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两种ACYW135群脑膜炎球菌多糖-CRM197结合疫苗的制备及质量与免疫原性分析

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微生物学免疫学进展 2024年第2期52卷 35-42页

作者：姚永鹏张子昌李松孙俊范志源许可朱慧王基宏魏鑫黄杰成都康华生物制品股份有限公司研发部四川成都611130

目的对比2种结合方式的以白喉毒素无毒突变体197(cross-reacting material 197,CRM197)蛋白为载体制备的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗的质量与免疫原性。方法方法一以CRM197蛋白羧基为结合位点,用1-氰基-4-(二甲氨基)吡啶四氟硼酸盐(1... 详细信息

目的对比2种结合方式的以白喉毒素无毒突变体197(cross-reacting material 197,CRM197)蛋白为载体制备的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗的质量与免疫原性。方法方法一以CRM197蛋白羧基为结合位点,用1-氰基-4-(二甲氨基)吡啶四氟硼酸盐(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate, CDAP)分别将A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖羟基活化为氰基,以己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide, ADH)作为连接剂,最后通过4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐[4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methyl morpholinium chloride, DMTMM]与CRM197反应得到单价结合物;方法二用CRM197蛋白氨基为结合位点,用高碘酸钠分别氧化A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖羟基为醛基,加入CRM197蛋白生成席夫碱,最后通过氰基硼氢化纳还原,得到单价结合物。对2种结合方式制备的结合物原液进行理化检测,合格后再分别将2种路线的单价结合物按比例与冻干辅料混合后经冻干制成2种ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗(ACYW135-CRM197),分别免疫NIH小鼠后,用ELISA检测小鼠血清中抗体并进行统计学分析。结果 2种结合方式制备的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗,游离多糖含量均80.00%,但以CRM197蛋白羧基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌单价结合物原液中游离多糖含量(3.20%~11.50%)均低于以氨基为结合位点的相应结合物原液中的游离多糖(8.35%~17.42%);疫苗成品的平均相对分子质量,以CRM197蛋白羧基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗更大。2种结合疫苗免疫小鼠后其体内产生的抗体经检定后统计分析,A群、C群多糖免疫原性差异均无统计学意义(P=0.080,P=0.176),W群、Y群多糖免疫原性差异均有统计学意义(P=0.015,P=0.027)。结论以CRM197蛋白载体羧基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗在质量和免疫原性方面均不差于传统的以CRM197蛋白载体氨基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗。

关键词：脑膜炎奈瑟菌结合疫苗白喉毒素无毒突变体197 免疫原性质量研究

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篮式反应器故障原因及典型故障分析

设备管理与维修 2024年第2期 88-90页

作者：吴士栋北京生物制品研究所有限责任公司北京100176

篮式反应器在生物制药中应用广泛,主要用于细胞、病毒的培养。可以通过控制反应器内的温度、溶氧、pH值等参数,为细胞、病毒生长创造良好环境,保证培养物良好生长、收获。设备一旦出现故障,将对生产造成很大影响。有时设备故障表现出来... 详细信息

篮式反应器在生物制药中应用广泛,主要用于细胞、病毒的培养。可以通过控制反应器内的温度、溶氧、pH值等参数,为细胞、病毒生长创造良好环境,保证培养物良好生长、收获。设备一旦出现故障,将对生产造成很大影响。有时设备故障表现出来的故障现象一致,但原因多种多样。本文对篮式反应器的故障原因进行分析,并给出典型故障的排除方法,指导维修人员快速找出故障原因并排除故障,保证生产顺利进行。

关键词：篮式反应器故障维修原因分析

两种分析冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液及半成品疫苗颗粒含量方法的比较

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中国生物制品学杂志 2024年第7期37卷 866-872页

作者：杨雪张秋菊冯子祎林洪娟张颖刘畅孙宏亮长春生物制品研究所有限责任公司吉林长春130062

目的对两种测定冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液及半成品疫苗颗粒含量的方法进行比较分析,为制定狂犬病疫苗制品颗粒含量和纯度标准检测方法提供实验依据。方法将样品进行疫苗颗粒裂解、BCA定量、体积排阻色谱-高效液相色谱法(size ... 详细信息

