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一株ILTV田间弱毒株的分离鉴定与生物学特性评价

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一株ILTV田间弱毒株的分离鉴定与生物学特性评价

作者：徐鸣荷河南农业大学

学位级别：硕士

传染性喉气管炎（Infectious laryngotracheitis,ILT）是由传染性喉气管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus,ILTV）引起的一种鸡的急性、高度接触性呼吸道传染病,在全球范围内广泛流行。发病鸡以呼吸困难、咳嗽、咳出带血黏液... 详细信息

传染性喉气管炎（Infectious laryngotracheitis,ILT）是由传染性喉气管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus,ILTV）引起的一种鸡的急性、高度接触性呼吸道传染病,在全球范围内广泛流行。发病鸡以呼吸困难、咳嗽、咳出带血黏液、眼睑肿胀、产蛋量下降为特征。近年来ILT在我国流行严重,给养禽业带来巨大经济损失。ILT的防控目前主要采用弱毒活疫苗对易感鸡进行免疫,我国目前使用的商品化疫苗有鸡胚源活疫苗（CEO）、组织细胞源活疫苗（TCO）及基因工程活载体疫苗。CEO和TCO弱毒活疫苗由强毒株连续传代致弱获得,遗传背景通常不清晰,免疫后副反应大,且疫苗株在鸡群中的连续传代存在毒力返强的风险;利用鸡痘病毒作为载体表达ILTV强毒株的g B抗原基因的活载体疫苗与弱毒活疫苗相比安全性较好,但对ILT的免疫效果不够理想。无论是鸡自然感染还是疫苗免疫,ILTV均会在鸡的中枢神经系统特别是三叉神经节建立终身潜伏感染。当机体受到应激因素刺激时,潜伏的ILTV会被重新激活向外界散毒,从而感染其他易感鸡,这使得ILT的防控与净化难度增大。筛选安全性更好的ILTV疫苗株和开发新型安全高效的ILT疫苗是养禽业的迫切需求。本研究于2022年在河南省一未接种ILT疫苗的蛋鸡场常规送检样品中分离到一株ILTV,并命名为ILTV CH/HN/2022。测定了该分离株的全基因组序列并进行了遗传进化分析,研究了其在体外的复制特性、对易感鸡的致病性,以及其作为弱毒活疫苗的免疫原性和免疫效力。研究结果丰富了我国ILTV的流行病学信息,为我国ILT防控及疫苗株的选择提供了参考。本研究包括以下几方面内容:***分离株的鉴定与遗传进化分析本研究在河南某蛋鸡场采集的咽拭子样品中检测到ILTV阳性,并通过9日龄SPF鸡胚成功分离到一株ILTV,命名为ILTV CH/HN/2022。基于传代细胞系的优势,将分离毒株接种LMH细胞,验证分离毒株能否在LMH上增殖,传到第3代出现明显合胞体病变,且PCR检测为阳性。透射电镜结果显示该分离株可以在LMH上有效增殖。对分离株进行高通量测序,测序结果显示分离株CH/HN/2022的基因组全长为152 218 bp,G+C含量为48%,共编码79个推定的开放阅读框,基因组的结构与已报道的ILTV高度一致。遗传进化分析显示该分离株与美国毒株81658的全基因组核苷酸序列同源性为98.8%;与中国国内已发表的其余15株全基因组核苷酸序列同源性在95.8%-96.5%,在UL区有约3 340 bp的缺失,在末端重复序列（TR）和内部重复序列（IR）有855 bp核苷酸的增加。本研究毒株的分离鉴定丰富了中国ILTV流行病学信息。***分离株CH/HN/2022培养特性与致病性研究为了进一步探究ILTV分离株CH/HN/2022的体外增殖和对SPF易感鸡的致病特性,将分离株在LMH细胞上传代,测定病毒的一步生长曲线。接种12 h后病毒滴度开始上升,108 h滴度达到顶峰104.93 TCID50/100μL。将分离毒株通过单侧点眼、滴喉两种不同途径分别感染4周龄SPF鸡研究其致病性,感染后逐日观察鸡的临床表现,连续观察21 d。结果显示,单侧点眼感染鸡临床不表现任何症状,滴喉途径感染鸡只有1/10鸡在感染后72 h出现轻微的张口呼吸症状,48 h后症状消失;在观察期结束后剖检所有实验鸡,感染鸡的喉头、气管、肺脏均未发现肉眼可见的病变;病理组织学检查发现感染组气管粘膜层增厚,炎性细胞浸润,对照组未发现肉眼可见病变。喉头拭子排毒检测结果显示,两种途径感染鸡在感染后第4 d均有排毒,感染后第8 d通过单侧点眼途径感染有2/10鸡排毒,至第12 d所有感染鸡均不排毒。试验结果显示,ILTV分离株CH/HN/2022是一株弱毒株。***分离株CH/HN/2022作为弱毒疫苗的免疫原性和免疫效力评价在证明ILTV分离株CH/HN/2022是一株弱毒株的基础上,为了评估其作为防控ILT的弱毒疫苗的潜力,本研究评估了CH/HN/2022的免疫原性和免疫效力。对4周龄SPF鸡通过单侧点眼的方式进行免疫,免疫后每周采集血清检测抗体效价。结果显示,ILTV分离株CH/HN/2022可诱导机体产生针对ILTV的特异性抗体。免疫3周后利用ILTV强毒WG株通过滴喉途径攻毒,攻毒剂量为2×104.3EID50,逐日观察各组鸡的临床表现,连续观察14 d。试验结果显示,在整个观察期内,免疫组在攻毒后未表现任何临床症状;未免疫攻毒组均出现呼吸困难、咳出带血黏液等临床症状,并在攻毒后6 d内全部死亡。喉头拭子排毒检测结果显示,免疫攻毒组鸡在攻毒第4 d有3/10鸡排毒,但排毒量

