法专属性、准确性、精密性良好,可用于蛋白制剂中Tween 20含量的测定,并适用于稳定性考察过程中Tween 20有效浓度的监测。

关键词：荧光偏振法聚山梨醇酯20 DAF 融合蛋白

康柏西普制品中CHO细胞DNA残留量的检测

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中国生物制品学杂志 2013年第7期26卷 1023-1026页

作者：牛冬云连炜何静邬智刚柯潇成都康弘生物科技有限公司四川成都610036

目的建立特异的CHO细胞DNA残留量荧光定量PCR（Q-PCR）检测方法。方法采用DNeasy Tissue Kit提取CHO细胞基因组DNA,制备DNA标准品;确定Q-PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,并验证其专属性、准确... 详细信息

目的建立特异的CHO细胞DNA残留量荧光定量PCR（Q-PCR）检测方法。方法采用DNeasy Tissue Kit提取CHO细胞基因组DNA,制备DNA标准品;确定Q-PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,并验证其专属性、准确性及精密性;用建立的方法对1003b02、1008b05、1012b09、1104b04、1108b13、1112b24批康柏西普原液的CHO细胞DNA残留量进行检测。结果建立的标准曲线Ct值与模板DNA浓度的对数值之间呈良好的线性关系,相关系数为0.99以上;检测HUVEC、HEK293细胞的DNA残留量均无特异性扩增曲线;检测高、中、低浓度的DNA标准品（105、103、101pg/ml）的平均回收率均在Q-PCR方法可接受的回收率范围（50%~200%）内,批间变异系数分别为9.3%、21.8%、26.8%;检测100pg/ml浓度的DNA标准品的平均回收率为111.6%,变异系数为20.4%;康柏西普原液的DNA残留量远低于100 pg/剂量。结论已成功建立特异的CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,该方法专属性好,准确性及精密性高,可作为CHO宿主细胞DNA残留量的常规检测方法。

关键词： CHO细胞 DNA残留量荧光定量PCR

QuEChERS-HPLC-MS/MS法检测谷物源性食品中3种赭曲霉毒素

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食品工业 2019年第12期40卷 311-315页

作者：林琳江苏康正生物科技有限公司

建立一种快速、高效的QuEChERS-HPLC-MS/MS测定谷物源性食品中的3种赭曲霉毒素的方法。样品前处理采用乙腈-水溶剂提取,经SiO2+C18+MgSO4净化后检测。以0.10%甲酸-乙腈作为流动相,在质谱检测器的多反应监测模式下进行分析。结果表明, 3... 详细信息

建立一种快速、高效的QuEChERS-HPLC-MS/MS测定谷物源性食品中的3种赭曲霉毒素的方法。样品前处理采用乙腈-水溶剂提取,经SiO2+C18+MgSO4净化后检测。以0.10%甲酸-乙腈作为流动相,在质谱检测器的多反应监测模式下进行分析。结果表明, 3种赭曲霉毒素在1.0~50.0 ng/mL质量浓度范围内线性良好,相关系数r2为0.999 2~0.999 7,检出限均为0.50μg/kg,定量限均为2.0μg/kg。在2, 4和20μg/kg 3个添加水平进行加标回收试验(n=5),回收率达到84.6%~107%。该方法具有前处理简单、净化效果好、灵敏度高和检测速度快的优点,适用于谷物基质的食品中3种赭曲霉毒素的分析和定量检测。

关键词： QuEChERS 高效液相色谱谷物源性赭曲霉毒素

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商贸企业全面预算管理体系的思路探讨

财富时代 2022年第9期 40-42页

作者：刘晓君青岛康伦生物科技有限公司

商贸企业在新时期发展背景下需要逐渐地改革以往的管理模式，尤其是要完善内部控制工作体系，加强全面预算管理，认真审核不同资金的支出以及流动情况。从全面预算的角度入手做好资金的审核，并且灵活地应对在全面预算管理工作中所存在...

商贸企业在新时期发展背景下需要逐渐地改革以往的管理模式，尤其是要完善内部控制工作体系，加强全面预算管理，认真审核不同资金的支出以及流动情况。从全面预算的角度入手做好资金的审核，并且灵活地应对在全面预算管理工作中所存在的问题，因此，商贸企业在新时期下需要根据全面预算管理的相关要求构建与之对应的管理模式，从不同的角度提高全面预算管理工作本身的针对性，以商贸企业战略目标为主，有序地实施全面预算管理模式。在部门内部贯彻落实责任制度，

关键词：