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脑立体定位斜插法在小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞纤维投射研究中的应用

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成都医学院学报 2024年第2期19卷 231-236页

作者：龚劲雯杨倩颖戴婷李淑蓉伍丽娜苏炳银赵海霞成都医学院发育与再生四川省重点实验室成都610500 成都医学院组织学与胚胎学教研室成都610500 成都医学院病理学与病理生理学教研室成都610500 成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室成都610500

目的探讨脑立体定位斜插法靶向注射小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶的可行性,并观察该方法对小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞纤维的神经投射。方法利用脑立体定位直插法(进针方向与水平方向垂直)或斜插法(进针方向与水平方向的垂直线呈30°夹角... 详细信息

目的探讨脑立体定位斜插法靶向注射小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶的可行性,并观察该方法对小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞纤维的神经投射。方法利用脑立体定位直插法(进针方向与水平方向垂直)或斜插法(进针方向与水平方向的垂直线呈30°夹角)标记Pcp2-Cre小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶,对比两种手术方式对小鼠颈部上方肌肉组织的影响;选择梯度剂量(500、300、150 nL)的顺行示踪病毒,探索适宜的病毒注射剂量;通过斜插法在小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶注射重组酶依赖性顺行示踪病毒,观察该小叶浦肯野细胞的传出神经投射。结果相较于脑立体定位直插法,斜插法中小鼠头部皮肤切口更小,且不易破坏小鼠颈部上方肌肉;在前囟后6.00 mm、中线旁开0.00 mm、深4.08 mm坐标处,采用斜插法能靶向定位到小脑蚓部第Ⅸ小叶;同时,150 nL低剂量的病毒可较好的标记小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞,且不发生泄漏;通过病毒顺行示踪,在小鼠小脑顶核中间部、前庭小脑核、前庭内侧核巨细胞部以及前庭下核均检测到来自第Ⅸ小叶浦肯野细胞的神经投射纤维。结论脑立体定位斜插法能在一定程度上减轻手术对小鼠颈部上方肌肉的破坏,通过该方法注射顺行示踪病毒能精确靶向小脑蚓部第Ⅸ小叶,并观察到该小叶浦肯野细胞的传出神经投射。

关键词：小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞脑立体定位技术病毒顺行示踪

基于血清药物化学和网络药理学的知母-黄柏药对盐炙前后治疗2型糖尿病药效物质基础及作用机制分析

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南京中医药大学学报 2024年第5期40卷 479-493页

作者：孟祥祺张春玲贾耀霞雷锦杰夏阳淼谭睿余凌英成都中医药大学药学院/西南特色中药资源国家重点实验室四川成都610075 西南交通大学生命科学与工程学院四川成都610031

目的基于液质联用技术对生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对水提液灌胃给药后大鼠入血成分分析,结合网络药理学预测盐炙在知母-黄柏药对治疗2型糖尿病的影响,并通过体外实验进行初步验证。方法大鼠连续灌胃给药生知母-生黄柏药对、盐知母... 详细信息

目的基于液质联用技术对生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对水提液灌胃给药后大鼠入血成分分析,结合网络药理学预测盐炙在知母-黄柏药对治疗2型糖尿病的影响,并通过体外实验进行初步验证。方法大鼠连续灌胃给药生知母-生黄柏药对、盐知母-盐黄柏药对水提液2次,中间间隔1 h,末次给药60 min后腹主动脉取血,用甲醇沉淀蛋白法处理后复溶,采用色谱柱Shim-pack GIST C 18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相A相为0.1%甲酸水,B相为0.1%甲酸-乙腈;梯度洗脱,正、负离子全扫描模式,质量扫描范围m/z 100~1500。结合数据库二级谱图及文献,分析鉴定生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对的入血成分。检索2型糖尿病疾病靶点,对入血成分和疾病的交集靶点进行蛋白质互作网络分析、GO、KEGG通路富集分析,构建“入血成分-靶点”网络图,运用AutoDock软件对筛选出的核心成分和核心靶点进行分子对接验证。验证实验以HepG2细胞为实验对象,胰岛素联合高糖诱导胰岛素抵抗模型,CCK8法检验盐炙前后知母-黄柏药对对细胞增殖影响,Western blot检测PI3K-AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果生知母-生黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出15种原型成分,1个芒果苷代谢成分。盐知母-盐黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出17个原型成分,1个芒果苷代谢成分。盐炙后入血成分中芒果苷、小檗碱、3-异丁基戊二酸等成分含量较生品高。KEGG和GO结果显示,知母-黄柏药对治疗2型糖尿病可能与RNA聚合酶的转录调控、炎症反应、AGE-RAGE、PI3K-AKT、胰岛素抵抗等通路有关。细胞实验表明盐炙前后知母-黄柏药对可以上调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、GLUT4蛋白表达,且盐炙组效果优于生品组。结论初步阐释了知母-黄柏药对盐炙前后入血成分,阿魏酸、小檗碱、小檗红碱、芒果苷与mTOR、SIRT1、EGFR、PPARA等可能是知母-黄柏药对盐炙后增强2型糖尿病治疗效果的主要成分和靶点,其机制可能是增强了PI3K-AKT等相关通路的作用,为知母-黄柏药对盐炙前后药效物质基础研究及临床应用提供重要参考。