关键词：传染性喉气管炎病毒病毒分离鉴定遗传进化致病性弱毒活疫苗

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诱导换羽的成功要诀

国外畜牧学（猪与禽） 2006年第4期26卷 22-23页

作者：张贤群（译）覃矜（校） Muhammad Yousaf 不详巴基斯坦农业大学养禽系

产蛋母鸡的强制换羽并非开展于所有国家,在有些国家甚至被禁止。然而,产蛋母鸡的强制换羽有利也有弊。以下对此作简要叙述,并提出一些实践方面的建议。

关键词：诱导换羽强制换羽产蛋母鸡

陕西泾阳蒋刘遗址炭化植物遗存及相关问题分析

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考古与文物 2024年第1期 121-128页

作者：田多邵晶裴学松李静波西北大学中国—中亚人类与环境“一带一路”联合实验室西北大学文化遗产研究与保护技术教育部重点实验室陕西省考古研究院美国斯坦福大学东亚语言与文化系美国斯坦福大学考古中心

陕西泾阳蒋刘遗址是一处仰韶晚期聚落遗址。2021年,陕西省考古研究院对该遗址开展了抢救性发掘,出土遗物丰富,遗迹尤以袋状灰坑最为显著。本研究对该遗址植物考古浮选样品进行分类、鉴定和统计,发现炭化农作物主要以粟和黍为主,并有少... 详细信息

陕西泾阳蒋刘遗址是一处仰韶晚期聚落遗址。2021年,陕西省考古研究院对该遗址开展了抢救性发掘,出土遗物丰富,遗迹尤以袋状灰坑最为显著。本研究对该遗址植物考古浮选样品进行分类、鉴定和统计,发现炭化农作物主要以粟和黍为主,并有少量稻米,同时还有适生于湿地和盐碱地的杂草。本文分析了袋状灰坑的功能和埋藏过程,并通过伴生农田杂草遗存种类、环境状况、历史记载等方面讨论了关中地区史前时期稻米种植的可行性和局限性。

关键词：蒋刘遗址植物遗存仰韶晚期泾河流域

蜂密度和寄主卵密度对玉米螟赤眼蜂寄生效能的影响(英文)

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华南农业大学学报 2004年第3期25卷 120-122页

作者： A.U.R SALJOQI 何余容巴基斯坦西北农业大学植物保护系华南农业大学昆虫系广东广州510642

在实验室内以米蛾卵作寄主研究了蜂密度和寄主密度对玉米螟赤眼蜂寄生效能的影响.在第一个试验中,1、2、4和8头1日龄的玉米螟赤眼蜂雌蜂被分别接人400粒米蛾卵上,结果表明,卵的总寄生率在最高蜂密度(8头)时显著高于其他蜂密度,但平均每... 详细信息

在实验室内以米蛾卵作寄主研究了蜂密度和寄主密度对玉米螟赤眼蜂寄生效能的影响.在第一个试验中,1、2、4和8头1日龄的玉米螟赤眼蜂雌蜂被分别接人400粒米蛾卵上,结果表明,卵的总寄生率在最高蜂密度(8头)时显著高于其他蜂密度,但平均每头雌蜂的寄生率却随蜂密度的增加而减少,当蜂密度从1增加到8头时,平均每头雌蜂的寄生率几乎减少了近一半,同时每雌产后代数也随蜂密度的增加而减少,说明蜂密度的增加降低了玉米螟赤眼蜂的寄生效能.另一试验中,50、100、200和400粒米蛾卵上分别接入1头1日龄的赤眼蜂雌蜂,结果表明,随寄主卵密度的增加,卵的总寄生率也显著增加,寄主卵密度每增加1梯度,每雌产后代数平均增加了2倍,由此可以看出,寄主卵密度的增加对玉米螟赤跟蜂的寄生效能有增强作用.

