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基于微流控技术的外泌体分离分析及临床应用

色谱 2025年

作者：邢宇航任香善李东浩刘璐延边大学理学院化学系长白山天然药物研究教育部重点实验室延边大学医学院

外泌体是由细胞分泌的纳米级囊泡,其中富含脂质、蛋白质、核酸等多种生物功能分子。外泌体在生物体内的信息传递、疾病机理研究及诊断等方面扮演着类似“物联网、互联网”的关键角色。然而,受限于外泌体来源、尺寸、内含物以及功能的异... 详细信息

外泌体是由细胞分泌的纳米级囊泡,其中富含脂质、蛋白质、核酸等多种生物功能分子。外泌体在生物体内的信息传递、疾病机理研究及诊断等方面扮演着类似“物联网、互联网”的关键角色。然而,受限于外泌体来源、尺寸、内含物以及功能的异质性,外泌体分离分析仍然面临诸多挑战。传统外泌体分离分析方法包括超速离心、尺寸排阻和免疫共沉淀等,但这些方法普遍存在产量低、纯度低等问题限制了其进一步的临床应用。微流控技术因其微型化、高通量、自动化和集成化等特点为复杂生物样本的高效分离分析提供了强有力的工具。基于此,本文系统总结了基于微流控技术的外泌体分离和分析方法。首先,讨论了基于外泌体的尺寸、电荷、表面官能团等物化性质结合微流控技术分离外泌体及外泌体亚群的分离方法;其次,分析了基于微流控平台的外泌体检测手段,包括外泌体群体分析方法和单个外泌体分析方法;最后,探讨了微流控技术在外泌体临床应用中的前景,并在疾病诊断和治疗方面进行了展望。微流控技术有望突破传统研究中的分离分析瓶颈,为癌症等重大疾病的精准诊断及治疗提供新技术、新平台。

关键词：微流控外泌体分离分析疾病诊断及治疗

化疗诱导的周围神经病变的发病机制及治疗进展

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中国药理学通报 2025年第1期41卷 18-22页

作者：陆新曲琳卓王勇关宏锏吴艳玲延边大学附属医院神经内科吉林延吉133002 延边大学药学院长白山天然药物研究教育部重点实验室吉林延吉133002

化疗诱导的周围神经病变(chemotherapy-induced peripheral neuropathy,CIPN)是指使用抗肿瘤药物导致外周神经功能紊乱而表现出来的一些症状与体征,与化疗药物呈剂量相关性。CIPN的发病机制尚未完全明确,且现有的治疗药物和治疗方法疗... 详细信息

化疗诱导的周围神经病变(chemotherapy-induced peripheral neuropathy,CIPN)是指使用抗肿瘤药物导致外周神经功能紊乱而表现出来的一些症状与体征,与化疗药物呈剂量相关性。CIPN的发病机制尚未完全明确,且现有的治疗药物和治疗方法疗效有限,因此探究CIPN的发病机制、研发新的治疗药物和治疗方法,解决未被满足的临床需求具有重要科学价值和社会意义。该文将从分子和细胞层面阐述CIPN的发病机制,以及对CIPN的治疗进展进行综述,为临床治疗提供参考,为未来研究提供方向。

关键词：化疗诱导的周围神经病变外周神经毒性化疗诱导疾病药物相关性副作用和不良反应中医药疗法中医药熏洗疗法

新型中性粒细胞响应性发光纳米胶束的构建及其在小鼠烧伤模型成像中的应用

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陆军军医大学学报 2025年第4期47卷 335-349页

作者：胡涛郭嘉伟张建祥重庆大学生物工程学院重庆陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系药物分析学教研室重庆陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系药剂学教研室重庆

目的基于发光材料鲁米诺(Luminol)构建中性粒细胞响应性发光纳米胶束,并考察其在小鼠烧烫伤模型早期炎症中的成像能力。方法以六氯三聚磷腈(hexachlorotripolyphosphazene,HCCP)为骨架材料,化学键合鲁米诺(Luminol)和聚乙二醇(polyethyl... 详细信息