目的对两种测定冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液及半成品疫苗颗粒含量的方法进行比较分析,为制定狂犬病疫苗制品颗粒含量和纯度标准检测方法提供实验依据。方法将样品进行疫苗颗粒裂解、BCA定量、体积排阻色谱-高效液相色谱法(size exclusion chromatograghy-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)分析,分别采用BCA-SEC相对面积法和BCA-SEC标准曲线法对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液及半成品总蛋白浓度进行检测,并对疫苗颗粒含量进行定量分析,对两种方法的检测结果进行对比分析。结果两种方法测定冻干人用狂犬病疫苗原液疫苗颗粒含量在256~305μg/mL之间,平均值在267~285μg/mL之间,方法间相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)在5.8%~10.2%之间,一致性良好。两种方法测定冻干人用狂犬病疫苗半成品疫苗颗粒含量在149~169μg/mL之间,平均值在152~164μg/mL之间,方法间RSD在0.9%~4.7%之间,一致性良好。结论BCA-SEC标准曲线法实测值与预期值偏离较小,更接近样品真实情况,推荐作为企业参考使用。

关键词：狂犬病疫苗疫苗原液半成品病毒颗粒批间一致性含量分析

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轮状病毒疫苗温度挑战性研究

国际生物制品学杂志 2024年第1期47卷 7-10页

作者：石岩刘晓凡刘军马希强陈刚张丽君兰州生物制品研究所有限责任公司质量保证部兰州730046 兰州生物制品研究所有限责任公司质量检定室兰州730046

目的探究口服轮状病毒活疫苗在高温保存和冻融后的病毒滴度变化趋势.方法选取2022年生产的3批口服轮状病毒活疫苗,于37℃放置0、7、9、11和14 d或-20℃-室温冻融0、1、2、3、4、5次,进行病毒滴度检测;选取2022年生产的5批口服轮状病毒... 详细信息

目的探究口服轮状病毒活疫苗在高温保存和冻融后的病毒滴度变化趋势.方法选取2022年生产的3批口服轮状病毒活疫苗,于37℃放置0、7、9、11和14 d或-20℃-室温冻融0、1、2、3、4、5次,进行病毒滴度检测;选取2022年生产的5批口服轮状病毒活疫苗原液,于37℃放置0、3、5、7、9和11d或-20℃-室温冻融0、1、2、3、4、5次,进行病毒滴度检测.结果口服轮状病毒活疫苗于37℃保存9 d时病毒滴度大于5.5 lgCCID50/ml;口服轮状病毒活疫苗原液于37℃保存9 d时病毒滴度不低于5.5 lgCCID50/ml;口服轮状病毒活疫苗5次冻融,病毒滴度不低于5.8 lgCCID50/ml;口服轮状病毒活疫苗原液5次冻融,病毒滴度不低于6.0 lgCCID50/ml;均符合质量标准.第1次冻融后口服轮状病毒活疫苗滴度明显降低,但不大于1 lg,后续4次反复冻融对滴度未产生明显影响.结论口服轮状病毒活疫苗在37℃可保存9 d,5次冻融后滴度仍符合质量标准.

关键词：轮状病毒疫苗稳定性冻融高温

治疗性单克隆抗体SIBP-A电荷异构体全柱成像毛细管等电聚焦电泳测定方法的建立及验证

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国际生物制品学杂志 2024年第3期47卷 156-163页

作者：张琳陈慧聪蔡丽星蒋晴怡梁红远张坤明卢逸仁沈培玉马雷钧邱建华上海生物制品研究所有限责任公司第一研究室上海200051 上海生物制品研究所有限责任公司质量检定室上海201403

目的建立治疗性单克隆抗体(单抗)SIBP-A电荷异构体全柱成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis, icIEF)的测定方法, 并进行验证。方法针对尿素浓度、两性电解质范围及浓度和聚焦时间对icIEF方... 详细信息

目的建立治疗性单克隆抗体(单抗)SIBP-A电荷异构体全柱成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis, icIEF)的测定方法, 并进行验证。方法针对尿素浓度、两性电解质范围及浓度和聚焦时间对icIEF方法进行条件优化, 并应用优化条件对该单抗电荷异构体进行分析, 验证专属性、稳定性指示性、重复性、中间精密度、线性与范围、准确度、定量限及处理后样品的稳定性。结果优化后icIEF条件:3 mol/L尿素、1% MC胶、3%两性电解质载体Pharmalyte 3-10与Pharmalyte 8-10.5按1∶1混合, 电压1 kV、预聚焦1 min, 电压3 kV、聚焦分离6 min。专属性实验中, 空白组在样品出峰处无明显干扰峰, 对照组正常出峰且电荷异构体正常;稳定性指示性实验中, 可以检测出40 ℃放置7 d的样品正常出峰而且电荷异构体发生显著变化, 与对照样品明显不同;重复性实验中, 酸性峰、主峰及碱性峰相对百分含量的相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)分别为0.48%、0.00%和4.03%, 主峰等电点RSD为0.012%;中间精密度实验中, 酸性峰、主峰及碱性峰相对百分含量的RSD分别为0.89%、0.45%和6.14%, 主峰等电点RSD为0.072%;在蛋白终浓度0.50~1.50 mg/ml范围内具有良好的线性, 线性决定系数为0.996 8, 且回收率在95.03%~104.35%内;该方法的定量限为0.003 0 mg/ml;10 ℃条件下样品酸性峰、主峰、碱性峰相对百分含量的RSD分别为0.56%、0.00%和8.61%, 主峰等电点RSD为0.056%;室温条件下3 h酸性峰电荷异构体开始发生明显变化。结论研究建立的检测方法可以有效检测单抗SIBP-A的电荷异构体及等电点, 专属性、稳定性指示性、重复性、中间精密度、线性与范围、准确度、定量限和10 ℃条件下样品的稳定性均良好, 可用于该抗体的放行检测及稳定性检测。

