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基于Pdx1路径探讨左归丸对妊娠糖尿病模型子鼠胰腺β细胞超微结构及氧化应激的影响

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中草药 2024年第19期55卷 6599-6606页

作者：冯忆孙凯男任晓怡吴玉洁杨敏王永辉山西中医药大学

目的采用链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的妊娠糖尿病（gestational diabetes mellitus,GDM）模型，观察GDM模型大鼠孕期进行左归丸干预后其子代胰腺发育情况，并进一步探讨胰腺十二指肠同源框蛋白1(pancreatic and duodenal ho... 详细信息

目的采用链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的妊娠糖尿病（gestational diabetes mellitus,GDM）模型，观察GDM模型大鼠孕期进行左归丸干预后其子代胰腺发育情况，并进一步探讨胰腺十二指肠同源框蛋白1(pancreatic and duodenal homeobox 1,Pdx1)路径对GDM模型子鼠胰腺β细胞超微结构及氧化应激的影响。方法将孕鼠分为对照组、模型组、地特胰岛素（15 U/kg）组和左归丸低、中、高剂量（0.95、1.89、3.78 g/kg）组，每组6只。除对照组外，在大鼠妊娠第3天（E3d）时ip STZ构建GDM模型，对照组ip等体积柠檬酸钠缓冲液，通过测定空腹血糖判断孕鼠是否造模成功。除对照组和模型组外，其余各组孕鼠在E6d开始给药至分娩前，每日1次。待孕鼠自然分娩，子鼠由母鼠喂养至离乳第21天（B21d），从各组母鼠子代中随机选取1雌1雄子鼠作为对照组、模型组、地特胰岛素组、左归丸低、中、高剂量组，每组12只。在各组子鼠B22d时，采用血糖仪测定空腹血糖（fasting blood glucose,FBG），记录子鼠体质量、体长（测定尾根至鼻尖的距离），处死子鼠，分离血清。采用ELISA法检测空腹胰岛素水平（fasting plasma insulin,FINS）并计算胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR）；采用苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色法观察子鼠胰腺病理结构；在透射电子显微镜下观察子鼠胰腺β细胞超微结构；采用ELISA法检测子鼠血清及胰腺组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malonaldehyde,MDA）、过氧化氢酶（catalase,CAT）水平；采用Western blotting法检测子鼠胰腺组织Pdx1、神经因子3(neurogenin 3,Ngn3)、肌筋膜性纤维肉瘤癌基因同源物A(v-maf avian musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene family protein A,Mafa)的蛋白表达。结果与对照组比较，模型组子鼠体质量增加、体长减少（P<0.01）,FBG、FINS水平以及HOMA-IR升高（P<0.01），胰腺组织病理结构及胰腺β细胞超微结构损伤明显，血清及胰腺组织氧化应激指标（SOD、MDA、CAT）水平降低（P<0.05、0.01），胰腺组织中Pdx1、Ngn3、Mafa蛋白表达量显著降低（P<0.01）。与模型组比较，各给药组体质量减少、体长增加（P<0.01）;FBG、FINS水平以及HOMAIR降低（P<0.05、0.01），血清及胰腺组织氧化应激指标（SOD、MDA、CAT）水平升高（P<0.05、0.01），胰腺组织病理结构及胰腺β细胞超微结构损伤减轻，胰腺发育关键蛋白（Pdx1、Ngn3、Mafa）表达升高（P<0.05、0.01）。结论左归丸能有效改善GDM模型子代胰腺发育，其作用机制可能与抑制氧化应激反应从而保护子鼠胰腺β细胞超微结构有关。

关键词：宫内高糖左归丸子代发育氧化应激超微结构 Pdx1

基于TRPV1探讨黄五甘附膏治疗膝骨关节炎外周炎性痛敏的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第14期30卷 97-106页

作者：姜楚洋王兆南姜洪亮赵子苇赵乐马艳苗李艳彦山西中医药大学山西晋中030619 山西中医药大学附属医院太原030024

目的:观察黄五甘附膏对阳虚寒凝证膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜组织瞬时受体电位锚蛋白1(TRPV1)受体表达、巨噬细胞极化及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路调控作用,探讨其缓解KOA外周炎性痛敏的作用机制。方法:48只雄性SD大鼠随机... 详细信息

