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基于蟾蜍分泌腺转录组对蟾蜍二烯酸内酯合成途径关键基因的挖掘

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中草药 2024年第1期55卷 258-268页

作者：张灵迂王普庆周罗静高继海侯飞侠成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室四川成都611137

目的挖掘蟾蜍二烯酸内酯(bufadienolides,BDs)生物合成途径的关键基因。方法使用激光捕获显微切割技术捕获中华大蟾蜍分泌腺[耳后浆液腺(CE)、皮肤浆液腺(CK)和皮肤粘液腺(CN)]为实验材料,在DNBseq测序平台进行转录组测序,并进行生信... 详细信息

目的挖掘蟾蜍二烯酸内酯(bufadienolides,BDs)生物合成途径的关键基因。方法使用激光捕获显微切割技术捕获中华大蟾蜍分泌腺[耳后浆液腺(CE)、皮肤浆液腺(CK)和皮肤粘液腺(CN)]为实验材料,在DNBseq测序平台进行转录组测序,并进行生信分析及对转录组结果进行验证。结果共得到63.01 Gb原始数据和4 550个差异基因,其中CE和CK共有上调差异基因880个,其GO和KEGG富集显示主要在甾类激素生物合成、胆汁酸合成和C21类固醇生物合成等功能;CN上调差异基因主要富集在蛋白质糖基化、细胞黏结、体液免疫应答等功能。在CE、CK组上调的差异基因富集结果中发现有28种与BDs合成相关的物质的代谢、合成及运输等功能,且参与调控的基因有94个。对上述基因进行蛋白互作网络分析(protein-protein interaction network,PPI)分析,结果显示,94个基因中有34个存在互作关系,其中基因AMACR、HSD17B4、SCP2及ACOT8参与调控胆汁酸合成,基因LOC122926609参与调控石胆酸结合,结合文献分析,作者认为初级胆汁酸合成途径是BDs合成的下游途径,石胆酸可能是BDs类成分的重要前体。进一步将存在互作关系的基因关联到表达量矩阵中,结果显示大部分基因在样品CE和CK组中的表达量均大于CN组,且上述5个基因的表达趋势一致(CE、CK>CN),认为这几个基因是调控BDs的下游合成途径的关键基因。在上述基础上选取9个与BDs合成相关的基因进行qRT-PCR分析,结果与转录组测序基因表达趋势一致,认为该结果具有准确性。结论完成了中华大蟾蜍分泌腺的转录组研究,推测出BDs下游合成途径的关键基因,为蟾毒内酯类化合物的生物合成途径研究提供了丰富的参考数据,也为深入研究该类化合物生物合成的分子机制奠定了基础。

关键词：中华大蟾蜍分泌腺蟾蜍二烯酸内酯下游途径关键基因

柱前衍生化HPLC测定杜仲乔林叶与矮林叶氨基酸含量

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中国中药杂志 2023年第7期48卷 1824-1832页

作者：吴乾锋申梦园王福陈鸿平陈林胡媛刘友平成都中医药大学药学院、西南特色中药资源国家重点实验室四川成都611130

建立柱前衍生化HPLC测定杜仲叶中16种氨基酸含量的方法,比较矮林与乔林栽培模式及不同采收期杜仲叶氨基酸含量差异。以异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,色谱柱为安捷伦ZORBAX C18柱(4.6 mm×250 mm, 5μm),流动相A为乙腈-水(80∶20),流动相B为... 详细信息

建立柱前衍生化HPLC测定杜仲叶中16种氨基酸含量的方法,比较矮林与乔林栽培模式及不同采收期杜仲叶氨基酸含量差异。以异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,色谱柱为安捷伦ZORBAX C18柱(4.6 mm×250 mm, 5μm),流动相A为乙腈-水(80∶20),流动相B为0.1 mol·L^(-1)醋酸钠溶液-乙腈(94∶6),梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),进样量5μL,柱温40℃,检测波长254 nm。色谱图显示16种氨基酸分离度良好,杜仲叶氨基酸可达16.26%,杜仲矮林叶氨基酸含量高于乔林叶,氨基酸含量随不同采收期而变化,通过正交偏最小二乘法判别分析比较杜仲乔林叶与矮林叶氨基酸,可以将乔林叶与矮林叶区分开,利用主成分分析法对杜仲叶氨基酸进行综合评分,结果表明杜仲矮林叶评分高于乔林叶,营养评价结果显示杜仲叶中的蛋白属于优质植物蛋白。所建立的氨基酸含量测定方法可靠,以氨基酸含量为指标,杜仲矮林叶质量优于乔林叶,为杜仲矮林栽培模式的种植推广及杜仲叶食药两用产品合理开发提供了理论依据。