关键词：蜂密度寄主卵密度玉米螟赤眼蜂寄生效能米蛾

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温度对玉米螟赤眼蜂发育的影响(英文)

华南农业大学学报 2004年第4期25卷 43-46页

作者： A.U.R.SALJOQI 何余容巴基斯坦西北农业大学植物保护系华南农业大学昆虫系广东广州510642

在实验室内以米蛾卵作寄主,观察了玉米螟赤眼蜂在5个恒温条件下(17,21,25,29,33℃)的发育羽化情况及成蜂寿命、产卵量和后代性比,实验中光照为14∶10(L∶D),相对湿度控制为75%.结果表明,玉米螟赤眼蜂完成一代所需的发育时间随温度的升... 详细信息

在实验室内以米蛾卵作寄主,观察了玉米螟赤眼蜂在5个恒温条件下(17,21,25,29,33℃)的发育羽化情况及成蜂寿命、产卵量和后代性比,实验中光照为14∶10(L∶D),相对湿度控制为75%.结果表明,玉米螟赤眼蜂完成一代所需的发育时间随温度的升高而减少,在17℃时完成一代需要25 12d,而在33℃时仅需要8 11d;在17～25℃成蜂羽化率最高,33℃时最低,其次是29℃;雌蜂的寿命在17℃时最长为219h,但随温度的升高而缩短,在33℃时仅为19 20h;在21～25℃范围内,雌蜂产卵量达到最高;所设定的5个温度条件下发育的雌蜂,其所产的后代中雌性均超过雄性,后代雌性百分率在17～29℃达到高峰,但在33℃时有所下降.

关键词：温度玉米螟赤眼蜂生长发育

城市污泥腐殖土中活性物质分离及作用机理研究

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东北农业大学学报 2018年第7期49卷 38-47页

作者：丁伟牟鹏举 Muhammad Shahid Khan 东北农业大学农学院哈尔滨150030 白沙瓦农业大学植物保护系巴基斯坦白沙瓦1599107

生活污水处理产生的城市污泥经腐熟后形成腐殖土可作为土壤有机质来源,是生活污水处理后污泥合理循环应用重要方式。采用培养皿法研究污泥腐殖土粗提取物对种子萌发影响,利用硅胶柱分离和红外光谱法鉴定粗提物抑制种子萌发的活性物质并... 详细信息

生活污水处理产生的城市污泥经腐熟后形成腐殖土可作为土壤有机质来源,是生活污水处理后污泥合理循环应用重要方式。采用培养皿法研究污泥腐殖土粗提取物对种子萌发影响,利用硅胶柱分离和红外光谱法鉴定粗提物抑制种子萌发的活性物质并研究其作用机理。结果表明,污泥腐殖土粗提取物浓度增加,水萝卜、小白菜种子萌发率降低,种子萌发受抑制时间延长,玉米幼苗中SOD、POD活性升高。鉴定腐殖土中活性化合物结构为3-羟基苯甲酸,该化合物对水稻种子α-淀粉酶活性具有显著抑制作用,导致水稻种子发芽率显著降低。腐殖土严重抑制种子萌发,分离该腐殖土中活性物质并研究其作用机理,可为污泥再利用提供理论基础。

关键词：城市污泥腐殖土活性物质抗逆酶 α-淀粉酶活性

巴基斯坦西瓦里克道克派珊组豕脊齿象属(长鼻目)新材料（英文）

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古脊椎动物学报 2018年第4期56卷 295-305页

作者： Sayyed Ghyour ABBAS Muhammad Akbar KHAN Muhammad Adeeb BABAR Muhammad HANIF Muhammad AKHTAR 巴基斯坦旁遮普大学动物学系阿布·巴克尔博士化石展示与研究中心托合尔54590 巴基斯坦农业大学动物学、野生动物和渔业系费萨拉巴德38000

褶齿豕脊齿象(Choerolophodon corrugatus)是豕脊齿象属在巴基斯坦西瓦里克群发现的唯一种。其首次发现是在西瓦里克亚群下部的卡米列组(中新世晚期),而后大量见于西瓦里克亚群中段的道克派珊组(中新世晚期至上新世早期)。本次报道的褶... 详细信息

