纳米佐剂-抗原共价偶联物中抗原负载率定量方法研究

作     者：崔敏萱 石卓越 席佳越 朱钰璞 马政君 宋朝君 范黎 

作者机构：空军军医大学药学系药物化学与药物分析学教研室 空军军医大学唐都医院超声科 西北工业大学生命学院 

出 版 物：《空军军医大学学报》 (Journal of Air Force Medical University)

年 卷 期：2025年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(82171962) 

主　　题：纳米佐剂 共价交联 负载率,抗原 定量方法 

摘      要：目的 建立一种纳米佐剂-抗原复合物中抗原负载率的准确定量方法。方法 以PLGA-PEG-COOH共聚物为原料，乳化溶剂挥发法合成PLGA纳米粒子（NPs）作为纳米佐剂，以牛血清白蛋白（BSA）为模型抗原，以1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）为交联剂共价交联纳米佐剂与抗原以制备交联NPs。以二喹啉甲酸（BCA）法和考马斯亮蓝染色（Bradford）法为基础并进行改进，采取多种方法测定交联NPs中BSA抗原的A562nm和A595nm值，排除NPs散射作用对测定造成的干扰，分析测定结果的可靠性与稳定性，建立抗原负载率准确定量方法。结果 交联物中微量的交联剂EDC/NHS可与BCA工作液反应产生强A562nm值，从而干扰BCA法的准确定量；在Bradford法中，空白NPs与Bradford工作液作用产生的A595nm值来源可拆分如下：A595nm（空白NPs+Bradford工作液）=A595nm（空白NPs+PBS缓冲液）+A595nm（PBS缓冲液+Bradford工作液）。因此，交联NPs中抗原的吸光值可依据下式计算：A595nm（BSA）=A595nm（交联NPs+Bradford工作液）－A595nm（交联NPs+PBS缓冲液）－A595nm（PBS缓冲液+Bradford工作液），实现对交联物中抗原交联率的准确测定。结论 利用Bradford法按A595 nm的来源将纳米佐剂-抗原交联物与Bradford工作液产生的A595 nm值进行拆分可有效排除NPs散射对测定造成的干扰，实现纳米佐剂-抗原复合物中抗原负载率的准确测定。