关键词：杜仲叶氨基酸柱前衍生高效液相色谱栽培模式

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不同产地赤芝药材的质量分析

中草药 2023年第21期54卷 7193-7201页

作者：曾秒谢孟君祝子喻俞月婷张梅成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室四川成都611137

目的对不同产地批次赤芝Ganoderma lucidum进行全面的质量评价,为灵芝药材质量标准的完善及优质赤芝原料药的筛选提供依据。方法收集15批次各GAP基地的灵芝药材,参照《中国药典》2020年版方法及行业通用方法,考察其水分、灰分、水溶性... 详细信息

目的对不同产地批次赤芝Ganoderma lucidum进行全面的质量评价,为灵芝药材质量标准的完善及优质赤芝原料药的筛选提供依据。方法收集15批次各GAP基地的灵芝药材,参照《中国药典》2020年版方法及行业通用方法,考察其水分、灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物,分别采用比色法、柱前衍生高效液相色谱法(PMP-HPLC)、高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定多糖含量并进行比较;采用比色法测定三萜甾醇含量,HPLC法进行灵芝酸A一测多评;同时对15批赤芝的HPLC指纹图谱进行差异比较。结果15批赤芝药材均符合《中国药典》2020年版的质量标准要求,指纹图谱聚类分析和主成分分析(principal component analysis,PCA)结果表明山东聊城产赤芝能明显区别于其他批次样品。结论15批赤芝药材均符合《中国药典》质量标准,说明国内赤芝GAP基地种植质量良好;同时山东聊城产赤芝能显著区别于其他产地批次赤芝样品,主要体现在三萜甾醇等有效成分的含量更高。

关键词：灵芝质量评价主成分分析多糖三萜指纹图谱

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红花治疗缺血性脑卒中的机制研究进展

中国中药杂志 2022年第17期47卷 4574-4582页

作者：陈俊仁谢晓芳曹小玉李刚敏尹彦棚彭成西南特色中药资源国家重点实验室成都中医药大学药学院四川成都611137

红花治疗缺血性脑卒中疗效显著,黄酮类成分是其治疗缺血性脑卒中的主要物质基础,包括红花黄色素、羟基红花黄色素A、烟花苷、红花黄色素B、山柰酚-3-O-芸香糖苷等,且以羟基红花黄色素A的研究最为广泛。目前的研究显示,红花可从减轻炎症... 详细信息

红花治疗缺血性脑卒中疗效显著,黄酮类成分是其治疗缺血性脑卒中的主要物质基础,包括红花黄色素、羟基红花黄色素A、烟花苷、红花黄色素B、山柰酚-3-O-芸香糖苷等,且以羟基红花黄色素A的研究最为广泛。目前的研究显示,红花可从减轻炎症反应、氧化应激和内质网应激,抑制神经细胞凋亡和血小板聚集,增加血流量等方面预防和治疗缺血性脑卒中。其中,红花能够调控核转录因子(nuclear factor, NF)-κB、丝裂原活化蛋白激酶、信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路以及NF-κB/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路,抑制环氧合酶-2/前列腺素D2/D前列腺素受体通路的激活缓解缺血性脑卒中过程中的炎症发展;红花可通过抑制氧化和硝化作用、调节自由基、调控一氧化氮/诱导型一氧化氮合酶信号分子等途径发挥抗氧化应激损伤的作用;而介导Janus激酶2/STAT3/细胞因子信号蛋白3抑制因子和磷酸肌苷3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β信号通路的活化、调控基质金属蛋白酶抑制剂/基质金属蛋白酶信号分子的释放是红花抑制神经细胞凋亡的主要途径。此外,红花还能通过调节自噬和内质网应激发挥其治疗缺血性脑卒中的作用。该文通过文献整理的方法对红花治疗缺血性脑卒中的分子机制进行归纳和总结,旨在为红花的临床应用提供参考。

关键词：红花羟基红花黄色素A 缺血性脑卒中研究进展

基于主客观嗅觉评价结合挥发性成分分析优选美洲大蠊去腥矫臭炮制方法

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中草药 2020年第2期51卷 338-347页

作者：邓雨娇李燕贺亚男张定堃许润春马鸿雁成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室四川成都611137

目的通过主客观评价结合分析挥发性成分变化,筛选美洲大蠊去腥矫臭的炮制方法,研究去腥矫臭作用机制。方法分别制备美洲大蠊生品、醋炙品、酒炙品与麸炒品,采用志愿者感官评价法结合电子鼻系统评价美洲大蠊生品与炮制品的腥臭气味差异,... 详细信息