目的:观察黄五甘附膏对阳虚寒凝证膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜组织瞬时受体电位锚蛋白1(TRPV1)受体表达、巨噬细胞极化及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路调控作用,探讨其缓解KOA外周炎性痛敏的作用机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄五甘附膏高、中、低剂量组(9.3、4.65、2.325 g·kg^(-1))、塞来昔布组(208.2 mg·kg^(-1)),采用气候箱加游泳2周联合膝关节腔注射碘乙酸钠(MIA)建立阳虚寒凝证KOA大鼠模型,连续给药4周,观察各组大鼠一般情况,记录机械刺激缩足痛阈值(PWT)和关节直径,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)炎性因子表达;苏木素-伊红(HE)染色观察膝关节滑膜组织病理学改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠膝关节滑膜组织TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平;免疫荧光(IF)测量评估M1/M2巨噬细胞极化情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠整体精神状态较差,自主活动减少,体质量偏低,关节直径增加,X射线提示关节边缘骨赘增生,关节面明显粗糙,关节腔间隙明显变窄,大鼠PWT显著降低(P<0.01),大鼠血清IL-1β、TNF-α、CGRP、NGF含量均显著升高(P<0.01),滑膜Krenn评分显著升高(P<0.01),TRPV1、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达显著升高(P<0.01),M1巨噬细胞占比和M1/M2显著升高(P<0.01),M2巨噬细胞占比显著降低(P<0.01);与模型组比较,黄五甘附膏低、中、高剂量体质量有不同程度上升(P<0.05,P<0.01),黄五甘附膏高剂量组和塞来昔布组大鼠膝关节直径减少(P<0.01),黄五甘附膏高、中剂量组PWT恢复较为明显(P<0.05),各给药组大鼠血清IL-1β和CGRP的含量都显著降低(P<0.01),塞来昔布组和黄五甘附膏高剂量组大鼠血清TNF-α含量明显降低(P<0.05),黄五甘附膏中剂量组大鼠血清NGF含量明显降低(P<0.05),黄五甘附膏高剂量组滑膜Krenn评分明显降低(P<0.05),黄五甘附膏各剂量组大鼠滑膜组织中TRPV1和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达都显著下降(P<0.01),塞来昔布组和黄五甘附膏各剂量组滑膜组织中M1巨噬细胞占比均降低(P<0.01),黄五甘附膏高剂量组M2巨噬细胞占比升高(P<0.05),黄五甘附膏中、高剂量M1/M2降低(P<0.05)。结论:黄五甘附膏可通过调控巨噬细胞极化减轻KOA炎症反应,减少炎性疼痛介质释放,同时还降低了TRPV1蛋白表达,其机制可能与p38 MAPK信号通路有关,从而达到改善KOA外周痛敏的效应。

关键词：黄五甘附膏膝骨关节炎瞬时受体电位锚蛋白1(TRPV1) 巨噬细胞极化黄芪桂枝五物汤甘草附子汤

脑震宁颗粒对三重脑震荡模型大鼠额颞叶皮质区线粒体生物合成的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第14期30卷 107-113页

作者：魏楠楠武立雅王恬恬刘骐肇张唯依王永辉高丽赵乐山西中医药大学山西晋中030619

目的:基于线粒体能量代谢,从生物合成角度探究脑震宁颗粒对脑震荡后综合征模型大鼠的记忆功能和神经元的影响。方法:SPF级Wistar大鼠,采用自由落体撞击法构建三重脑震荡模型(MCC),依据模型评价标准将造模成功大鼠分为模型组,吡拉西坦组(... 详细信息

