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重症肌无力患者外周血单个核细胞中线粒体自噬和凋亡相关基因表达及其诊断价值

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吉林大学学报（医学版） 2024年第2期50卷 481-488页

作者：蔡东红李青柯铃铃钟慧雅江其龙张涵宋雅芳广州中医药大学科技创新中心广州中医药大学脾胃研究所广东广州510405 广州中医药大学第一附属医院脾胃病科广东广州510405 广东药科大学中药学院广东广州510405

目的:探讨重症肌无力(MG)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中线粒体自噬和凋亡相关基因的表达水平,阐明其对MG诊断的指导价值。方法:收集并提取50名健康对照者(对照组)和50例MG患者(MG组)的PBMCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western b... 详细信息

目的:探讨重症肌无力(MG)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中线粒体自噬和凋亡相关基因的表达水平,阐明其对MG诊断的指导价值。方法:收集并提取50名健康对照者(对照组)和50例MG患者(MG组)的PBMCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测线粒体自噬因子磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)诱导激酶1(PINK1)、E3泛素连接酶PARK2(Parkin)、泛素结合蛋白62(p62)、微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ)及凋亡因子细胞色素C(Cyt-C)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶9(caspase 9)的mRNA以及蛋白表达水平,根据mRNA检测结果设定多个不同临界值,在每个临界值处计算出相应的灵敏度和特异度,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线。结果:与对照组比较,MG组患者PBMCs中的自噬因子PINK1、Parkin和LC3Ⅱ的mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p62 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01);凋亡因子Cyt-C、Bax、caspase 3和caspase 9 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),Cyt-C mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。ROC曲线检测,PINK1、Parkin、p62和LC3Ⅱ的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.9696(95%CI:0.9435~0.9957)、0.9440(95%CI:0.9047~0.9833)、0.8556(95%CI:0.7767~0.9345)及0.9088(95%CI:0.8526~0.9650)(P<0.01),灵敏度分别为92%、92%、78%和84%,特异度分别为88%、82%、92%和82%;而Cyt-C、Bax、Bcl-2、caspase 3和caspase 9的AUC均为1.000(P<0.01),灵敏度和特异度均达到100%。结论:MG患者PBMCs中存在线粒体自噬障碍和凋亡增加现象,其对临床诊断MG具有较高的指导价值。

关键词：重症肌无力线粒体自噬细胞凋亡外周血单个核细胞诊断价值

龙芪降脂方治疗非酒精性脂肪性肝炎伴肝纤维化分子机制

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中国中西医结合杂志 2024年

作者：雍秋红黄超原杨希玲杨喆彦萱郑逸远赵利娜彭冲刘凤斌 1.广州中医药大学第一临床医学院 2.广州中医药大学岭南医学实验研究中心 3.广州中医药大学第二附属医院脾胃病科 4.上海中医药大学附属市中医医院脾胃病科 5.广州中医药大学第一附属医院肝胆病科 6.广州中医药大学第一附属医院白云医院脾胃病科 7.广州中医药大学第一附属医院岭南脾胃病研究所广州中医药大学第一临床医学院广州中医药大学岭南医学实验研究中心广州中医药大学第二附属医院脾胃病科上海中医药大学附属市中医医院脾胃病科广州中医药大学第一附属医院肝胆病科广州中医药大学第一附属医院白云医院脾胃病科广州中医药大学第一附属医院岭南脾胃病研究所

目的观察龙芪降脂方对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）伴肝纤维化的疗效，并基于Toll样受体4(TLR4)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路探讨其分子机制。方法将32只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组：对照组、模型组、低剂量组、... 详细信息