目的基于发光材料鲁米诺(Luminol)构建中性粒细胞响应性发光纳米胶束,并考察其在小鼠烧烫伤模型早期炎症中的成像能力。方法以六氯三聚磷腈(hexachlorotripolyphosphazene,HCCP)为骨架材料,化学键合鲁米诺(Luminol)和聚乙二醇(polyethylene Glycol,PEG)合成两亲性发光材料LHP,并采用红外光谱、核磁氢谱等方法对LHP的化学结构进行表征;将LHP溶于去离子水自组装形成纳米胶束LHP NM,同时测定其粒径大小和电位,并采用透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察纳米胶束的形态;使用光纤光谱仪、微弱发光测量仪和小动物活体成像仪对纳米胶束的光谱学性质、化学发光规律和体外发光成像能力进行详细评价。使用70、80和90℃热水按简单随机抽样法分组对雌性Balb/c小鼠进行烫伤处理以建立Ⅰ度至深Ⅱ度小鼠烧烫伤模型,各组样本数n=10,通过H&E染色结果判断模型小鼠皮肤烫伤深度,采用荧光定量qPCR测定烫伤皮肤组织TNF-α,IL-1β、IL-6和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的mRNA表达水平,ROS检测试剂盒考察烧伤小鼠皮肤组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平随烫伤时间和深度变化的情况;采用FITC-Ly6G抗体标记中性粒细胞,观察模型小鼠皮肤组织中性粒细胞数量的变化;使用小动物活体成像系统考察纳米胶束LHP NM在小鼠烧烫伤模型中的成像能力,分析发光强度改变与中性粒细胞募集数量变化的相关性,对发光纳米胶束在小鼠烧烫伤模型早期炎症反应监测及烧烫伤深度能力诊断中的效果进行评价。结果核磁谱图解析证实一个HCCP分子上约键合了5个鲁米诺单元和一个聚乙二醇(PEG)链,TEM和粒径测定结果表明所制备纳米胶束形态呈空心球形,粒径约为120.000 nm。体外发光实验中,在不同浓度活性氧和MPO条件下,纳米胶束能实现高亮且持续的化学发光,发光强度与活性氧水平及纳米胶束浓度呈现良好的剂量依赖性。细胞实验表明纳米胶束能够实现中性粒细胞响应性成像,发光强度与中性粒细胞数量和LHP NM剂量呈正相关,线性相关系数分别为r=0.98、0.99。动物实验结果表明,烧烫伤模型小鼠皮肤损伤组织中的中性粒细胞数量和活性氧水平显著升高(P<0.05)。实验发现,在24 h时间点,80℃与70℃处理组对比,中性粒细胞募集数量增加约86.4%,发光成像强度增加约71.5%,证明烧伤深度与损伤局部中性粒细胞募集数量具有相关性,且LHPNM可在模型小鼠中实现中性粒细胞响应性成像,其成像强度变化与皮肤损伤组织中的中性粒细胞数量和活性氧水平密切相关。结论成功构建中性粒细胞响应性发光纳米胶束LHP NM,基于LHP NM可实现小鼠烧烫伤模型皮肤损伤组织的响应性成像,其发光强度可准确反映烧烫伤模型中的中性粒细胞浸润程度及ROS水平变化,从而实现小鼠烧烫伤模型早期炎症反应的实时监测,并为烧烫伤深度的诊断提供方法和策略。

关键词：烫伤纳米胶束中性粒细胞活性氧

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N-甲基小檗胺对细胞内钙稳态的调节作用

中国医科大学学报 2025年第2期54卷 97-102页

作者：杨东凝周诗李玥霖朱俊蒙郝丽英胡慧媛中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的探讨N-甲基小檗胺(N-MB)对H9c2心肌细胞内钙稳态的调节作用,从而明确N-MB心肌保护作用的可能机制。方法通过MOE软件预测N-MB与Ca_(V)1.2通道的结合并判断二者的结合能力与结合模式。通过全细胞膜片钳技术记录稳定表达hCa_(V)1.2的H... 详细信息