目的:基于线粒体能量代谢,从生物合成角度探究脑震宁颗粒对脑震荡后综合征模型大鼠的记忆功能和神经元的影响。方法:SPF级Wistar大鼠,采用自由落体撞击法构建三重脑震荡模型(MCC),依据模型评价标准将造模成功大鼠分为模型组,吡拉西坦组(0.324 g·kg^(-1)),脑震宁低、中、高剂量组(2.25、4.5、9 g·kg^(-1)),另设正常组,按剂量进行灌胃治疗,正常组和模型组给予等体积生理盐水,每天1次,连续14 d。观察大鼠给药前后的一般状态;采用旷场实验和新物体识别实验检测大鼠的运动和记忆能力;采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠皮层组织神经元的病理改变;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ-共激活因子-1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF-1)、线粒体转录因子(TFAM)的蛋白和mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠精神焦虑狂躁,被毛萎黄脏乱,摄食量减少;旷场实验中模型大鼠的运动总路程、中央格进入次数和直立次数显著降低(P部分细胞形态不规则,胞浆浑浊;吡拉西坦组和脑震宁中剂量组皮层组织PGC-1α、NRF-1和TFAM蛋白表达显著升高(P<0.01),脑震宁低剂量组大鼠皮层组织NRF-1和TFAM蛋白表达显著升高(P<0.01),脑震宁高剂量组大鼠皮层组织PGC-1α和TFAM蛋白表达显著升高(P<0.01);吡拉西坦组和脑震宁各剂量组皮层组织PGC-1α、NRF-1、TFAM mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:脑震宁颗粒可以改善MCC大鼠的运动探索和记忆学习状况,修复神经元损伤,保护神经功能,其作用机制可能与促进大脑皮层神经元的线粒体生物合成有关。

关键词：脑震荡后综合征线粒体能量代谢生物合成脑震宁颗粒皮层

基于孔雀石绿/核酸适配体的免标记荧光法检测中药中的赭曲霉素A

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中国中药杂志 2024年第7期49卷 1818-1825页

作者：杨圆圆邓峥嵘高仕超郭丽敏山西中医药大学山西晋中030619

该文报道了一种基于孔雀石绿/核酸适配体的免标记荧光法检测中药中的赭曲霉素A(OTA)。孔雀石绿本身荧光信号微弱,与赭曲霉素A的核酸适配体作用后,G-四链体结构的核酸适配体为孔雀石绿提供一个保护的微环境,使其荧光信号显著增强。再加入... 详细信息

该文报道了一种基于孔雀石绿/核酸适配体的免标记荧光法检测中药中的赭曲霉素A(OTA)。孔雀石绿本身荧光信号微弱,与赭曲霉素A的核酸适配体作用后,G-四链体结构的核酸适配体为孔雀石绿提供一个保护的微环境,使其荧光信号显著增强。再加入OTA之后,核酸适配体会优先与OTA结合,从而使孔雀石绿游离于核酸适配体之外,其荧光信号随之减弱。基于此,该文以OTA的核酸适配体为识别元件,孔雀石绿为荧光探针,建立了一种基于核酸适配体的荧光法检测中药中的OTA。并对金属离子、核酸适配体和孔雀石绿的浓度等影响实验结果的主要因素进行了进一步的优化。在最佳实验条件下对OTA进行了检测,实验发现,随着OTA浓度的增大,荧光信号逐渐减弱,在20~1000 nmol·L^(-1),OTA浓度与荧光信号比值ΔF/F呈线性相关(ΔF=F_(0)-F,F_(0)为核酸适配体/孔雀石绿的荧光信号,F为OTA/核酸适配体/孔雀石绿的荧光信号),检出限为7.1 nmol·L^(-1),R^(2)=0.995。为考察该方法的特异性,该实验选择了3种与OTA结构相似的物质以及2种可能和OTA共存的真菌毒素进行交叉反应率实验和特异性实验。交叉反应率实验表明这些干扰物不会引起检测体系明显的荧光信号变化,而特异性实验显示了当干扰物与OTA混合后,混合物产生的荧光信号与OTA的荧光信号接近,说明即使与干扰物共存,OTA的检测也不会受到影响,说明方法具有良好的特异性;方法也展现了良好的重复性和稳定性。仅对中药进行简单的离心和稀释,方法即可用于中药葛根、苦参、香加皮中OTA的检测,回收率在91.50%~121.3%。该方法不需要复杂的中药预处理,操作简单,检测成本低,检测时间短,而且方法将核酸适配体应用于中药质量鉴定中,进一步拓展了核酸适配体的应用范围。

关键词：核酸适配体孔雀石绿赭曲霉素A 荧光免标记

基于傅青主“心肾相依”理论治疗女性围绝经期失眠症心肾不交证的临床研究

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北京中医药大学学报 2024年第2期47卷 260-267页

