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猪德尔塔冠状病毒N蛋白原核表达及其多克隆抗体制备

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南方农业学报 2024年第6期55卷 1798-1806页

作者：赵梓桥张昆丽张春红翟少伦康欣桐黄淑坚张建峰佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528225 广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/广东省动物疫病野外科学观测研究站广东广州510640

【目的】构建猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)核衣壳(N)蛋白原核表达系统并制备多克隆抗体,为新型疫苗、诊断试剂研发及PDCoV致病机制的深入研究提供基础。【方法】提取PDCoV HeN17株RNA,经RT-PCR扩增,将N基因克隆至p... 详细信息

【目的】构建猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)核衣壳(N)蛋白原核表达系统并制备多克隆抗体,为新型疫苗、诊断试剂研发及PDCoV致病机制的深入研究提供基础。【方法】提取PDCoV HeN17株RNA,经RT-PCR扩增,将N基因克隆至pGEX-6P-1载体构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行IPTG诱导表达。利用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化重组蛋白,采用3C蛋白酶去除标签。以纯化后的N蛋白为免疫原免疫3月龄新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定抗体效价,并通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)和免疫沉淀(IP)试验对其进行鉴定。【结果】成功构建原核表达载体pGEX-6p-1-PDCoV-N,获得的PDCoV-N-GST重组蛋白主要以可溶性形式表达,大小约69 kD,经去除GST标签可获得单一目的蛋白条带,经测定蛋白浓度为12.6 mg/mL,获得的PDCoV-N蛋白能与PDCoV阳性血清反应产生单一特异性条带。制备的兔源抗PDCoV-N多克隆抗体效价达1∶4096000,可特异性识别pCAGGS-Flag-N转染HEK-293T细胞中表达的Flag-N蛋白和PDCoV感染LLC-PK1细胞中表达的PDCoV-N蛋白,且能检测到PDCoV-N真核表达载体pCAGGS-Flag-N转染HEK-293T细胞中表达的PDCoV-N蛋白。【结论】成功构建高效PDCoV-N原核表达系统,获得纯度好、浓度高且免疫原性佳的PDCoV-N蛋白,制备的兔源抗PDCoV-N多克隆抗体效价高,具有较强亲和力和特异性,可用于Western blotting、IFA和IP检测。

关键词：猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) N蛋白原核表达多克隆抗体

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微恙螨属一新种——蜱螨亚纲:恙螨科

昆虫学报 1989年第4期32卷 488-491页

作者：赵善贤梁锦照区意广东省卫生防疫站肇庆地区卫生防疫站

鉴别特征本新种与采自南非德兰士瓦尔大长翼蝠体的M.(M.)armata V.-G.,1965稍接近,但本新种盾板形态不同:前缘弧形内陷,盾后侧角呈耳状突出,PL不在角缘上;AW=PW,ASB>PSB,AL光裸、与AM几乎位于同一水平线上;

关键词：恙螨科小盾微恙螨微恙螨属

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广东省华溪恙螨属一新种(真螨目:恙螨科)

昆虫学报 1989年第2期32卷 245-247页

作者：赵善贤梁锦照广东省卫生防疫站肇庆地区卫生防疫站

本文报道采自广东省黑石顶自然保护区华溪恙螨属一个新种。封华溪恙螨Walehia fenga新种(图1—7) 鉴别特征盾板短宽,PW/SD>0.60;前侧毛与后侧毛间距大于后侧毛水平线至盾后角的垂直距离(PP);感器短小,22×13+7;盾板毛分枝明显;盾板刻... 详细信息

本文报道采自广东省黑石顶自然保护区华溪恙螨属一个新种。封华溪恙螨Walehia fenga新种(图1—7) 鉴别特征盾板短宽,PW/SD>0.60;前侧毛与后侧毛间距大于后侧毛水平线至盾后角的垂直距离(PP);感器短小,22×13+7;盾板毛分枝明显;盾板刻点粗疏;背毛排列4.8……。本新种与太平洋华溪恙螨Walchia pacifica Chen et Hsu,1955极相似,但AP>pp而不是相反或略相等,盾扳短宽(PW/SD=0.57—0.71,平均0.63),感器膨大部分较长;腹毛数目较少。

关键词：华溪恙螨属恙螨科新种

猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的炎症反应及抗炎药物研究进展

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中国畜牧兽医 2024年第8期51卷 3528-3539页

作者：乔常宏陈晶罗琴刘宝玲何振文刘丁语陈翔宇王晓虎王刚白挨泉蔡汝健佛山大学生命科学与工程学院佛山528225 广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广州510640