关键词：知母-黄柏药对盐炙血清药物化学 2型糖尿病网络药理学分子对接细胞验证

骨膜蛋白在小鼠牙周炎进程中的时空表达规律研究

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华西口腔医学杂志 2024年第3期42卷 286-295页

作者：李钺许春梅谢旭东施培磊王骏丁一口腔疾病防治全国重点实验室、国家口腔医学中心、国家口腔疾病临床医学研究中心、四川大学华西口腔医院牙周病科成都610041

目的研究小鼠牙周炎进程中骨膜蛋白表达的时空变化规律。方法采用丝线结扎法构建小鼠牙周炎模型。设置对照组、栓丝4 d组、栓丝7 d组、栓丝14 d组、自愈组(栓丝14 d再去除丝线14 d),通过Micro-CT、组织学染色观察各组小鼠牙周组织的动... 详细信息

目的研究小鼠牙周炎进程中骨膜蛋白表达的时空变化规律。方法采用丝线结扎法构建小鼠牙周炎模型。设置对照组、栓丝4 d组、栓丝7 d组、栓丝14 d组、自愈组(栓丝14 d再去除丝线14 d),通过Micro-CT、组织学染色观察各组小鼠牙周组织的动态变化特征,利用RNAscope、免疫组织化学染色分析牙周膜内骨膜蛋白在牙周炎进程不同阶段的变化规律。培养人牙周膜细胞并随机分为对照组、脂多糖(LPS)刺激组(LPS处理12 h)、去除LPS刺激组(LPS处理3 h后再用培养基培养9 h),实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨膜蛋白、转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达。结果栓丝7 d组可见明显的牙槽骨吸收,栓丝14 d组牙周组织破坏加重,表现为破骨细胞增多、牙周膜间隙增宽、牙槽骨高度降低,而自愈组见一定程度的牙周组织修复。与对照组相比,栓丝4 d组、栓丝7 d组牙周膜内骨膜蛋白表达降低,栓丝14 d组骨膜蛋白表达相较于栓丝4 d组及栓丝7 d组增加,自愈组骨膜蛋白表达与对照组相似。qRT-PCR结果显示,LPS刺激组与对照组相比骨膜蛋白、TGF-β1的表达均下降,而去除LPS刺激组与LPS刺激组相比骨膜蛋白、TGF-β1的表达均升高。结论小鼠牙周膜内骨膜蛋白表达随炎症进展呈先下降后回升的趋势,去除炎症刺激后骨膜蛋白表达的恢复可能与TGF-β1表达上调有关。

关键词：牙周炎骨膜蛋白牙周再生牙槽骨动物模型

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大鼠臂旁外侧核化学毁损对脂多糖致热反应的影响

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吉林大学学报（医学版） 2022年第6期48卷 1375-1381页

作者：高文敏何田慧姚兰吴沆烘陈圳炜赖玉培胥建辉张洁成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室四川成都610500

目的:探讨毁损臂旁外侧核(LPB)对大鼠脂多糖(LPS)致热反应的影响,阐明LPB是否参与LPS致热反应过程。方法:将12只雄性SD大鼠随机分为对照组和LPB毁损组,每组6只。采用核团注射的方法在LPB毁损组大鼠LPB局部注射鹅膏氨酸进行化学毁损,对... 详细信息

