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2010~2012年广西壮族自治区HIV-1流行株pol基因亚型的分布情况

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中华预防医学杂志 2016年第1期50卷 79-84页

作者：王洪梁冰玉周波蒋俊俊黄颉刚陈荣风赵芳凝王敏连刘洁李汶蔚叶力梁浩广西医科大学公共卫生学院广西艾滋病防治研究重点实验室南宁530021 广西艾滋病防治研究重点实验室广西医科大学医学实验中心

目的分析广西壮族自治区（广西）HIV-1流行株poz基因亚型的分布情况。方法于2010年1月1日至2012年12月31日，采用方便抽样的方法，在广西11个城市开展调查，通过问卷调查收集调查对象的流行病学资料。纳入标准为：Westernblot确证HIV-1... 详细信息

目的分析广西壮族自治区（广西）HIV-1流行株poz基因亚型的分布情况。方法于2010年1月1日至2012年12月31日，采用方便抽样的方法，在广西11个城市开展调查，通过问卷调查收集调查对象的流行病学资料。纳入标准为：Westernblot确证HIV-1阳性、病毒载量〉1000拷贝／ml、〉18岁及无特殊重大疾病。共招募到调查对象152例。采集每例调查对象5ml外周血并提取病毒基因组RNA，采用巢式RT—PCR扩增病毒pol区全长基因并测序；对所得序列修正后用Genotyping进行初步分型；采用MEGA5．03软件构建系统进化树对pol序列分型进行验证；采用RIP及jpHMMatGOBICS程序分析未知重组毒株的重组断点。结果152例HIV-1感染者共成功扩增出137例pof区全长基因，共获得127例HIV一1亚型判定，其中CRF01_AE占55．9％（71例），CRF08-BC占29．9％（38例），CRF07-BC占10．2％（13例），B（B’）占2．4％（3例），未知重组型占1．6％（2例）。广西11个城市以CRF01-AE亚型流行为主；异性性传播和注射毒品传播感染HIV-1者间CRF01_AE亚型分布差异有统计学意义（X2=15．07，P〈O．001），其比例分别为67．4％（58／86）和34．1％（14／41）；21～35、36～60和〉60岁HIV．1感染者中，CRF01_AE亚型所占比例分别为43．6％（17／39）、57．6％（38／66）、77．3％（17／22），CRF_08BC亚型所占比例分别为43．6％（17／39）、28．8％（19／66）、9．1％（2／22），差异有统计学意义（X2=8．48，P=0．014）。2株未知重组型毒株的模式分别为CRF01_AE／B（B’）和CRF01_AE／C／B（B’）重组型。结论2010--2012年广西HIV-1流行株pol基因主要流行亚型为CRF01_AE，以异性性传播为主；出现的未知重组型毒株是由CRF01_AE与CRF_BC重组产生的。

关键词： HIV-1 基因感染重组毒株

2009-2012年广西HIV-1耐药状况调查

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第11期35卷 846-850页

作者：刘洁梁冰玉周波王敏连赵芳凝陈荣凤王洪潘沛江蒋俊俊黄颉刚梁浩叶力广西医科大学公共卫生学院广西艾滋病防治研究重点实验室南宁530021 广西医科大学医学科学实验中心广西艾滋病防治研究重点实验室

目的调查2009-2012年广西HIV-1感染者的耐药状况，同时探讨耐药与亚型的关系。方法在广西各地随机募集HIV／AIDS患者，提取患者血液样本的HIVRNA，逆转录后扩增pol基因并测序，使用在线分析工具Genotyping结合MEGA 5．03软件进行亚型分... 详细信息

目的调查2009-2012年广西HIV-1感染者的耐药状况，同时探讨耐药与亚型的关系。方法在广西各地随机募集HIV／AIDS患者，提取患者血液样本的HIVRNA，逆转录后扩增pol基因并测序，使用在线分析工具Genotyping结合MEGA 5．03软件进行亚型分型，使用斯坦福大学的HIV耐药数据库确定耐药突变位点及药物耐受情况。结果获得196份pol区序列，其中接受抗病毒治疗样本103例（52．55％），未经治疗样本93例（47．45％）；亚型分布为95例CRF01-AE（48．47％）、88例CRF08_BC（44．90％）、12例CRF07_BC（6．12％）以及1例B亚型（0．51％）；接受抗病毒治疗患者耐药率为10．68％，未经治疗患者耐药率为7．53％；在196例研究对象中发现低度耐药14例，中度耐药3例，高度耐药4例；1例针对核苷类逆转录酶抑制剂（NRTIs）和非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTIs）发生二重耐药；不同类型药物耐药结果：蛋白酶抑制剂（PIs）、NRTIs、NNRTIs及整合酶抑制剂（INs）相关耐药率分别为6．63％、3．06％、11．22％、8．67％；CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC亚型发生PIs相关突变的频率分别为6．32％、41．67％和2．27％；A71V／T在CRF07_BC毒株中出现最多（75％），E138A仅出现在CRF08_BC毒株中（100％）。结论广西HIV-1患者耐药发生率高于全国水平，不同亚型HIV-1流行株的耐药发生率不同。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1) 亚型耐药性