作者：杜彩凤钟佳颖曹牧原王梓炜邢亚丹赵勇山西中医药大学基础医学院晋中030619 山西中医药大学附属医院山西中医药大学护理学院

目的基于傅青主“心肾相依”理论,观察心惊不安夜卧不睡方治疗女性围绝经期失眠症心肾不交证的临床疗效。方法将2021年4月—2022年6月就诊于山西中医药大学附属医院妇产科门诊且符合纳入标准的围绝经期失眠症心肾不交证患者按随机数字... 详细信息

目的基于傅青主“心肾相依”理论,观察心惊不安夜卧不睡方治疗女性围绝经期失眠症心肾不交证的临床疗效。方法将2021年4月—2022年6月就诊于山西中医药大学附属医院妇产科门诊且符合纳入标准的围绝经期失眠症心肾不交证患者按随机数字表法分为试验组(n=39)和对照组(n=39)。试验组患者口服心惊不安夜卧不睡方,对照组患者口服天王补心丹,连续4周。观察2组患者用药前后匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)、改良Kupperman(KI)评分及中医证候积分,监测多导睡眠参数,检测血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、促性腺激素释放激素(GnRH)水平。结果试验组总有效率为91.43%,对照组总有效率为88.89%,差异无统计学意义。与治疗前比较,试验组患者治疗后PSQI、KI评分均下降;睡眠进程参数中睡眠效率上升,睡眠潜伏期、觉醒次数、觉醒时间下降,睡眠结构参数中非快速眼动睡眠2、3期时间延长且占比升高,非快速眼动睡眠1期和快速眼动睡眠期时间缩短且占比下降;E2含量上升,FSH、LH、GnRH含量均下降(均P<0.05)。结论心惊不安夜卧不睡方可明显改善围绝经期失眠症心肾不交证患者睡眠质量、缓解围绝经期相关症状、调节性激素水平,且无明显的不良反应,临床上可作为治疗女性围绝经期失眠症心肾不交证的备选方剂,加以推广应用。

关键词：围绝经期心肾不交证失眠症傅青主心惊不安,夜卧不睡

探讨补阳还五痛风汤抑制PPAR-γ/NF-κB/AGEs/RAGE通路治疗高尿酸血症合并痛风性关节炎

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：曹越姚完美杨涛杨曼贾瑞敏路荣荣封雪刘必旺山西中医药大学

目的：通过网络药理学及分子对接技术探讨补阳还五痛风汤治疗高尿酸血症合并痛风性关节炎的潜在分子生物机制，并通过动物实验初步验证。方法：利用中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)及ETCM数据库获取补阳还五痛风汤中的活性成分以... 详细信息

目的：通过网络药理学及分子对接技术探讨补阳还五痛风汤治疗高尿酸血症合并痛风性关节炎的潜在分子生物机制，并通过动物实验初步验证。方法：利用中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)及ETCM数据库获取补阳还五痛风汤中的活性成分以及靶点；使用DisGeNET和GeneCards数据库获取高血酸尿症及痛风性关节炎相关的疾病靶点，并对药物靶点与疾病靶点取交集获得关键靶点；使用R语言ClusterProfiler包和Python进行基因本体(GO)富集分析和京都基因组百科全书(KEGG)富集分析；利用Cytoscape3.9.1软件绘制药物-关键靶点-功能-通路的调控网络图并针对关键靶点绘制蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络，通过拓扑结构分析获得hub基因；最后运用Auto Dock、PyMOL等软件进行分子对接，探究补阳还五痛风汤对高尿酸血症合并痛风性关节炎可能的治疗机制。动物实验验证，通过建立腹腔注射氧嗪酸钾致高尿酸血症结合改良的Coderre法致痛风性关节炎的复合大鼠模型；通过苏木素-伊红(HE)染色、尿酸测试、酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)等实验，观察补阳还五痛风汤对高尿酸血症合并痛风性关节炎的分子机制及关键靶点的影响。结果：经过筛选和去掉重复值后，最终获得76个活性成分，15个关键靶点；GO富集分析得到补阳还五痛风汤治疗高尿酸血症合并痛风性关节炎的过程中主要与急性炎症反应、星形胶质细胞活化、白细胞介素(IL)-8产生的调节、核受体活性、生长因子受体结合等显著相关；KEGG通路富集分析得到关键靶点基因与IL-17信号通路、高级糖基化末端/晚期糖基化终末产物受体(AGE/RAGE)信号通路、抗炎性等通路显著相关；PPI网络表明白蛋白(ALB)、过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPAR-γ)、IL-6、IL-1β、C反应蛋白(CRP)等为关键蛋白靶点；分子对接结果显示，ALB与β-胡萝卜素结合力最强。生化结果显示，补阳还五痛风汤组血尿酸有所下降；HE染色结果显示，补阳还五痛风汤低、中、高剂量(7.76、15.53、31.05 g·kg·d-1)组均有不同程度缓解，高剂量组缓解最明显；高剂量组滑膜关节纤维组织增生伴炎性细胞浸润及肾组织炎性细胞浸润明显减轻，中、低剂量次之；ALB、PPAR-γ、IL-6、IL-1β、CRP表达均有不同程度下调。结论：补阳还五痛风汤通过调节ALB、PPAR-γ、IL-6、IL-1β、CRP等靶点，通过抑制PPAR-γ/核转录因子-κB(NF-κB)通路，减少AGEs/RAGE介导的炎症，在高尿酸血症合并痛风性关节炎的治疗中发挥抗炎镇痛、活血利尿的作用。