目的探讨N-甲基小檗胺(N-MB)对H9c2心肌细胞内钙稳态的调节作用,从而明确N-MB心肌保护作用的可能机制。方法通过MOE软件预测N-MB与Ca_(V)1.2通道的结合并判断二者的结合能力与结合模式。通过全细胞膜片钳技术记录稳定表达hCa_(V)1.2的HEK293细胞内Ca_(V)1.2钙通道电流的变化,观察N-MB (30μmol/L)对Ca_(V)1.2钙通道电流的影响。将Fluo 3-AM荧光探针装载至H9c2心肌细胞中,激光共聚焦显微镜检测N-MB (3、30μmol/L)对心肌细胞内Ca^(2+)浓度的影响。实时定量PCR检测N-MB (3、30μmol/L)对H9c2心肌细胞中Ca^(2+)调控相关基因Cacna1c、Cacnb2、Ryr2、Serca2a、Ncx1表达的影响。结果经MOE软件预测,N-MB和Ca_(V)1.2通道可以结合,二者相互作用的结合位点主要涉及Phe1191、Thr1420、Asn771等,作用方式有H-donor、pi-pi、pi-H 3种。N-MB(30μmol/L)对Ca_(V)1.2钙通道电流可产生明显抑制作用,其抑制率为(76.09±7.41)%。N-MB (3μmol/L、30μmol/L)作用于H9c2心肌细胞后细胞内钙信号的荧光强度明显增强(P 0.05),而Cacnb2表达显著减少(P <0.001),Ryr2表达显著增加(P <0.05)。结论 N-MB可以与Ca_(V)1.2钙通道结合。N-MB可能通过抑制Ca_(V)1.2钙通道的表达而抑制钙电流;同时可能通过促进Ryr2表达而升高细胞内Ca^(2+)浓度来参与调节细胞内钙稳态,发挥其心肌保护作用。

关键词： N-甲基小檗胺细胞内钙稳态 Ca_(V)1.2钙通道

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纳米佐剂-抗原共价偶联物中抗原负载率定量方法研究

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空军军医大学学报 2025年

作者：崔敏萱石卓越席佳越朱钰璞马政君宋朝君范黎空军军医大学药学系药物化学与药物分析学教研室空军军医大学唐都医院超声科西北工业大学生命学院

目的建立一种纳米佐剂-抗原复合物中抗原负载率的准确定量方法。方法以PLGA-PEG-COOH共聚物为原料，乳化溶剂挥发法合成PLGA纳米粒子（NPs）作为纳米佐剂，以牛血清白蛋白（BSA）为模型抗原，以1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺... 详细信息

目的建立一种纳米佐剂-抗原复合物中抗原负载率的准确定量方法。方法以PLGA-PEG-COOH共聚物为原料，乳化溶剂挥发法合成PLGA纳米粒子（NPs）作为纳米佐剂，以牛血清白蛋白（BSA）为模型抗原，以1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）为交联剂共价交联纳米佐剂与抗原以制备交联NPs。以二喹啉甲酸（BCA）法和考马斯亮蓝染色（Bradford）法为基础并进行改进，采取多种方法测定交联NPs中BSA抗原的A562nm和A595nm值，排除NPs散射作用对测定造成的干扰，分析测定结果的可靠性与稳定性，建立抗原负载率准确定量方法。结果交联物中微量的交联剂EDC/NHS可与BCA工作液反应产生强A562nm值，从而干扰BCA法的准确定量；在Bradford法中，空白NPs与Bradford工作液作用产生的A595nm值来源可拆分如下：A595nm（空白NPs+Bradford工作液）=A595nm（空白NPs+PBS缓冲液）+A595nm（PBS缓冲液+Bradford工作液）。因此，交联NPs中抗原的吸光值可依据下式计算：A595nm（BSA）=A595nm（交联NPs+Bradford工作液）－A595nm（交联NPs+PBS缓冲液）－A595nm（PBS缓冲液+Bradford工作液），实现对交联物中抗原交联率的准确测定。结论利用Bradford法按A595 nm的来源将纳米佐剂-抗原交联物与Bradford工作液产生的A595 nm值进行拆分可有效排除NPs散射对测定造成的干扰，实现纳米佐剂-抗原复合物中抗原负载率的准确测定。