关键词：治疗性单克隆抗体全柱成像毛细管等电聚焦电泳电荷异构体方法学验证

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56~60周岁固定献血浆者安全性调查分析

中国输血杂志 2024年第7期37卷 812-815页

作者：高阳董科成马名立董琰房东红苏雨蒙周蓉董德梅北京天坛生物制品股份有限公司北京100000 什邡蓉生单采血浆有限公司国药集团兰州生物制药有限公司国药集团上海血液制品有限公司

目的探讨55~60岁固定献血浆者安全性,为我国单采血浆行业保留与招募55~60岁献浆者提供参考。方法 2018—2020年共9家血液制品生产企业55~60岁固定献浆者及当地同龄普通人群为作为研究对象,统计固定献浆者与当地普通人群总蛋白水平、白... 详细信息

目的探讨55~60岁固定献血浆者安全性,为我国单采血浆行业保留与招募55~60岁献浆者提供参考。方法 2018—2020年共9家血液制品生产企业55~60岁固定献浆者及当地同龄普通人群为作为研究对象,统计固定献浆者与当地普通人群总蛋白水平、白球比[血浆白蛋白(ALB)/球蛋白(GLB),A/G]、献浆不良反应并进行回顾性分析。结果 56~60周岁固定献血浆人群和普通人群的总蛋白质水平分别为(61.21±5.62)g/L、(60.04±6.93)g/L;白球比分别为1.610±0.299、1.635±0.330,固定献血浆人群和普通人群的总蛋白质水平、A/G差异均具有统计学意义,固定献浆人群总蛋白水平高于普通人群,但A/G略低于普通人群。2018—2020年期间,108家浆站共采浆23 056 302人次,发生不良反应20 932人次,总发生率为0.09%,无严重不良反应发生。结论 55~60岁固定献血浆者献浆安全可靠,保留该年龄段献浆者可缓解血浆原料的供应压力。

关键词：血浆原料 55~60岁献浆者献浆不良反应年龄

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂免疫大鼠ELISA抗体阳性血清中和抗体活性检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2024年第2期37卷 215-220页

作者：彭炳淮刘景会刘玉林孙中涛孙基伟梁冠桥俞露长春生物制品研究所有限责任公司吉林长春130062

目的建立用于检测重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)免疫大鼠ELISA抗体阳性血清中和抗体活性的方法,并进行验证。方法分别用3、20、100 mg/kg的rhIL-1Ra注射液经皮下免疫S... 详细信息

目的建立用于检测重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)免疫大鼠ELISA抗体阳性血清中和抗体活性的方法,并进行验证。方法分别用3、20、100 mg/kg的rhIL-1Ra注射液经皮下免疫SD大鼠,10只/组,雌雄各半,每天给药2次,间隔至少4 h,连续给药13周,于给药期及恢复期经大鼠颈静脉采血,分离血清,ELISA法检测血清抗体效价,Protein A层析柱纯化经ELISA筛选为rhIL-1Ra抗体阳性的血清样本。以D10G4·1细胞生物学活性试验为基础建立中和抗体活性检测方法,并验证方法的专属性、灵敏度及精密性。采用建立的方法检测ELISA筛选为rhIL-1Ra抗体阳性血清的中和抗体活性。结果随着给药次数的增加,各剂量组大鼠血清抗体滴度逐渐增强,至恢复期时仍有抗体存在,且滴度仍较高。兔抗rhIL-1Ra单抗对rIL-1Ra有明显的中和作用,兔抗rIFN-2b单抗与rIL-1Ra无剂量效应关系;该方法的灵敏度为171.93μg/mL;精密性验证CV均≤20%。ELISA筛选为阳性抗体血清对rhIL-1Ra注射液均可产生中和效应,与ELISA法检测结果相符。结论本研究建立了用于检测rhIL-1Ra免疫大鼠血清中和抗体活性的方法,具有良好的特异性、专属性及较高的灵敏度,可用于rhIL-1Ra重复给药动物血清中和抗体活性的检测。

