基于TRPV1探讨黄五甘附膏治疗膝骨关节炎外周炎性痛敏的作用机制

作     者：姜楚洋 王兆南 姜洪亮 赵子苇 赵乐 马艳苗 李艳彦 JIANG Chuyang;WANG Zhaonan;JIANG Hongliang;ZHAO Ziwei;ZHAO Le;MA Yanmiao;LI Yanyan

作者机构：山西中医药大学山西晋中030619 山西中医药大学附属医院太原030024 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2024年第30卷第14期

页      面：97-106页

核心收录：

学科分类：100504[医学-方剂学] 1005[医学-中医学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 100501[医学-中医基础理论] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(82104731) 山西省中医药管理局中医药创新团队建设计划项目(zyytd2024010) 山西省基础研究计划项目(202203021221204) 山西省研究生教育创新项目(2022Y718) 山西中医药大学研究生创业项目(2022CX020) 

主　　题：黄五甘附膏 膝骨关节炎 瞬时受体电位锚蛋白1(TRPV1) 巨噬细胞极化 黄芪桂枝五物汤 甘草附子汤 

摘      要：目的:观察黄五甘附膏对阳虚寒凝证膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜组织瞬时受体电位锚蛋白1(TRPV1)受体表达、巨噬细胞极化及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路调控作用,探讨其缓解KOA外周炎性痛敏的作用机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄五甘附膏高、中、低剂量组(9.3、4.65、2.325 g·kg^(-1))、塞来昔布组(208.2 mg·kg^(-1)),采用气候箱加游泳2周联合膝关节腔注射碘乙酸钠(MIA)建立阳虚寒凝证KOA大鼠模型,连续给药4周,观察各组大鼠一般情况,记录机械刺激缩足痛阈值(PWT)和关节直径,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)炎性因子表达;苏木素-伊红(HE)染色观察膝关节滑膜组织病理学改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠膝关节滑膜组织TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平;免疫荧光(IF)测量评估M1/M2巨噬细胞极化情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠整体精神状态较差,自主活动减少,体质量偏低,关节直径增加,X射线提示关节边缘骨赘增生,关节面明显粗糙,关节腔间隙明显变窄,大鼠PWT显著降低(P0.01),大鼠血清IL-1β、TNF-α、CGRP、NGF含量均显著升高(P0.01),滑膜Krenn评分显著升高(P0.01),TRPV1、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达显著升高(P0.01),M1巨噬细胞占比和M1/M2显著升高(P0.01),M2巨噬细胞占比显著降低(P0.01);与模型组比较,黄五甘附膏低、中、高剂量体质量有不同程度上升(P0.05,P0.01),黄五甘附膏高剂量组和塞来昔布组大鼠膝关节直径减少(P0.01),黄五甘附膏高、中剂量组PWT恢复较为明显(P0.05),各给药组大鼠血清IL-1β和CGRP的含量都显著降低(P0.01),塞来昔布组和黄五甘附膏高剂量组大鼠血清TNF-α含量明显降低(P0.05),黄五甘附膏中剂量组大鼠血清NGF含量明显降低(P0.05),黄五甘附膏高剂量组滑膜Krenn评分明显降低(P0.05),黄五甘附膏各剂量组大鼠滑膜组织中TRPV1和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达都显著下降(P0.01),塞来昔布组和黄五甘附膏各剂量组滑膜组织中M1巨噬细胞占比均降低(P0.01),黄五甘附膏高剂量组M2巨噬细胞占比升高(P0.05),黄五甘附膏中、高剂量M1/M2降低(P0.05)。结论:黄五甘附膏可通过调控巨噬细胞极化减轻KOA炎症反应,减少炎性疼痛介质释放,同时还降低了TRPV1蛋白表达,其机制可能与p38 MAPK信号通路有关,从而达到改善KOA外周痛敏的效应。