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的母猪严重繁殖障碍与仔猪呼吸困难的一种全球性疾病。感染PRRSV所引起疾病的严重程度与病毒载量和体内产生的细胞因子有关。PRRSV通过自身编码的结构蛋白和非结构蛋白激活炎症信号通路,导致大量细胞因子、趋化因子释放从而诱导炎症反应,但过度炎症反应特别是细胞因子风暴可能导致严重的组织损伤,导致病情加剧。因此通过抑制PRRSV引起的炎症应答可能是有效预防和控制PRRS的主要策略。目前常用的抗炎药物包括重组干扰素、非甾体抗炎药(NSAID)和类固醇等,传统的中药制剂也被证实对PRRS有一定治疗效果。然而PRRSV感染诱导炎症反应的具体条件、程度和机制以及抗炎药物作用尚未清楚。笔者拟对PRRSV诱导的炎症反应及其作用机制,以及相关抗炎药物的开发应用进行综述,以期为PRRS的预防和控制提供新的思路。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 炎症反应细胞因子抗炎药物

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猪链球菌生物被膜的形成及其耐药机制研究进展

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中国畜牧兽医 2024年第9期51卷 4002-4013页

作者：陈翔宇黄元刘宝玲罗琴陆泳锟何振文刘丁语乔常宏王晓虎王刚白挨泉蔡汝健佛山大学生命科学与工程学院佛山528225 广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广州510640

猪链球菌(Streptococcus suis)是一种能引起猪和人感染,危害较大的人兽共患病病原体。猪链球菌在自然状态下具有形成生物被膜的能力,是其产生耐药性的重要原因之一。目前已知猪链球菌是在感染的黏附、集结和分散3个阶段形成生物被膜,其... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis)是一种能引起猪和人感染,危害较大的人兽共患病病原体。猪链球菌在自然状态下具有形成生物被膜的能力,是其产生耐药性的重要原因之一。目前已知猪链球菌是在感染的黏附、集结和分散3个阶段形成生物被膜,其中毒力因子(荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白和溶血素)起到主要作用,整个形成过程由细菌细胞的信号转导系统进行调控。细菌群体感应(quorum-sensing,QS)系统是细菌胞内重要的信号转导系统,它对细菌生物被膜的形成具有显著的调控作用,并通过调控水平基因转移、复制、生物被膜形成等方式增强细菌耐药性,同时在增加细菌密度等方面发挥重要作用。生物被膜的形成能够增强猪链球菌的耐药性,其耐药机制主要涉及QS系统调控、胞外聚合物的形成、细胞外DNA作用、外排泵作用、生物被膜结构和水平基因转移。明确猪链球菌生物被膜的形成与调控及生物被膜引起耐药的机制,对猪链球菌的预防和治疗具有重要意义。化学消毒剂、高温、紫外线和臭氧均能破坏猪链球菌的生物被膜并杀灭细菌;使用抗生素或抗菌剂等化学合成药物能抑制生物被膜的形成或破坏生物被膜,从而达到杀灭细菌的作用,实现治疗猪链球菌感染的目的。此外,部分中药对猪链球菌的生物被膜有抑制和破坏作用,其活性成分具有抗耐药的特性,具有良好的开发前景。笔者对猪链球菌生物被膜的形成和调控机制及其引起的耐药机制的研究进展进行综述,并对目前的防治策略进行归纳总结,以期为猪链球菌的防控提供新的思路。

关键词：猪链球菌生物被膜调控机制耐药机制药物防治

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缺碘地区补碘前后出生儿童的听力比较分析

卫生研究 2001年第5期30卷 303-304页

作者：刘敏符林学钟文陈启丰杨通韩影广东省卫生防疫站广州510300 龙川县卫生防疫站

用丹麦AS 72型纯音诊断测听器 ,对广东省碘缺乏病重病区—龙川县上坪镇在供碘前 (1984年 ) 11～ 14岁学生进行听力测定 ,并选择非缺碘区—广东省龙川县附城镇学生做对照 ;1984年底病区开始供应5 0mg kg碘盐 ,于供碘盐 15年后 (1999年 ) ... 详细信息