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巢式聚合酶链反应检测感染树鼩中乙型肝炎病毒DNA

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现代预防医学 2007年第14期34卷 2627-2629页

作者：杨春李瑗陈茂伟李丽萍曹骥梁亮苏建家广西肿瘤防治研究所实验研究部广西医科大学医学科学实验中心南宁 530021

[目的]运用巢式聚合酶链反应(Nested-PCR)检测人HBV在树鼩体内感染,并探讨Nested-PCR在树鼩感染模型研究中的意义。[方法]用本实验室自繁树鼩,无感染史,年龄在1d龄至4月龄的树鼩,经肌肉、腹腔或者股静脉等多种途径接种人HBV(约含1×107H... 详细信息

[目的]运用巢式聚合酶链反应(Nested-PCR)检测人HBV在树鼩体内感染,并探讨Nested-PCR在树鼩感染模型研究中的意义。[方法]用本实验室自繁树鼩,无感染史,年龄在1d龄至4月龄的树鼩,经肌肉、腹腔或者股静脉等多种途径接种人HBV(约含1×107HBV DNA copies/ml)。接种后定期抽血,用Nested-PCR检测血清中的HBV DNA情况。[结果]在111只感染了人HBV的树鼩血清中,经Nested-PCR检测,共有46只树鼩检测出HBV DNA,动物感染的阳性率为41.44%(46/111)。其中1～30d龄的66只树鼩检测出HBV DNA的有33只,阳性率50%;31d龄至4月龄的45只树鼩检出HBV DNA的有13只,阳性率28.89%,两者阳性率比较差异有统计学意义(P﹤0.05)。在Nested-PCR检测过程中,所有的动物血清的第1轮PCR扩增结果均为阴性,经第2轮PCR扩增则出现阳性结果。Nested-PCR扩增产物经测序证实为目的基因(HBV C区)的序列。[结论]选择幼年树鼩感染HBV,可提高树鼩的感染率;Nested-PCR比普通PCR方法更敏感、更特异,能有效的提高树鼩血清中HBV DNA的检出率,有较大的实用价值,为研究树鼩感染人HBV模型建立了一种良好的检测方法。

关键词：巢式聚合酶链反应乙型肝炎病毒树鼩

基于同位素标记相对和绝对定量技术的联合用药抗肝纤维化作用的蛋白质组学研究

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中草药 2015年第1期46卷 73-79页

作者：曹雯廖明周燕广西医科大学药学院广西南宁530021 广西医科大学医学科学实验中心区域性高发肿瘤早期防治研究重点实验室广西南宁530021

目的以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、牛磺酸和染料木素3种具有不同抗纤维化作用的药物组成联合用药,应用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术研究联合用药对肝纤维化大鼠治疗作用的蛋白质基础及分子机制。方法将SD大鼠分为对照组... 详细信息

目的以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、牛磺酸和染料木素3种具有不同抗纤维化作用的药物组成联合用药,应用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术研究联合用药对肝纤维化大鼠治疗作用的蛋白质基础及分子机制。方法将SD大鼠分为对照组、模型组和联合用药组,模型组和联合用药组大鼠分别ig 50%CCl4溶液,对照组给予花生油,连续14周。于第9周开始联合用药组进行ig给药(牛磺酸200 mg/kg+EGCG 30 mg/kg+染料木素20 mg/kg)治疗,连续6周。采集大鼠血清和肝组织样本,肝组织进行HE染色观察病理变化,模型组和联合用药组血清样本组内等量混合后去除高丰度蛋白,i TRAQ试剂标记后应用液相色谱分离,经质谱鉴定,进行相对定量及生物信息学分析,用ELISA法对有代表性的血清差异蛋白Txn1进行验证。结果质谱鉴定出置信度在95%以上的蛋白质共359个,其中差异表达的蛋白有78种,上调的蛋白有51种,下调的有27种。与模型组相比,差异蛋白Txn1在联合用药组血清中的量明显升高(P<0.05)。结论联合用药能通过对多个蛋白质、多途径的综合调节达到抗肝纤维化的效果,其中对抗氧化防御系统和血液凝固级联活化途径的调节可能是联合用药抗肝纤维化作用的分子机制。