关键词：重组人白细胞介素-1受体拮抗剂中和抗体 D10G4·1细胞生物学活性试验

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汉坦病毒Vero细胞适应株的筛选及鉴定

中国生物制品学杂志 2024年第7期37卷 779-787页

作者：管亚博邢坤鹏刘晨阳王颖杜翔宇陈娜娜张朔孙宏亮李景良长春生物制品研究所有限责任公司吉林长春130012

目的探讨汉坦病毒(Hantataan virus,HTNV)PS-6株经乳鼠鼠脑传代后在Vero细胞上的适应性,并筛选出适应Vero细胞的高滴度HTNV。方法将HTNV PS-6株在乳鼠鼠脑内连续传代培养后,Vero细胞上连续传10代,观察细胞病变效应(cytopathic effect,... 详细信息

目的探讨汉坦病毒(Hantataan virus,HTNV)PS-6株经乳鼠鼠脑传代后在Vero细胞上的适应性,并筛选出适应Vero细胞的高滴度HTNV。方法将HTNV PS-6株在乳鼠鼠脑内连续传代培养后,Vero细胞上连续传10代,观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),并采用蚀斑法检测病毒感染性滴度,滴度升高后,采用蚀斑克隆纯化筛选单克隆病毒并检测病毒滴度;分别以0.01、0.05、0.1 MOI感染Vero细胞后绘制病毒生长曲线;Reed-Muench法计算病毒LD50;Western blot法鉴定病毒特异性;透射电镜观察病毒大小及结构;与HTNV PS-6株全基因组核苷酸序列及氨基酸序列进行比较分析。将筛选出的Vero细胞适应株V-PS-6经腹腔注射10只BALB/c雌性小鼠,濒死时解剖,取心、肝、脾、肾、脑、肺、小肠、肌肉等组织进行免疫组化分析。结果鼠脑传代毒株对Vero细胞具有较好适应性,初始病毒滴度为1.3 lgPFU/mL,随着传代次数增加,病毒滴度逐渐升高,稳定在7.5~7.9 lgPFU/mL;筛选出的适应株V-PS-6蚀斑边界清晰、圆润、肉眼可见,大小如针尖,LD_(50)为10-^(7.8),在相对分子质量约50 000处可见特异性蛋白条带,大小与适应前HTNV PS-6株相符;V-PS-6病毒直径为80~210 nm,与HTNV PS-6电镜结构未见明显差异,核苷酸序列同源性为99.39%,氨基酸序列同源性为98.85%;V-PS-6病毒明显分布在小鼠肾脏、肝脏、小肠、后腿肌肉及心脏中。结论成功筛选出1株可较好适应Vero细胞的高滴度HTNV株,且具有良好的遗传稳定性,为后续HTNV Vero细胞疫苗的研发及相关机制的研究奠定了基础。

关键词：汉坦病毒 Vero细胞适应性传代蚀斑法病毒滴度

百日咳毒素、丝状血凝素和百日咳黏附素精制抗原纯度的SDS-PAGE检测方法的验证

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微生物学免疫学进展 2024年第04期 23-29页

作者：陈丝丝夏芙蓉於洋何鹏王玲张娜赵芳圆范天一李世慧北京生物制品研究所有限责任公司研究开发室

目的采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)方法检测百日咳毒素(pertussis toxin, PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin, FHA)和百日咳黏附素(pertactin, PRN)精制抗原纯度，并进行验证。方法对样品进行SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色后，使用凝胶成像系统拍照并用Image Lab软件进行分析，获得样品各蛋白条带的光密度值。对建立的方法进行系统适用性、线性、准确度、重复性、中间精密度、灵敏度和耐用性验证。结果对应2套分子量标准蛋白，PT、FHA和PRN精制抗原分别在10.00～50.00μg/mL的低质量浓度范围和50.00～600.00μg/mL的高质量浓度范围内，蛋白浓度和对应条带光密度值之间具有良好的线性关系，相关系数(coefficient of correlation,r)≥0.99。3种精制抗原杂质水平准确度和重复性回收率均在80%～120%,且重复性验证相对标准差(relative standard deviation,RSD)≤10%;抗原水平准确度和重复性回收率均在90%～110%,重复性验证RSD≤10%;灵敏度12.50μg/mL的回收率均在80%～120%,RSD≤10%;中间精密度验证RSD≤10%。结论建立的测定PT、FHA和PRN精制抗原纯度的SDS-PAGE法，其系统适用性、准确度、重复性、中间精密度和灵敏度均良好，可用于以上精制抗原的纯度检测。

关键词：百日咳毒素丝状血凝素百日咳黏附素 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳验证

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