目的观察龙芪降脂方对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）伴肝纤维化的疗效，并基于Toll样受体4(TLR4)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路探讨其分子机制。方法将32只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组：对照组、模型组、低剂量组、高剂量组，每组8只。采用蛋氨酸及胆碱缺乏饲料喂养4周，构建NASH伴肝纤维化动物模型；低剂量组及高剂量组分别给予260、520 g/L的龙芪降脂方中药原液灌胃治疗。实验结束后取材，用生化试剂盒检测各组小鼠血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、葡萄糖（GLU）含量和肝脏中TC含量；用HE、油红O、Masson染色观察各组小鼠肝脏病理情况；用酶联免疫吸附实验检测各组小鼠血清中白介素（IL）-6、IL-1β含量；采用定量实时聚合酶链反应（RT-qPCR）检测各组小鼠肝脏中单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NLRP3 mRNA表达量；用Western Blot检测各组小鼠肝脏中组织金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)、Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）、TLR4、MyD88、磷酸化核因子κB抑制蛋白α/核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα/IκBα)、磷酸化核因子κB/核因子κB(p-NF-κB/NF-κB)、NLRP3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase1)及Caspase1前体（pro-Caspase1）蛋白表达量。结果与对照组比较，模型组小鼠肝脏体积偏小、颜色偏黄、表面颗粒感明显；血清中TC、TG、GLU含量降低（P<0.01）,ALT、AST、IL-1β、IL-6含量升高（P<0.01）；肝脏中炎性细胞浸润、脂质沉积和胶原纤维沉积明显，TC含量升高（P<0.01）,MCP-1、TNF-α、TLR4、MyD88、NLRP3 mRNA表达量及TIMP-1、CollagenⅠ、TLR4、My D88、p-IκBα/IκBα、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3、Caspase1、pro-Caspase1蛋白表达量升高（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较，低、高剂量组小鼠肝脏大小无明显变化，但颜色红润、有光泽；血清中GLU含量升高（P<0.01）,ALT、AST、IL-1β、IL-6含量降低（P<0.05,P<0.01）；肝脏中炎性细胞浸润、脂质沉积和胶原纤维沉积较轻，TC含量降低（P<0.01）,MCP-1、TNF-α、TLR4、My D88、NLRP3 mRNA表达量及TIMP-1、CollagenⅠ、TLR4、My D88、p-IκBα/IκBα、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3、Caspase1、pro-Caspase1蛋白表达量降低（P<0.05,P<0.01）。结论龙芪降脂方能改善NASH伴肝纤维化，其机制与抑制TLR4/NLRP3信号通路有关。

关键词：龙芪降脂方非酒精性脂肪性肝炎肝纤维化 Toll样受体4 NOD样受体热蛋白结构域蛋白3 中药复方

艾可清对药物代谢酶活性及对洛匹那韦与利托那韦的大鼠血浆药代动力学参数的影响

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中药新药与临床药理 2024年第7期35卷 1046-1054页

作者：何晓峰卢元媛陈剑涛符林春沈小玲胡英杰广州中医药大学科技创新中心广东广州510405 广州中医药大学热带医学研究所广东广州510405

目的考察中药复方艾可清对药物代谢酶和抗艾滋病病毒(HIV)药物克力芝组分洛匹那韦(LPV)和利托那韦(RTV)药物代谢动力学的影响。方法将人肝微粒体与混合探针和艾可清共孵育,用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术测定探针的含量变化,计... 详细信息

目的考察中药复方艾可清对药物代谢酶和抗艾滋病病毒(HIV)药物克力芝组分洛匹那韦(LPV)和利托那韦(RTV)药物代谢动力学的影响。方法将人肝微粒体与混合探针和艾可清共孵育,用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术测定探针的含量变化,计算艾可清对肝微粒体中药物代谢酶细胞色素P450不同亚型的半数抑制浓度(IC50),确定艾可清抑制的P450亚型。建立HPLC-MS法同时测定大鼠血浆中LPV和RTV含量;大鼠灌胃艾可清或溶媒,每日1次,连续7 d,末次灌胃艾可清后0.5 h灌胃克力芝,检测LPV和RTV的血药浓度,分析艾可清对其药代动力学参数的影响。结果艾可清甲醇提取物在0~500μg·mL^(-1)浓度范围内,对P450代谢酶表型CYP2D6、CYP2C8、CYP2E1、CYP2C19、CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9和CYP3A4酶活性的IC50值依次为7.7、75.3、144.0、99.5、43.5、104.5、49.3和204.9μg·mL^(-1)。建立了定量分析LPV和RTV的HPLC-MS/MS方法,LPV和RTV分别在30~10000 ng·mL^(-1)和3~1000 ng·mL^(-1)范围呈线性关系,最低定量限分别为30 ng·mL^(-1)和3 ng·mL^(-1),日内、日间精密度均小于5%,LPV和RTV的准确度均在96.3%~109.0%之间,提取回收率均不小于88.7%,基质效应均在93.8%~105.0%之间,血浆样品稳定性较好。与克力芝组比较,艾可清与克力芝联用组LPV的非房室模型参数AUC0-t、AUC0-∞、MRT0-t、t1/2z、tmax、Vz/F、Clz/F、Cmax均无明显影响(P>0.05),但可延长MRT0-∞(P所有药动学参数均无明显影响(P>0.05)。结论艾可清对人肝脏药物代谢酶CYP450中8个亚型有不同程度的抑制作用,其中对CYP2D6的抑制作用最明显;大鼠灌胃人等效剂量艾可清对洛匹那韦和利托那韦的药代动力学参数无明显的影响。

