脑立体定位斜插法在小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞纤维投射研究中的应用

作     者：龚劲雯 杨倩颖 戴婷 李淑蓉 伍丽娜 苏炳银 赵海霞 

作者机构：成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室 成都医学院组织学与胚胎学教研室 成都医学院发育与再生四川省重点实验室 成都医学院病理学与病理生理学教研室 

出 版 物：《成都医学院学报》 (Journal of Chengdu Medical College)

年 卷 期：2024年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071006[理学-神经生物学] 10[医学] 

基　　金：四川省科学技术厅科技计划项目（No:2019YJ0366） 四川应用心理学研究中心项目（No:CSXL-203015） 发育与再生四川省重点实验室开放基金（No:SYS17-001） 

主　　题：小脑后叶蚓部 第Ⅸ小叶 浦肯野细胞 脑立体定位技术 病毒顺行示踪 

摘      要：目的 探讨脑立体定位斜插法靶向注射小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶的可行性，并观察该方法对小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞纤维的神经投射。方法 利用脑立体定位直插法（进针方向与水平方向垂直）或斜插法（进针方向与水平方向的垂直线呈30°夹角）标记小脑蚓第Ⅸ小叶，对比两种手术方式对小鼠颈部上方肌肉组织的影响；选择梯度剂量（500nL、300nL、150nL）的顺行示踪病毒，探索最适宜的病毒注射剂量；通过斜插法在Pcp2-Cre小鼠小脑蚓第Ⅸ小叶注射重组酶依赖性顺行示踪病毒，观察该小叶浦肯野细胞的传出神经投射。结果 相较于脑立体定位直插法，斜插法中小鼠头部皮肤切口更小，且几乎不破坏小鼠颈部上方肌肉；在前囟后6.00mm，中线旁开0.00mm，深4.08mm坐标处，采用斜插法能够靶向定位到小脑蚓第Ⅸ小叶；经分析发现，150nL低剂量的病毒可较好的标记小脑蚓第Ⅸ小叶浦肯野细胞，且不发生泄漏；通过病毒顺行示踪，在Pcp2-Cre小鼠小脑顶核中间部、前庭小脑核、前庭内侧核巨细胞部以及前庭下核均检测到来自第Ⅸ小叶浦肯野细胞的神经投射纤维。结论脑立体定位斜插法能在一定程度上减轻手术对小鼠颈部上方肌肉的破坏，通过该方法注射顺行示踪病毒能精确靶向小脑后叶蚓部第Ⅸ小叶，并观察到该小叶浦肯野细胞的传出神经投射。