关键词：联合用药同位素标记相对和绝对定量蛋白质组学肝纤维化表没食子儿茶素没食子酸酯牛磺酸染料木素

靶向上皮特异性抗原阳性肝癌干细胞单克隆抗体联合顺铂治疗肝癌的实验研究

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中华肿瘤杂志 2016年第5期38卷 333-339页

作者：何永燕遇珑容雁孙立新孙力超杨治华冉宇靓李力广西医科大学医学科学实验中心南宁530021 国家癌症中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 100021 广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科南宁530021

目的探讨靶向肝癌干细胞单克隆抗体的生物学特征及其联合顺铂治疗肝癌的疗效。方法采用无血清悬浮培养法和PKH26染色法确定肝癌Bel7402-V3细胞中存在肿瘤干细胞。细胞免疫荧光法检测单克隆抗体15D2识别的抗原蛋白与PKH26阳性细胞及上皮... 详细信息

目的探讨靶向肝癌干细胞单克隆抗体的生物学特征及其联合顺铂治疗肝癌的疗效。方法采用无血清悬浮培养法和PKH26染色法确定肝癌Bel7402-V3细胞中存在肿瘤干细胞。细胞免疫荧光法检测单克隆抗体15D2识别的抗原蛋白与PKH26阳性细胞及上皮特异性抗原（ESA）在Bel7402-V3细胞中的表达情况。无血清悬浮培养法检测流式细胞术分选出的15D2阳性细胞的自我更新能力以及15D2对Bel7402．V3细胞自我更新能力的影响。CCK8法检测15D2对细胞顺铂耐药能力的影响。裸鼠体内治疗实验分析15D2联合顺铂对Bel7402．V3移植瘤生长的抑制作用。结果Bel7402-V3细胞无血清悬浮培养11d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。细胞免疫荧光显示，单克隆抗体15D2识别的抗原分子能与PKH26和ESA在Bel7402-V3细胞上共定位。15D2阳性细胞和15D2阴性细胞的体外成球率分别为（30．4±3．4）％和（8．8±1．8）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。15D2阳性细胞具有更高的顺铂耐药性，15D2阳性细胞和15D2阴性细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为1．014和0．365μmol／L。单克隆抗体15D2能够显著抑制Bel7402．V3细胞的无血清成球，抑制率为37．5％。经15D2处理后的Bel7402-V3细胞，顺铂耐药能力明显下降，其Ic50为0．211μg／ml，而对照组的IC50为0．325μg／ml。抗体体内治疗实验结果显示，50、25、12．5mg／kg15D2组的肿瘤生长抑制率分别为82．6％、71．4％和60．0％，50mg／kg15D2＋顺铂组的肿瘤生长抑制率为91．0％，顺铂组的肿瘤生长抑制率为56．7％。结论单克隆抗体15D2是抗肝癌干细胞的功能性单克隆抗体，为肝癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。

关键词：肝肿瘤细胞系肿瘤肿瘤干细胞抗体单克隆顺铂上皮特异性抗原抗药性

蛇毒神经生长因子干预HSC-T6细胞差异蛋白质分析

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生物技术通报 2013年第5期29卷 130-136页

作者：徐瑾张学荣胡仁统罗小玲陈缨林兴廖明付娆付道滢广西医科大学医学科学实验中心南宁530021 广西医科大学肿瘤医院南宁530021

旨在建立肝星状细胞(HSC-T6)双向凝胶电泳图谱,初步分析NGF对HSC-T6细胞蛋白质表达的影响。试验设立空白对照组和NGF(4、8和16 mg/L)处理组,分别作用于HSC-T6细胞,24 h后提取细胞总蛋白;利用2-DE分离空白对照组和NGF处理组细胞总蛋白质... 详细信息

旨在建立肝星状细胞(HSC-T6)双向凝胶电泳图谱,初步分析NGF对HSC-T6细胞蛋白质表达的影响。试验设立空白对照组和NGF(4、8和16 mg/L)处理组,分别作用于HSC-T6细胞,24 h后提取细胞总蛋白;利用2-DE分离空白对照组和NGF处理组细胞总蛋白质后,经图像分析识别差异表达的蛋白点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质;生物信息学对差异蛋白质点进行GO分类及信号传导通路分析。结果显示,比较分析空白对照组和NGF作用组的2-DE图谱,找到差异蛋白质点47个,其中在NGF作用组表达上调22个,下调25个,差异蛋白质点的表达部分随着NGF浓度的增加呈递增性,部分随着NGF浓度的增加呈递减性,对其中18个表达差异1.8倍以上的蛋白质点进行肽质量指纹图分析,鉴定出13个与细胞信号传导、细胞增殖、氧化代谢有关的蛋白质。眼镜蛇毒NGF能改变HSC-T6细胞信号通路中相关蛋白质的差异表达,为在蛋白质水平研究NGF抗肝纤维化机制提供理论依据。