关键词：艾可清细胞色素P450 洛匹那韦利托那韦高效液相色谱-质谱药代动力学大鼠

基于“脾虚邪滞”理论探讨胃解痉多肽表达化生中医病机与微观辨证

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世界科学技术-中医药现代化 2024年第5期26卷 1104-1110页

作者：李新龙李思怡杨鹏辉李秋月潘华峰广州中医药大学科技创新中心广州510006 广州中医药大学脾胃研究所广州510006 深圳市龙华区人民医院深圳518109 广州中医药大学临床药理研究所广州510006

胃癌前病变(Gastric precancerous lesions,GPL)具有发展为胃癌的风险,而胃解痉多肽表达化生(Spasmolytic polypeptide expressing metaplasia,SPEM)是GPL的初始步骤,具有恶性进展为胃癌前病变的风险。目前关于该化生阶段发病机制的探... 详细信息

胃癌前病变(Gastric precancerous lesions,GPL)具有发展为胃癌的风险,而胃解痉多肽表达化生(Spasmolytic polypeptide expressing metaplasia,SPEM)是GPL的初始步骤,具有恶性进展为胃癌前病变的风险。目前关于该化生阶段发病机制的探讨尚不完整,中医药依托扎实的中医理论基础及丰富的中药资源,在防治GPL上具有独特优势。因此,笔者基于“脾虚邪滞”理论,从疾病的病理生理状态、标志物、信号通路三方面进行微观辨证分析,提出以健脾化瘀解毒法为主要疗法,结合文献分析其可行性,以期为SPEM的中医治疗提供新的思路与方法。

关键词：胃解痉多肽表达化生微观辨证胃癌前病变健脾化瘀解毒法

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脾虚证中医诊疗专家共识(2023)

中医杂志 2024年第12期65卷 1300-1308页

作者：中华中医药学会脾胃病分会胡玲唐旭东不详广州中医药大学科技创新中心脾胃研究所中国中医科学院西苑医院脾胃病研究所

中华中医药学会脾胃病分会于2020年11月在北京牵头成立了脾虚证中医诊疗专家共识起草小组。小组成员依据循证医学原理,广泛搜集相关研究资料,参考国内外共识制定方法,先后组织国内脾胃病专家就脾虚证的诊断标准、临床治疗、疗效标准、... 详细信息

中华中医药学会脾胃病分会于2020年11月在北京牵头成立了脾虚证中医诊疗专家共识起草小组。小组成员依据循证医学原理,广泛搜集相关研究资料,参考国内外共识制定方法,先后组织国内脾胃病专家就脾虚证的诊断标准、临床治疗、疗效标准、预防调摄、中医证候现代研究进展等一系列关键问题进行总结讨论,形成《脾虚证中医诊疗专家共识(2023)》初稿。

关键词：中华中医药学会中医诊疗现代研究进展专家共识诊断标准脾虚证脾胃病循证医学原理

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脾虚证中医诊疗专家共识（2023）

中医杂志 2024年第12期 1300-1308页

作者：胡玲唐旭东中华中医药学会脾胃病分会广州中医药大学科技创新中心脾胃研究所中国中医科学院西苑医院脾胃病研究所

中华中医药学会脾胃病分会于2020年11月在北京牵头成立了脾虚证中医诊疗专家共识起草小组。小组成员依据循证医学原理，广泛搜集相关研究资料，参考国内外共识制定方法，先后组织国内脾胃病专家就脾虚证的诊断标准、临床治疗、疗效标准...

中华中医药学会脾胃病分会于2020年11月在北京牵头成立了脾虚证中医诊疗专家共识起草小组。小组成员依据循证医学原理，广泛搜集相关研究资料，参考国内外共识制定方法，先后组织国内脾胃病专家就脾虚证的诊断标准、临床治疗、疗效标准、预防调摄、中医证候现代研究进展等一系列关键问题进行总结讨论，形成《脾虚证中医诊疗专家共识（2023）》初稿。本共识是在《脾虚证中医诊疗专家共识意见（2017）》[1]基础上，

关键词：

基于网络药理学及体内实验探讨射麻止喘液治疗中性粒细胞型哮喘的分子机制

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中药新药与临床药理 2024年第2期35卷 247-256页

作者：连乐燊孟星汝黄秀芳周谨希谢燕小陶海澜蒋紫云刘小虹广州中医药大学东莞医院广东东莞523000 广州中医药大学第一临床医学院广东广州510405 广州中医药大学第一附属医院广东广州510405 广州中医药大学岭南医学研究中心广东广州510405 广州中医药大学第三临床医学院广东广州510370