关键词：纳米佐剂共价交联负载率,抗原定量方法

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胡椒碱改善代谢综合征的研究进展

现代药物与临床 2025年第1期40卷 242-248页

作者：王惠阳宋妍妍高扬民刘颖程龙中国医科大学中药与生药教研室

代谢综合征是胰岛素抵抗、肥胖等多种已知的心血管危险因素同时在个体内存在的状态，其病情复杂，易诱发多种靶器官损害。胡椒碱属于桂皮酰胺类生物碱，具有较强的生物活性，可以通过减轻胰岛素抵抗、抗肥胖、抗高血脂、减轻代谢相关脂... 详细信息

代谢综合征是胰岛素抵抗、肥胖等多种已知的心血管危险因素同时在个体内存在的状态，其病情复杂，易诱发多种靶器官损害。胡椒碱属于桂皮酰胺类生物碱，具有较强的生物活性，可以通过减轻胰岛素抵抗、抗肥胖、抗高血脂、减轻代谢相关脂肪性肝病和抗高尿酸血症显著改善代谢综合征。对胡椒碱改善代谢综合征的药理作用及其机制的相关研究进行归纳和综述，以期为胡椒碱的深入研究和开发利用提供参考。

关键词：胡椒碱代谢综合征胰岛素抵抗抗肥胖抗高血脂代谢相关脂肪性肝病抗高尿酸血症

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Yes相关蛋白对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响

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吉林大学学报(医学版) 2025年第1期51卷 68-75页

作者：赵芳李珍玲朴丽花韩龙哲崔银姬权春姬金雪梅延边大学附属医院病理科吉林延吉133000 山东省菏泽市立医院病理科山东菏泽274000 延边大学医学院组织学与胚胎学教研室吉林延吉133000 海南省妇女儿童医学中心病理科海南海口570100

目的:探讨Yes相关蛋白(YAP)沉默对人宫颈癌(CC)SiHa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:对人CC细胞株SiHa细胞进行体外培养,慢病毒YAPshRNA转染到SiHa细胞,建立稳定转染的YAP-shRNA实验组(sh-YAP组)和空载质粒对照组(对照组),采用Wes... 详细信息

目的:探讨Yes相关蛋白(YAP)沉默对人宫颈癌(CC)SiHa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:对人CC细胞株SiHa细胞进行体外培养,慢病毒YAPshRNA转染到SiHa细胞,建立稳定转染的YAP-shRNA实验组(sh-YAP组)和空载质粒对照组(对照组),采用Western blotting法检测YAP沉默效果;免疫荧光法检测2组细胞中肌动蛋白(F-actin)微丝数量及形态变化;CCK-8法、Transwell小室实验和细胞划痕实验检测2组细胞存活率、迁移及侵袭细胞数以及细胞划痕愈合率;Western blotting法检测2组细胞中上皮-间质转化(EMT)相关标记物[E钙黏蛋白(E-cadherin)和锌指转录因子(Snail)]、DNA损伤修复相关蛋白γ(γ-H2AX)和凋亡相关蛋白[c-MYC和B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)]蛋白表达水平。结果:慢病毒YAPshRNA转染SiHa细胞后,SiHa细胞中YAP蛋白表达水平明显降低(P室实验和细胞划痕实验,与对照组比较,sh-YAP组的SiHa细胞迁移和侵袭细胞数明显减少(P<0.01),细胞划痕愈合率明显降低(P<0.05);Western blotting法,与对照组比较,sh-YAP组细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05),c-MYC、Bcl-2和γ-H2AX蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:YAP基因沉默导致人CC SiHa细胞F-actin的解聚,并调控细胞凋亡和DNA损伤修复,可能会逆转EMT进程,从而抑制肿瘤细胞增殖和迁移。