目的通过主客观评价结合分析挥发性成分变化,筛选美洲大蠊去腥矫臭的炮制方法,研究去腥矫臭作用机制。方法分别制备美洲大蠊生品、醋炙品、酒炙品与麸炒品,采用志愿者感官评价法结合电子鼻系统评价美洲大蠊生品与炮制品的腥臭气味差异,筛选较优炮制品种类。采用顶空-固相微萃取-气相-质谱联用(HS-SPME-GC-MS)结合相对气味活度值(ROAV)分析关键性腥臭气味成分,并采用面积归一化法结合多元统计分析方法分析生品与炮制品挥发性成分差异,探究炮制去腥矫臭的作用机制。结果志愿者评分结果显示生品、醋炙品、酒炙品与麸炒品的平均评分分别为3.38、1.25、2.88与3.04。电子鼻结果显示,醋炙品、酒炙品、麸炒品与生品间的欧式距离分别为7.34、3.77、1.60,但醋炙品的散点分布方向与酒炙品、麸炒品方向相反,提示可能作用机制有异。整合分析主客观评价数据,确定醋炙为最优去腥矫臭炮制方法。ROAV法确认美洲大蠊关键性腥臭气味成分为3-甲基丁醛、己醛、壬醛、庚醛、癸醛、苯乙醛、(E,E)-2,4-壬二烯醛、2-戊基呋喃、(+)-柠檬烯、肉豆蔻醛。挥发性成分的PCA结果显示,4种炮制品可被明显区分开,挥发性成分及含量存在差异。正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)结果表明,生品与醋炙品中存在7个差异性成分,分别为己醛、棕榈酸、油酸、油酸乙酯、醋酸、棕榈酸乙酯、亚油酸乙酯,醋炙品含量较生品均有减少,其中关键性腥臭味成分己醛减少最为明显。结论醋炙为改善美洲大蠊腥臭气味的较优方法,其炮制机制是通过降低己醛等挥发性腥臭气味成分实现的。

关键词：美洲大蠊炮制去腥矫臭腥臭气味成分顶空-固相微萃取-气相-质谱联用醋炙己醛

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冷冻干燥技术在中药领域的研究进展

中草药 2022年第3期53卷 930-936页

作者：刘松雨黄勤挽吴纯洁龙宇万金艳张羽璐李丹石爱于双李楠成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室四川成都611137

中药是中华民族的瑰宝,中药的质量成为制约其发展的重要因素,而干燥技术的现代化是中药发展的重要环节。冷冻干燥技术可较好地保持物料的原有形态及其中含有的营养物质,获得较高质量的干燥物。介绍了冷冻干燥技术的原理及发展,着重总结... 详细信息

中药是中华民族的瑰宝,中药的质量成为制约其发展的重要因素,而干燥技术的现代化是中药发展的重要环节。冷冻干燥技术可较好地保持物料的原有形态及其中含有的营养物质,获得较高质量的干燥物。介绍了冷冻干燥技术的原理及发展,着重总结冷冻干燥技术在中药领域的研究进展,包括冷冻干燥技术应用于中药加工的目的、影响因素,以及冷冻干燥对药材组织成分的影响,以期为中药冷冻干燥的系统研究提供新思路。

关键词：冷冻干燥技术中药加工天麻三七地黄

药用与食用黄精次生代谢产物差异分析及改善胰岛素抵抗的活性成分与作用机制研究

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天然产物研究与开发 2022年第9期34卷 1582-1596页

作者：陈林王敏胡媛刘友平陈鸿平王福成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室成都611137

本研究以药用黄精与食用黄精为研究对象,分析其次生代谢产物差异,并对差异成分中改善胰岛素抵抗(IR)的潜在活性成分与作用机制进行预测分析及验证。采用UHPLC-ESI-MS/MS广泛靶向代谢组学技术检测药用与食用黄精次生代谢产物;将差异代谢... 详细信息

本研究以药用黄精与食用黄精为研究对象,分析其次生代谢产物差异,并对差异成分中改善胰岛素抵抗(IR)的潜在活性成分与作用机制进行预测分析及验证。采用UHPLC-ESI-MS/MS广泛靶向代谢组学技术检测药用与食用黄精次生代谢产物;将差异代谢物相对含量变化前十且上调的化合物进行改善胰岛素抵抗的网络药理分析,并进行分子对接验证;选取HepG2细胞,运用高糖培养基和高浓度胰岛素联合诱导胰岛素抵抗模型进行细胞实验验证。结果从药用与食用黄精样品中共鉴定出319个成分,其中差异成分106个。PCA及HCA聚类分析结果表明药用与食用黄精次生代谢产物含量存在明显差异。网络药理分析表明,异鼠李素、野漆树苷、异野漆树苷等5个上调化合物与IR疾病靶点相重合,交集靶点59个,主要涉及PI3K-Akt、mTOR、VEGF等信号通路。分子对接验证表明异鼠李素、野漆树苷、异野漆树苷与核心靶点PI3K、AKT1、VEGFA、mTOR、AMPK对接良好,其结合能均≤-20.9 kJ/mol。细胞实验验证发现,异鼠李素可以显著提高HepG2细胞IR模型葡萄糖消耗量(P<0.01),使PI3K、AKT1蛋白表达水平升高,VEGF、mTOR蛋白表达水平降低。研究结果对了解药用与食用黄精次生代谢产物差异、完善黄精品质评价方法以及改善IR潜在活性成分的筛选具有重要的意义。