目的基于网络药理学及体内实验探讨射麻止喘液治疗中性粒细胞型哮喘(NA)的分子机制。方法(1)利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、文献检索及Swiss ADME、Swiss Target Prediction数据库检索、筛选射麻止喘液的活性成分及其作... 详细信息

目的基于网络药理学及体内实验探讨射麻止喘液治疗中性粒细胞型哮喘(NA)的分子机制。方法(1)利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、文献检索及Swiss ADME、Swiss Target Prediction数据库检索、筛选射麻止喘液的活性成分及其作用靶点。利用OMIM、Gene Cards、Dis Ge NET及Drug Bank数据库检索、筛选NA疾病相关靶点。通过微生信平台对射麻止喘液活性成分作用靶点与NA疾病相关靶点取交集,得到射麻止喘液治疗NA的潜在作用靶点(共有靶点)。采用Cytoscape 3.8软件构建“中药-活性成分-潜在作用靶点”网络。通过STRING数据库建立潜在作用靶点蛋白互作(PPI)网络,使用内置Mcode插件分析获得核心靶点。使用Metascape平台对潜在作用靶点进行基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。(2)将BALB/C小鼠适应性喂养1周后,随机分为空白组、NA模型组、射麻止喘液低剂量组(2.5 g·kg^(-1))、射麻止喘液高剂量组(10 g·kg^(-1))、地塞米松对照组(1 mg·kg^(-1));通过腹腔注射致敏剂[鸡卵清白蛋白(OVA)+弗氏完全佐剂(CFA)]并通过雾化吸入激发的方法复制NA小鼠模型,第0、7、14天分别腹腔注射OVA+CFA(20μg OVA+75μg CFA,0.3 m L)致敏,第21~30天采用5%OVA混悬液雾化激发(每次8 m L,每次雾化时间40 min,每天1次);雾化激发前1 h各组灌胃给药,地塞米松对照组腹腔注射给药,每天1次。采用HE染色法观察小鼠肺组织病理变化;ELISA法检测肺泡灌洗液中IL-8含量;RT-q PCR法检测肺组织中NLRP3、CXCR2 m RNA表达水平;免疫组化法检测肺组织中p-m TOR蛋白表达水平。结果(1)共筛选得到射麻止喘液活性成分作用靶点826个,NA疾病相关靶点154个,取交集后得到射麻止喘液治疗NA的51个潜在作用靶点(共有靶点)。通过“中药-活性成分-潜在作用靶点”网络分析得到槲皮素、木犀草素、山柰酚、豆甾醇、柚皮素等关键活性成分。通过对潜在作用靶点的PPI网络分析得到29个核心靶点,包括AKT1、IL6、TNF、EGFR、NLRP3、RELA、MIF、CXCR2、VEGFA等。GO功能富集分析得到882个生物学过程条目、33个细胞组分条目、61个分子功能条目;KEGG通路富集分析得到142条信号通路,主要涉及TNF信号通路、甲型流感信号通路、Toll样受体通路、MAPK信号通路、m TOR信号通路等。(2)动物实验结果:与空白组比较,NA模型组小鼠的气道黏膜损伤明显,结构紊乱,有大量炎性细胞浸润,黏膜充血、水肿,肺泡壁明显增厚,肺泡腔缩小;肺泡灌洗液中的炎症因子IL-8水平明显升高(P<0.05);小鼠肺组织NLRP3、CXCR2 m RNA表达显著上调(P<0.01),p-m TOR蛋白表达水平明显升高。与NA模型组比较,射麻止喘液低、高剂量组小鼠肺组织支气管上皮细胞结构排列可见少许紊乱,气管及血管周围有少量的炎性细胞浸润,支气管黏膜充血水肿明显减轻;小鼠肺组织CXCR2 m RNA表达显著下调(P<0.01),p-m TOR蛋白表达水平明显降低。射麻止喘液高剂量组小鼠肺泡灌洗液中的IL-8水平明显降低(P<0.05);射麻止喘液低剂量组小鼠肺组织NLRP3m RNA表达明显下调(P<0.05)。结论射麻止喘液对NA的治疗作用可能是通过槲皮素、木犀草素、山柰酚等关键活性成分,作用于NLRP3、CXCR2等核心靶点,调控TNF信号通路、MAPK信号通路、Toll样信号通路、m TOR等关键信号通路来实现的。