目的:探讨毁损臂旁外侧核(LPB)对大鼠脂多糖(LPS)致热反应的影响,阐明LPB是否参与LPS致热反应过程。方法:将12只雄性SD大鼠随机分为对照组和LPB毁损组,每组6只。采用核团注射的方法在LPB毁损组大鼠LPB局部注射鹅膏氨酸进行化学毁损,对照组大鼠注入等量生理盐水,恢复至少1周,腹腔植入监测体核温度(T_(core))所需的无线遥测发射子。采用无线遥控测温的方法监测2组大鼠腹腔注射生理盐水或LPS后不同时间点T_(core)和活动度,采用免疫荧光染色和尼氏染色法检测2组大鼠LPB中的NeuN和尼氏小体的分布。结果:对照组大鼠腹腔注射LPS(100μg·kg^(-1))后诱导出典型的双相发热,在腹腔注射LPS后1.5 h开始升温,2.5 h(1相)T_(core)首次达到峰值,3.5 h再次升温且5.5 h(2相)T_(core)第2次达到峰值;LPS毁损组大鼠腹腔注射LPS后也出现发热反应,5.5 h时T_(core)较基础T_(core)明显升高(P0.05)。对照组大鼠LPB中分布大量NeuN免疫阳性神经元,尼氏小体大而数量多,细胞形态完整,边缘清晰;LPB毁损组大鼠头尾方向前、中和后3个水平的LPB毁损区域几乎未见NeuN免疫阳性神经元,神经元胞体缺失,尼氏小体大量消失。结论:LPB化学毁损模型部分消除了LPS的致热反应,表明LPB在LPS致热反应过程中起一定作用。

关键词：臂旁外侧核化学毁损脂多糖双相发热尼氏体

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妊娠对雌性大鼠冷防御性肩胛间区棕色脂肪组织产热的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2022年第3期48卷 553-560页

作者：侯晓钰李娅谢江燕宋宜安张洁胥建辉成都医学院第一附属医院产科四川成都610500 成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室四川成都610500

目的:研究妊娠对雌性大鼠冷防御反应的影响,并探讨其作用机制。方法:42只成年雌性大鼠随机分为非妊娠期组(n=14)、妊娠中期组(n=14)和妊娠晚期组(n=14)。非妊娠期组雌性大鼠不与雄性大鼠合笼,妊娠中期和妊娠晚期组雌性大鼠与雄性大鼠合... 详细信息

目的:研究妊娠对雌性大鼠冷防御反应的影响,并探讨其作用机制。方法:42只成年雌性大鼠随机分为非妊娠期组(n=14)、妊娠中期组(n=14)和妊娠晚期组(n=14)。非妊娠期组雌性大鼠不与雄性大鼠合笼,妊娠中期和妊娠晚期组雌性大鼠与雄性大鼠合笼交配,采用氨基甲酸乙酯和α-氯醛糖混合液麻醉各组大鼠。采用冰水降低各组大鼠腹部皮肤温度,给予皮肤冷刺激建立冷防御反应模型。采用多通道温度信号测量系统同步监测各组大鼠皮肤冷刺激前后腹部皮肤、直肠和肩胛间区棕色脂肪组织(iBAT)温度,采用多通道温度信号测量系统和生物信号采集系统同步监测各组大鼠皮肤冷刺激前后腹部皮肤和直肠温度及支配iBAT的交感神经放电活动(SNA)情况。结果:与冷刺激前比较,接受冷刺激后各组大鼠皮肤温度均明显降低(P0.05)。接受冷刺激后,各组大鼠皮肤温度下降幅度比较差异无统计学意义(P>0.05);各组大鼠直肠温度变化幅度比较差异无统计学意义(P>0.05)。与冷刺激前比较,接受冷刺激后,非妊娠期和妊娠中期组雌性大鼠iBAT温度均明显升高(P0.05)。接受冷刺激后,与非妊娠期组比较,妊娠中期组大鼠iBAT温度上升幅度差异无统计学意义(P>0.05)。接受冷刺激后,与非妊娠期或妊娠中期组比较,妊娠晚期组大鼠iBAT温度上升幅度明显降低(P0.05)。接受冷刺激后,与非妊娠期组比较,妊娠中期组大鼠iBATSNA上升幅度差异无统计学意义(P>0.05);与非妊娠期或妊娠中期组比较,妊娠晚期组大鼠iBATSNA上升幅度明显降低(P<0.05)。结论:非妊娠期和妊娠中期大鼠具有正常的冷防御反应;妊娠晚期大鼠冷防御反应减弱。这种现象与非妊娠期和妊娠中期大鼠具有正常的冷防御性iBATSNA、而妊娠晚期大鼠的冷防御性iBATSNA受到抑制有关。