关键词：宫颈肿瘤 Yes相关蛋白细胞增殖细胞迁移

手性NACE法测定富马酸福莫特罗粉吸入剂中富马酸福莫特罗对映体的含量

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中国现代应用药学 2025年第1期42卷 21-26页

作者：张修齐张波苏靓丽陈春雨王利娟乔晓强河北大学药学院河北省药物质量分析控制重点实验室药物化学与分子诊断教育部重点实验室河北保定071002

目的以L(+)-酒石酸–硼酸络合酸为手性选择剂,建立手性非水毛细管电泳法,对富马酸福莫特罗(formoterol fumarate,FMT·FUM)进行手性分离,并测定FMT·FUM粉吸入剂中对映体的含量。方法以未涂层熔融弹性石英毛细管(65 cm×50μm,45.0 cm)... 详细信息

目的以L(+)-酒石酸–硼酸络合酸为手性选择剂,建立手性非水毛细管电泳法,对富马酸福莫特罗(formoterol fumarate,FMT·FUM)进行手性分离,并测定FMT·FUM粉吸入剂中对映体的含量。方法以未涂层熔融弹性石英毛细管(65 cm×50μm,45.0 cm)为分离通道;运行电压20 k V;检测波长214 nm;室温;优化的背景缓冲液为含40 mmol·L^(-1)L(+)-酒石酸、400 mmol·L^(-1)硼酸、0.4%三乙胺的甲醇溶液。结果FMT·FUM的2个对映体在优化的手性分离条件下能够被完全分离,分离度为9.5;出峰顺序为RR-FMT·FUM在前,SS-FMT·FUM在后;在2.5~250.0μg·m L^(-1),2个对映体的质量浓度与峰面积分别呈现良好的线性关系;RR-FMT·FUM和SS-FMT·FUM的加标回收率在99.2%~101.8%,相对标准偏差为1.0%~1.9%,表明该法准确度良好;RR-FMT·FUM和SS-FMT·FUM的标示量百分含量分别为98.5%和99.1%,相对标准偏差分别为1.3%和1.5%。结论此方法可用于FMT·FUM粉吸入剂中对映体的含量测定。

关键词：非水毛细管电泳法手性分离富马酸福莫特罗粉吸入剂 L(+)-酒石酸–硼酸络合酸

TRPV1通道在小鼠组织纤维化中的作用研究进展

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中国实验动物学报 2025年

作者：师雨琛李小强空军军医大学药学系中药与天然药物学教研室空军军医大学基础医学院

纤维化的主要病理特征为纤维结缔组织增多、实质细胞减少，如持续进展可致器官结构破坏和功能减退。近年来研究发现，非选择性的阳离子通道-瞬时感受器电位香草酸亚型1（transient receptor potential vanilloid subfamily 1，TRPV1）... 详细信息

纤维化的主要病理特征为纤维结缔组织增多、实质细胞减少，如持续进展可致器官结构破坏和功能减退。近年来研究发现，非选择性的阳离子通道-瞬时感受器电位香草酸亚型1（transient receptor potential vanilloid subfamily 1，TRPV1）通道与纤维化密切相关。该通道被激活后可使胞内阳离子浓度升高，引起相应的生理和病理变化，特别是在调控组织纤维化过程中发挥关键作用。为了深入研究TRPV1通道参与组织纤维化的发生机制，动物模型已成为了该类研究的重要工具。本文将综述TRPV1通道在小鼠心脏、肾、胰腺等脏器纤维化中的作用，对TRPV1通道参与调控纤维化的相关信号通路进行总结，以期为纤维化发病机制研究和药物研发提供新的思路。

关键词：纤维化瞬时感受器电位香草酸亚型1通道小鼠模型信号通路药物靶点