用丹麦AS 72型纯音诊断测听器 ,对广东省碘缺乏病重病区—龙川县上坪镇在供碘前 (1984年 ) 11～ 14岁学生进行听力测定 ,并选择非缺碘区—广东省龙川县附城镇学生做对照 ;1984年底病区开始供应5 0mg kg碘盐 ,于供碘盐 15年后 (1999年 ) ,对供碘 1年后出生的 (现年 11～ 14岁 )儿童进行听力测定。结果表明供碘前 ,缺碘地区学生平均听阈显著高于非缺碘地区 ,表现为双侧低频感觉神经性听力下降 ;缺碘区补碘一年后出生的儿童听力与非缺碘区比较差异无显著性。妊娠期缺碘可使儿童听觉系统发育受到损害 ;缺碘区妇女在妊娠前及妊娠期补碘能使儿童听觉系统发育正常 ;食用 5 0mg kg碘盐已能满足妇女妊娠对碘元素的需要。

关键词：碘缺乏听力补碘儿童

云南省玉溪地区恶性疟原虫对四种抗疟药敏感性的体外测定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1998年第6期16卷 460-462页

作者：范波赵微马信文黄正美温润生杨继青杨忠祥云南省玉溪地区卫生防疫站元江县卫生防疫站

目的：了解云南省玉溪地区恶性疟原虫对抗疟药的敏感性。方法：采用ＷＨＯ标准体外微量法。结果：测定２１例恶性疟患者对氯喹、哌喹、咯萘啶和青蒿琥酯的抗性率分别为８５．７％、６６．７％、３８．１％和５．０％。结论：当地恶性疟... 详细信息

目的：了解云南省玉溪地区恶性疟原虫对抗疟药的敏感性。方法：采用ＷＨＯ标准体外微量法。结果：测定２１例恶性疟患者对氯喹、哌喹、咯萘啶和青蒿琥酯的抗性率分别为８５．７％、６６．７％、３８．１％和５．０％。结论：当地恶性疟原虫对氯喹和哌喹普遍产生了抗性，且抗性呈上升趋势，部分病例对咯萘啶敏感性下降。

关键词：恶性疟原虫药敏试验氯喹哌喹咯萘啶

脂质代谢和糖代谢在PRRSV感染宿主细胞中作用研究进展

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中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1686-1695页

作者：罗琴刘宝玲乔常宏陈翔宇刘丁语王晓虎王刚刘昊蔡汝健广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广州510640 佛山科学技术学院生命科学与工程学院佛山528225

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染可引起母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病及公猪精液质量下降,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV不能自主复制,其生命周期的各个阶段均依赖... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染可引起母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病及公猪精液质量下降,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV不能自主复制,其生命周期的各个阶段均依赖于宿主的代谢系统。宿主细胞也可调节其代谢过程,以防止PRRSV复制和维持其正常生理功能。脂质代谢和糖代谢在PRRSV感染中均扮演了重要角色,PRRSV作为一种囊膜病毒对脂质代谢系统的依赖性较其他代谢系统更强。脂质参与了PRRSV生命周期的各个阶段,包括吸附、进入、复制、组装和释放,此外还与细胞炎症、免疫和凋亡有关。糖代谢也可干扰PRRSV的生命活动,从而促进或抑制PRRSV复制。文章综述了脂质代谢中脂肪酸、胆固醇、磷脂、脂滴和脂筏以及糖代谢中糖酵解和三羧酸循环在PRRSV感染宿主细胞中的作用,以期为阐明PRRSV的致病机制以及疫苗和抗PRRSV药物的研发提供基本理论依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 宿主细胞脂质代谢糖代谢

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乙型肝炎疫苗纳入计划免疫程序的研究

中华流行病学杂志 1992年第1期13卷 1-4页

作者：黄介枚孔繁钧广东省卫生防疫站，广州，510300 佛山市卫生防疫站顺德县卫生防疫站

本文对乙型肝炎疫苗（HBV）纳入计划免疫的儿童免疫程序进行了研究，探索了HBV与现行程序中的其他疫苗的免疫应答性。在顺德县三个乡镇进行了现场试验，对180名新生儿分为三组，按三种免疫程序进行接种，并检测免前、免后血清学抗体。... 详细信息

本文对乙型肝炎疫苗（HBV）纳入计划免疫的儿童免疫程序进行了研究，探索了HBV与现行程序中的其他疫苗的免疫应答性。在顺德县三个乡镇进行了现场试验，对180名新生儿分为三组，按三种免疫程序进行接种，并检测免前、免后血清学抗体。结果各组不同程序的抗-HBs、白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎三价混合疫苗（TOPV）和卡介苗（BCG）抗体的阳转率、几何平均滴度（GMT）均无显著的差别；HBV纳入计划免疫程序后，第3针与麻疹疫苗（MV）同时接种免疫应答良好。表明HBV纳入计划免疫程序是可行的，血清学能达到预期效果。

关键词：儿童免疫应答乙型肝炎疫苗