关键词：妊娠冷防御反应棕色脂肪组织交感神经放电活动体温调节

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安徽医科大学学报 2023年第11期58卷 1872-1877页

作者：何田慧王楠萍吴思濠魏滟麟胥建辉张洁成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室成都610500 成都医学院临床医学院成都610500

目的研究腺相关病毒(AAV)介导的短发夹RNA(shRNA)敲低臂旁外侧核(LPB)EP3受体表达对LPB微量注射前列腺素E_(2)(PGE_(2))和腹腔注射脂多糖(LPS)引起的发热反应的影响。方法构建干扰EP3受体表达的AAV载体,采用立体定位方法分别向shRNA-con... 详细信息

目的研究腺相关病毒(AAV)介导的短发夹RNA(shRNA)敲低臂旁外侧核(LPB)EP3受体表达对LPB微量注射前列腺素E_(2)(PGE_(2))和腹腔注射脂多糖(LPS)引起的发热反应的影响。方法构建干扰EP3受体表达的AAV载体,采用立体定位方法分别向shRNA-control组和shRNA-EP3组大鼠LPB注射AAV2-CMV-EGFP和AAV2-shRNA-Ptger3(EP3)-EGFP病毒。4周后,利用荧光显微镜观察AAV病毒的转染效率;采用实时荧光定量PCR检测LPB EP3受体mRNA表达的变化,以验证敲低效果;采用无线遥测和能量代谢测定的方法检测LPB微量注射生理盐水、PGE_(2)或腹腔注射LPS对shRNA-control组和shRNA-EP3组大鼠的体温(T core)和能量代谢(EE)的影响。结果shRNA-EP3组及shRNA-control组大鼠AAV病毒转染主要集中于LPB脑区;与shRNA-control组相比,AAV病毒注射敲低了shRNA-EP3组大鼠LPB的EP3受体mRNA的表达(P体温无明显差异,LPB微量注射生理盐水引起T core和EE均出现短暂轻微的升高,但2组间无明显差异;与shRNA-control组相比,PGE_(2)升高shRNA-EP3组大鼠T core作用明显减弱(P体温升高幅度明显降低(P<0.01)。结论敲低LPB的EP3受体表达减弱了LPB微量注射PGE_(2)和腹腔注射LPS引起的发热反应,提示,LPB的EP3受体介导LPB PGE_(2)的致热作用,部分参与了LPS性发热。

关键词：发热 EP3受体臂旁外侧核脂多糖前列腺素E_(2)

精氨酸加压素兴奋视前区正中核谷氨酸能神经元及其机制

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安徽医科大学学报 2023年第3期58卷 418-422,428页

作者：侯晓钰宋宜安何田慧高文敏张洁胥建辉成都医学院第一附属医院产科成都610500 成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室成都610500

目的研究精氨酸加压素(AVP)对小鼠视前区正中核谷氨酸能(MnPO^(Vglut2))神经元放电活动的影响及其机制。方法采用Vglut2-tdTomato雄性小鼠制作脑片,通过荧光显微镜找到表达红色荧光蛋白的MnPO^(Vglut2)神经元,应用全细胞膜片钳技术观察... 详细信息

目的研究精氨酸加压素(AVP)对小鼠视前区正中核谷氨酸能(MnPO^(Vglut2))神经元放电活动的影响及其机制。方法采用Vglut2-tdTomato雄性小鼠制作脑片,通过荧光显微镜找到表达红色荧光蛋白的MnPO^(Vglut2)神经元,应用全细胞膜片钳技术观察AVP对MnPO^(Vglut2)神经元放电频率的影响;或观察突触传递阻断剂(STBs)对AVP引起的MnPO^(Vglut2)神经元放电频率改变的影响;或观察AVP的V1a受体拮抗剂对AVP引起的MnPO^(Vglut2)神经元放电频率改变的影响。结果与灌流人工脑脊液(ACSF)时比较,灌流ACSF+AVP时,MnPO^(Vglut2)神经元的平均放电频率明显升高(P0.05),提示AVP通过突触后的机制直接兴奋MnPO^(Vglut2)神经元。与灌流ACSF+STBs+AVP时比较,灌流ACSF+STBs+AVP+V1a受体拮抗剂时,AVP引起的MnPO^(Vglut2)神经元的放电频率增加幅度明显下降(P<0.01),提示AVP通过V1a受体直接兴奋MnPO^(Vglut2)神经元。结论AVP可通过突触后的机制经V1a受体直接兴奋MnPO^(Vglut2)神经元。该研究揭示了AVP作用的MnPO神经元的分子标记。