关键词：补阳还五痛风汤高尿酸血症痛风性关节炎网络药理学分子对接

肠道微生态失衡与葡萄糖耐量异常相关性的研究进展

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中国微生态学杂志 2024年第4期36卷 478-482,486页

作者：兰晋杰张海生山西中医药大学山西太原030024 山西中医药大学附属医院

肠道微生态系统由人体内分布的共生菌群及其生存环境组成,是人体内规模最大、结构最复杂的一种微生态系统。微生物为葡萄糖耐量异常(impaired glucose tolerance,IGT)患者提供了多种生化反应线索,并参与多种生理进程。肠道微生态系统通... 详细信息

肠道微生态系统由人体内分布的共生菌群及其生存环境组成,是人体内规模最大、结构最复杂的一种微生态系统。微生物为葡萄糖耐量异常(impaired glucose tolerance,IGT)患者提供了多种生化反应线索,并参与多种生理进程。肠道微生态系统通过改变短链脂肪酸的生成、脂多糖介导的炎症反应和胆汁酸信号的传导等多种途径干预血糖调节机制和胰岛素敏感性。随着肠道微生态治疗策略的不断推出,以运动、微生态制剂、膳食纤维、二肽基肽酶Ⅳ抑制剂和中药为代表的多种疗法在临床中得以应用和推广。本文综述了相关的研究进展成果。可以预见的是,肠道微生态作为新兴的研究领域,有望成为控制IGT发生发展和延缓2型糖尿病进行性加重的又一关键点。

关键词：肠道微生态肠道菌群葡萄糖耐量异常

含不同剂量酸枣仁的敷和汤对特应性皮炎模型小鼠IgE水平及肠道菌群的影响

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中医杂志 2024年第7期65卷 728-736页

作者：青千裕赵子苇姜楚洋赵雅飞李艳彦山西中医药大学山西省晋中市030619 山西中医药大学附属医院

目的探讨含不同剂量酸枣仁的敷和汤治疗特应性皮炎的作用机制。方法48只雌性BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,氯雷他定组,含高、中、低剂量酸枣仁的敷和汤组,每组8只。除正常组外,其余各组均用2'4-二硝基氟苯(DNFB)连续刺激制备特应性... 详细信息