关键词：代谢组学网络药理黄精次生代谢产物胰岛素抵抗异鼠李素

飞龙掌血醇提物对吲哚美辛诱导大鼠急性胃出血的保护作用

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饲料研究 2025年第1期48卷 119-124页

作者：曹家杰高洁张淼秦丹许立拔伍春凤傅鹏陈龙广西中医药大学广西南宁530200 广西壮瑶药重点实验室广西南宁530200 壮瑶药协同创新中心广西南宁530200 广西壮族自治区民族药资源与应用工程研究中心广西南宁530200

试验旨在探究飞龙掌血醇提物(TAE)对吲哚美辛(IND)诱导大鼠急性胃出血的保护作用。选取7周龄SD大鼠60只,随机分为6组,每组10只大鼠。对照组(CON)和IND模型组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(0.5%CMC-Na),云南白药组(YNBY组)灌胃360 mg/kg的YNBY... 详细信息

试验旨在探究飞龙掌血醇提物(TAE)对吲哚美辛(IND)诱导大鼠急性胃出血的保护作用。选取7周龄SD大鼠60只,随机分为6组,每组10只大鼠。对照组(CON)和IND模型组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(0.5%CMC-Na),云南白药组(YNBY组)灌胃360 mg/kg的YNBY混悬液,TAE-L、TAE-M、TAE-H组分别灌胃1.62、3.24、6.48 g/kg的TAE混悬液。连续给药10 d,末次给药后1 h,除CON组外,其余大鼠单次灌胃630 mg/kg IND建立急性胃出血模型。结果显示,与IND组比较,TAE-L组、TAE-M组、TAE-H组出血点数和出血总积分显著减少(P<0.05),出血抑制指数分别为46.93%、70.04%和56.68%;TAE-L组、TAE-M组、TAE-H组大鼠胃黏膜前列腺素E_(2)(PGE_(2))和谷胱甘肽(GSH)水平显著升高(P<0.05),髓过氧化物酶(MPO)活性显著降低(P<0.05),TAE-M组、TAE-H组表皮生长因子(EGF)水平显著升高(P<0.05),一氧化氮(NO)水平显著降低(P<0.05);胃黏膜组织病理和凋亡改变明显减轻,TAE-L组、TAE-M组、TAE-H组胃黏膜凋亡指数显著降低(P<0.05);TAE-M组、TAE-H组胃黏膜组织B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、切割型半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达量显著下调和Bax/B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)比例下降(P<0.05),TAE-H组Bcl-2蛋白表达量显著上调(P<0.05)。研究表明,添加6.48 g/kg飞龙掌血醇提物可减轻吲哚美辛诱导大鼠急性胃出血,其机制可能与增强胃黏膜组织抗氧化能力,下调Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达有关。

关键词：醇提物飞龙掌血急性胃出血吲哚美辛大鼠

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天然产物色胺酮的研究进展

天然产物研究与开发 2023年第11期35卷 2003-2013页

作者：廖维宋娇韩丽张定堃成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室成都611137

色胺酮是一种天然的吲哚喹唑啉类生物碱,是许多中草药的生物活性成分之一,如青黛Indigo Naturalis、大青叶Isatidis Folium和板蓝根Isatidis Radix。色胺酮的抗菌、抗炎作用早有报道,近期研究发现其还具有抗肿瘤、抗病毒、抗血管生成、... 详细信息

色胺酮是一种天然的吲哚喹唑啉类生物碱,是许多中草药的生物活性成分之一,如青黛Indigo Naturalis、大青叶Isatidis Folium和板蓝根Isatidis Radix。色胺酮的抗菌、抗炎作用早有报道,近期研究发现其还具有抗肿瘤、抗病毒、抗血管生成、抗寄生虫等药理活性。加之结构稳定、毒副作用小、易于被肠道吸收等特点,使之成为当前的一个研究热点。本文重点归纳总结了色胺酮的药理活性,并对其天然来源,合成方法,体内吸收、分布、代谢及毒性研究进展进行综述,以期为色胺酮的进一步研究、开发利用提供较为全面的文献信息支持。

关键词：色胺酮药理作用来源代谢毒性