关键词：眼镜蛇毒(NGF) 肝星状细胞(HSC-T6) 蛋白质组学双向电泳技术飞行时间串联质谱

ISG15在恶性肿瘤中的作用及机制研究进展

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华中科技大学学报（医学版） 2023年第3期52卷 409-412,430页

作者：李葵娜阳志军广西医科大学附属肿瘤医院妇科区域性高发肿瘤早期防治研究教育部重点实验室(广西医科大学)南宁530021

干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene15,ISG15)是最早发现的泛素样蛋白,在恶性肿瘤中显示出复杂的致癌或抗癌双重活性,然而其具体调控机制仍未阐明。近年来研究发现ISG15通过调控DNA复制分叉进程、自噬及线粒体功能、免疫微环... 详细信息

干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene15,ISG15)是最早发现的泛素样蛋白,在恶性肿瘤中显示出复杂的致癌或抗癌双重活性,然而其具体调控机制仍未阐明。近年来研究发现ISG15通过调控DNA复制分叉进程、自噬及线粒体功能、免疫微环境及靶蛋白的翻译后修饰等参与恶性肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭转移、干细胞干性及耐药等,是潜在的诊断、预后标志物及治疗靶点。该文就ISG15调控恶性肿瘤发生发展作用机制的最新发现进行综述。

关键词： ISG15 恶性肿瘤 DNA复制叉免疫微环境转移耐药免疫治疗

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内质网应激介导的细胞死亡与肿瘤治疗进展

肿瘤防治研究 2013年第2期40卷 197-200页

作者：郑华广西医科大学医学科学实验中心南宁530021

0引言内质网（ER）是真核生物的重要细胞器之一,内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）表现为由各种刺激引起的内质网腔内错误折叠、未折叠的蛋白质聚集以及细胞内Ca2＋平衡紊乱。ERS发生后,内质网腔大量蛋白质堆积引发了真... 详细信息

0引言内质网（ER）是真核生物的重要细胞器之一,内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）表现为由各种刺激引起的内质网腔内错误折叠、未折叠的蛋白质聚集以及细胞内Ca2＋平衡紊乱。ERS发生后,内质网腔大量蛋白质堆积引发了真核生物进化中高度保守的未折叠蛋白质应答（unfolded pro-tein reaction,UPR）。

关键词：内质网应激凋亡自噬细胞死亡肿瘤治疗

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EB病毒感染上皮细胞机制的研究进展

广东医学 2015年第3期36卷 472-474页

作者：姚孟薇谢莹广西医科大学医学科学实验中心南宁530021

Epstein －Barr 病毒（EBV）为疱疹病毒科嗜淋巴细胞属的成员，是单核细胞增多症的病原体，并与多种人类恶性肿瘤如 Burkitt 淋巴瘤、鼻咽癌及免疫缺陷患者的 B 淋巴细胞瘤等发生密切相关。 EBV 在超过90％的人群中存在着潜伏感染［1］... 详细信息

Epstein －Barr 病毒（EBV）为疱疹病毒科嗜淋巴细胞属的成员，是单核细胞增多症的病原体，并与多种人类恶性肿瘤如 Burkitt 淋巴瘤、鼻咽癌及免疫缺陷患者的 B 淋巴细胞瘤等发生密切相关。 EBV 在超过90％的人群中存在着潜伏感染［1］，但它一般仅存在于淋巴细胞内，仅有极少数侵入上皮细胞中并参与恶性肿瘤的发生发展。 EBV 侵犯上皮细胞是细胞恶性转化的表现，该观点也越来越受到学者们的认可。目前，学者们对 EBV 感染 B 淋巴细胞的机制了解较多，然而对 EBV 是如何感染上皮细胞的却是知之甚少，EBV 感染上皮细胞的机制也逐渐成为近年来的研究热点。本文就EBV 感染上皮细胞的4种可能的主要途径作一综述。

关键词：上皮细胞机制病毒感染 EBV 淋巴细胞瘤单核细胞增多症 Burkitt 细胞恶性转化恶性肿瘤