目的探讨含不同剂量酸枣仁的敷和汤治疗特应性皮炎的作用机制。方法48只雌性BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,氯雷他定组,含高、中、低剂量酸枣仁的敷和汤组,每组8只。除正常组外,其余各组均用2'4-二硝基氟苯(DNFB)连续刺激制备特应性皮炎模型。造模后含高、中、低剂量酸枣仁的敷和汤组分别给予敷和汤24、18、15 g/(kg·d)灌胃,氯雷他定组给予氯雷他定干混悬剂0.001 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃,各组均灌胃14天。分别于造模第7、14天和给药第7、14天观察小鼠10 min内搔抓次数和皮损评分;ELISA法检测血清中免疫球蛋白E(IgE)含量;HE染色观察皮肤组织病理形态学改变;对小鼠结肠中粪便进行16S rRNA基因测序检测肠道菌群多样性及丰度变化。结果与正常组比较,造模第7、14天和灌胃第7、14天模型组小鼠10 min内搔抓次数增加且皮损评分升高(P<0.05),灌胃后小鼠表皮角化过度或不全、棘层细胞明显增厚、大量炎性细胞浸润;血清中IgE含量升高(P<0.05),厚壁菌门丰度降低,拟杆菌门、细菌丰度升高,乳杆菌属和普雷沃菌属相对丰度降低,拟杆菌属和颤螺菌属相对丰度升高(P<0.05)。与模型组比较,灌胃第7、14天氯雷他定组和含高、中剂量酸枣仁的敷和汤组小鼠10 min内搔抓次数和皮损评分均降低(P<0.05),血清中IgE含量降低,含中剂量酸枣仁的敷和汤组厚壁菌门丰度升高、拟杆菌门丰度降低,氯雷他定组拟杆菌属丰度降低,含中剂量酸枣仁的敷和汤组拟杆菌属丰度降低、乳杆菌属和普雷沃菌属丰度均升高(P<0.05)。与氯雷他定组比较,灌胃第7、14天含低剂量酸枣仁的敷和汤组小鼠皮损评分升高,含高、低剂量酸枣仁的敷和汤组小鼠搔抓次数增多;灌胃后含低剂量酸枣仁的敷和汤组小鼠IgE含量升高,含中剂量酸枣仁的敷和汤组厚壁菌门升高、拟杆菌门降低,乳杆菌属和普雷沃菌属升高,含高剂量酸枣仁的敷和汤组拟杆菌属升高(P<0.05)。结论含不同剂量酸枣仁的敷和汤能改善特应性皮炎的临床症状,调节肠道菌群的相对丰度纠正菌群的紊乱情况,其中以含中剂量酸枣仁的敷和汤组效果最优,且与氯雷他定组效果相当,降低血清中的IgE炎症反应可能是其作用机制之一。

关键词：特应性皮炎酸枣仁敷和汤 2'4-二硝基氟苯免疫球蛋白E 肠道菌群

基于谷胱甘肽/谷胱甘肽过氧化物酶4轴探讨雷公藤甲素引起肝细胞铁死亡的作用机制

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中草药 2024年第9期55卷 2967-2975页

作者：王伟艳刘珊李会芳常银霞栾智华苏越蕊魏砚明山西中医药大学中药与食品工程学院山西晋中030619 山西中医药大学实验管理中心山西晋中030619

目的观察雷公藤甲素对铁代谢和脂质过氧化的影响,探讨雷公藤甲素引起肝细胞铁死亡的可能机制。方法利用雷公藤甲素处理人正常肝细胞HL7702和C57BL/6J小鼠,或利用铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)和雷公藤甲素共同处理HL7702细胞,CCK-... 详细信息

目的观察雷公藤甲素对铁代谢和脂质过氧化的影响,探讨雷公藤甲素引起肝细胞铁死亡的可能机制。方法利用雷公藤甲素处理人正常肝细胞HL7702和C57BL/6J小鼠,或利用铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)和雷公藤甲素共同处理HL7702细胞,CCK-8法检测细胞存活率;普鲁士蓝染色观察铁沉积;试剂盒检测铁离子、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性;qRT-PCR或Western blotting检测转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1,TFR1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、前列腺素内过氧化物合成酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、长链脂酰辅酶A合成酶4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)的表达。结果雷公藤甲素显著降低细胞存活率(P<0.05),引起铁沉积,升高血清中ALT、AST活性(P<0.05),增加HL7702细胞和小鼠肝组织中铁离子、MDA含量(P<0.05),降低GSH含量、SOD活性和GPX4表达(P<0.05),上调TFR1、PTGS2及ACSL4表达(P<0.05)。Fer-1显著上调细胞存活率和GPX4表达量(P<0.05),显著下调铁离子含量、TFR1、PTGS2及ACSL4表达(P<0.05)。结论雷公藤甲素可能通过GSH/GPX4轴引起铁代谢异常和脂质过氧化,诱导肝细胞铁死亡。

关键词：雷公藤甲素铁死亡肝细胞毒性铁超载脂质过氧化谷胱甘肽/谷胱甘肽过氧化物酶4轴