关键词：射麻止喘液中性粒细胞型哮喘网络药理学 NLRP3 CXCR2 mTOR信号通路小鼠

基于特征图谱及指标成分优化新清毒饮颗粒的制备工艺

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中药新药与临床药理 2024年第2期35卷 263-273页

作者：陆小梦古玉正刘瑞媚林银慧周珊宇何欣欣肖飞张军黄新安广州中医药大学青蒿研究中心广东广州510405 广州中医药大学科技产业园有限公司广东广州510445 广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的建立新清毒饮颗粒(蒲公英、金银花、野菊花等组成)的高效液相色谱(HPLC)特征图谱及菊苣酸、甘草酸的含量测定方法,优选新清毒饮颗粒的制备工艺。方法以新清毒饮特征图谱及菊苣酸、甘草酸保留率为评价指标,通过正交试验优选新清毒饮... 详细信息

目的建立新清毒饮颗粒(蒲公英、金银花、野菊花等组成)的高效液相色谱(HPLC)特征图谱及菊苣酸、甘草酸的含量测定方法,优选新清毒饮颗粒的制备工艺。方法以新清毒饮特征图谱及菊苣酸、甘草酸保留率为评价指标,通过正交试验优选新清毒饮的提取工艺,开展浓缩工艺研究;通过筛选辅料的种类和用量,开展新清毒饮颗粒的成型工艺研究,并开展3批中试研究。结果建立新清毒饮颗粒的特征图谱及菊苣酸、甘草酸含量测定方法,优选的制备工艺为加水8倍量,煎煮3次,每次1 h;80℃下减压浓缩,浸膏加入乳糖和甜菊糖苷适量,一步制粒,分装。中试规模制备的3批新清毒饮颗粒中菊苣酸、甘草酸保留率分别为(54.56±1.63)%、(54.96±1.08)%,成品率为(87.47±0.49)%,质量均一,与同批饮片制得汤剂特征图谱相似度高。结论所优选的制备工艺合理可行、重现性好,可获得与新清毒饮汤剂物质基础相似的颗粒剂。

关键词：新清毒饮颗粒含量测定制备工艺高效液相色谱法特征图谱菊苣酸甘草酸

基于PI3K/AKT通路探讨左归丸改善卵巢衰老大鼠卵巢生殖干细胞干性的机制

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中药新药与临床药理 2024年第10期35卷 1504-1511页

作者：梁蕴仪陈婷婷曾丽华李祖昂李堉成朱玲广州中医药大学/广州中医药大学岭南医学研究中心广东广州510405 中国药科大学江苏南京210009 广州中医药大学第一附属医院广东广州510405

目的基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路探讨左归丸通过缝隙连接蛋白43(Cx43)磷酸化改善卵巢衰老大鼠卵巢生殖干细胞(OSCs)干性的机制。方法将8周龄雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、脱氢表雄酮(DHEA)组、左归丸组,每组6只... 详细信息

目的基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路探讨左归丸通过缝隙连接蛋白43(Cx43)磷酸化改善卵巢衰老大鼠卵巢生殖干细胞(OSCs)干性的机制。方法将8周龄雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、脱氢表雄酮(DHEA)组、左归丸组,每组6只。采用环磷酰胺腹腔注射15 d复制卵巢衰老大鼠模型。模型复制结束后,DHEA组大鼠灌胃DHEA 8.1 mg·kg^(-1),左归丸组大鼠灌胃左归丸1.85 g·kg^(-1),每日1次,连续30 d。采用HE染色法观察大鼠卵巢组织病理变化及各级卵泡计数;ELISA法检测大鼠血清抗缪勒管激素(AMH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E_(2))水平;Western Blot法检测卵巢组织中相关蛋白(PCNA、MVH、Oct4、Cx43、p-Cx43、EGFR、AKT、p-AKT)的表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠体质量明显下降(P0.05);卵巢组织中Oct4、MVH、PCNA、EGFR、p-AKT/AKT、p-Cx43(Ser368)/Cx43、Cx43蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,左归丸组大鼠体质量明显升高(P<0.05),卵巢湿质量、卵巢指数均显著升高(P<0.01),始基卵泡数显著增加(P<0.01);血清E2水平明显升高(P<0.05);卵巢组织中Oct4、MVH、PCNA、EGFR、p-AKT/AKT、p-Cx43(Ser368)/Cx43、Cx43蛋白水平表达均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论左归丸可能通过维持OSCs干性改善卵巢衰老,其作用机制与PI3K/AKT信号通路及缝隙连接蛋白磷酸化相关。

关键词：左归丸卵巢衰老卵巢生殖干细胞 PI3K/AKT信号通路缝隙连接蛋白大鼠