关键词：精氨酸加压素视前区正中核谷氨酸能神经元体温调节

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胍丁胺对大鼠应激性体温升高的抑制作用

中国应用生理学杂志 2016年第3期32卷 270-273页

作者：熊资杨永录胥建辉卜舒罗蓉陈冰成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室成都610500

目的：观察胍丁胺（AGM）是否能降低或反转应激性体温过高反应。方法：61只雄性SD大鼠随机分为3部分,每部分再分为对照组和AGM组。在实验过程中,人工气候箱和开放实验箱内的温度均保持在22℃。1用无线遥测技术连续测量大鼠的体温和活动... 详细信息

目的：观察胍丁胺（AGM）是否能降低或反转应激性体温过高反应。方法：61只雄性SD大鼠随机分为3部分,每部分再分为对照组和AGM组。在实验过程中,人工气候箱和开放实验箱内的温度均保持在22℃。1用无线遥测技术连续测量大鼠的体温和活动,观察腹腔注射AGM对安静状态下大鼠正常体温和活动的影响（n=8）;2将大鼠放置在开放实验箱中60 min复制应激性体温过高的模型,用无线遥测技术连续测量开放实验箱内大鼠体温和活动的变化（n=7~8）;3用美国哥伦布公司动物代谢分析系统测量AGM对大鼠能量代谢的影响（n=7）。结果：1腹腔注射AGM 80 mg/kg能引起正常大鼠出现明显低温反应（-0.46±0.11）℃,而注射AGM 40 mg/kg则对正常体温无明显影响。2对照组大鼠腹腔注射生理盐水后,置于开放实验箱内体温升高达（0.78±0.16）℃;给大鼠注射AGM 40或80 mg/kg后,置于开放实验箱内60 min时,体温则分别降低（0.34±0.11）℃和（0.81±0.14）℃。3AGM 80 mg/kg能明显降低大鼠的耗氧量和产热量。结论：AGM能引起正常大鼠出现低温反应和明显翻转应激性体温升高反应,其作用可能与AGM能降低能量代谢有关。

关键词：胍丁胺应激性体温过高低温反应能量代谢大鼠

5-HT_(1A)受体阻断剂对乙醇引起大鼠低体温和行为性体温调节反应的影响

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中国应用生理学杂志 2017年第1期33卷 26-30页

作者：杨永录昝旺卜舒罗蓉胥建辉成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室四川成都610500

目的:观察5-羟色胺1A(5-HT_(1A))受体阻断剂p-MPPI对乙醇引起大鼠低体温和行为性体温调节反应的影响。方法:用无线遥控测温技术记录成年雄性SD大鼠体核温度和活动的变化。用无线遥测温度梯度仪监测大鼠体核温度和行为性体温调节活动,将... 详细信息

目的:观察5-羟色胺1A(5-HT_(1A))受体阻断剂p-MPPI对乙醇引起大鼠低体温和行为性体温调节反应的影响。方法:用无线遥控测温技术记录成年雄性SD大鼠体核温度和活动的变化。用无线遥测温度梯度仪监测大鼠体核温度和行为性体温调节活动,将大鼠置于15℃~40℃的温度梯度箱内,并允许动物自由选择箱内温度,观察乙醇(3 g/kg)引起低体温和行为性体温调节的反应以及5-HT_(1A)受体阻断剂p-MPPI(1 mg/kg)对其效应的影响。结果:(1)乙醇能引起大鼠快速的体温降低反应,同时动物选择较低的环境温度。(2)5-HT_(1A)受体阻断剂p-MPPI能明显阻断乙醇引起的低体温和行为性体温调节变化。结论:(1)乙醇能使体温调定点降低,因为乙醇引起低体温时,大鼠选择较冷环境温度区;(2)5-HT可能参与乙醇引起低体温与行为性体温调节活动。

关键词：乙醇低体温大鼠行为性体温调节 5-HT1A受体阻断剂