褶齿豕脊齿象(Choerolophodon corrugatus)是豕脊齿象属在巴基斯坦西瓦里克群发现的唯一种。其首次发现是在西瓦里克亚群下部的卡米列组(中新世晚期),而后大量见于西瓦里克亚群中段的道克派珊组(中新世晚期至上新世早期)。本次报道的褶齿豕脊齿象新材料发现于道克派珊模式产地及其邻近区域。发现的材料包括象牙、下颌、上颌碎片以及一些乳前臼齿和臼齿。新材料与欧洲的Ch. pentelici的牙齿特征极其相似,但在头骨和下颌特征上有所区别。

关键词：西瓦里克群道克派珊组中新世上新世豕脊齿象属

分子标记辅助选择在无隐性白羽基因纯系的应用

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养禽与禽病防治 2024年第6期 41-47页

作者：鲁生霞马洁张德祥南京温氏家禽育种有限公司南京211211 广东温氏南方家禽育种有限公司广东云浮527400 华南农业大学广州510642

为了快速剔除2个有色羽纯系中隐性白杂合子,向两所高校送检抗凝血进行分子标记鉴定,研究结果表明:N单位检测青脚麻鸡父系N806共1372只,检出4只隐性白杂合子;H单位检测青脚麻鸡父系N806共1864只,未检出隐性白杂合子;检测三黄鸡父系N214共... 详细信息

为了快速剔除2个有色羽纯系中隐性白杂合子,向两所高校送检抗凝血进行分子标记鉴定,研究结果表明:N单位检测青脚麻鸡父系N806共1372只,检出4只隐性白杂合子;H单位检测青脚麻鸡父系N806共1864只,未检出隐性白杂合子;检测三黄鸡父系N214共1363只,检出12只隐性白杂合子;利用双方鉴定的隐性白杂合子以及公司隐性白N701品系进行杂交试验,试验组N806舌(杂合子Cc)×N701(cc)F1代白羽比例严重偏离50%的理论值;试验组N214(杂合子Cc)×N806(杂合子Cc)F1代未出现白羽雏鸡;44天龄再次对F1代白羽个体进行抽血分子鉴定,试验组N806(杂合子Cc)×N701(cc)F1代中1只白鸡2个单位检测结果不同,从2次检测与表型综合来看H单位白羽分子鉴定准确性更高。从上述结果来看,虽然隐性白和显性白的对应的致因突变已经确认,但是不同检测单位应用的检测方法不同,仍然会存在误判的可能。为了育种选择的准确性,应选择一些重复样本送至少2家检测单位结合杂交实验验证,以确保结果的准确性。

关键词：隐性白杂合子分子标记

植保无人飞机作业参数对田外除草靶标区内外雾滴沉积规律的影响

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中国农机化学报 2021年第8期42卷 74-82页

作者： Fiaz Ahmad 邱白晶董晓娅马靖黄鑫 Shibbir Ahmed Farman Ali Chandio 蔡晨(译) 江苏大学农业工程学院江苏镇江212013 巴哈丁拉齐大学农业科学与技术学院农业工程系巴基斯坦木尔坦60800 信德省农业大学农业工程学院农业动力与机械系巴基斯坦坦杜阿拉亚70060 农业农村部南京农业机械化研究所

雾滴大小、气象条件和施药装备的作业参数对雾滴的覆盖范围、靶标的吸附性能有影响。无人飞机(UAV)是目前有助于高效喷雾的现代施药技术装备。然而作业参数对靶标区和脱靶区的影响依然尚待确定。开展了田间试验并运用沉积扫描软件测定... 详细信息

雾滴大小、气象条件和施药装备的作业参数对雾滴的覆盖范围、靶标的吸附性能有影响。无人飞机(UAV)是目前有助于高效喷雾的现代施药技术装备。然而作业参数对靶标区和脱靶区的影响依然尚待确定。开展了田间试验并运用沉积扫描软件测定了在田外除草中不同飞行高度(2 m和3 m)和飞行速度(2 m/s和3 m/s)下雾滴的沉积量、覆盖密度、覆盖率和雾滴直径。结果表明,当无人飞机在处理T_(1)中以2 m/s速度、2 m高度飞行时,靶标区域平均沉积量最高,为2.29μL/cm^(2),飞行航线中央0点位置的覆盖率达到36.19%。处理T_(1)、T_(2)、T_(3)和T_(4)在飞行航线中央的雾滴谱相对宽度分别为0.70、1.01、1.03、1.05。处理T_(1)体积中值直径(VMD,也即D_(v0.5))最大,为448.75μm;而处理T_(4)的D_(v0.5)最小,为238.95μm。单旋翼无人飞机在脱靶区的沉积量几乎可以忽略不计。本研究为无人飞机运营商、农民和生产企业提供了参考,从而优化航空植保技术在除草上的应用。

关键词：无人机喷雾器航空施药作业参数脱靶区喷雾沉积