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Mettl3通过PI3K/AKT信号通路调控Ang Ⅱ诱导肾脏纤维化的机制研究

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中华心血管病杂志 2024年第7期52卷 814-826页

作者：邓熠王艳何平平李娇刘围围袁近松赵鸿彦刘志江沈长银石蓓遵义医科大学附属医院心血管内科遵义563000

目的:探讨甲基转移酶3(Mettl3)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导周细胞向肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化过程中的作用及相关机制。方法:使用C57BL/6J小鼠,(1)细胞实验中,采用磁珠分选法培养纯化小鼠肾脏周细胞,并予以1×10 6 mmol/L的Ang ... 详细信息

目的:探讨甲基转移酶3(Mettl3)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导周细胞向肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化过程中的作用及相关机制。方法:使用C57BL/6J小鼠,(1)细胞实验中,采用磁珠分选法培养纯化小鼠肾脏周细胞,并予以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化,为Ang Ⅱ组;正常培养的周细胞为对照组。采用免疫荧光染色、蛋白质印迹(Western blot)及实时反转录PCR(RT-qPCR)检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以验证转分化成功。采用斑点印迹、RT-qPCR、Western blot检测N6-甲基腺苷(m6A)修饰水平及相关酶[Mettl3、Mettl14、Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)、肥胖相关蛋白(FTO)、ALKB同源蛋白5(ALKBH5)、YTH结构域家族蛋白(YTHDF)1、YTHDF2、YTHDC1、YTHDC2、YTHDC3]的表达水平。采用慢病毒转染Mettl3 shRNA的方法抑制细胞中的Mettl3表达,为sh-Mettl3组、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组;以转染慢病毒空载体作为阴性对照,为Ang Ⅱ+sh-NC组,观察Ang Ⅱ对周细胞转分化的影响,并检测下游磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白的表达,包括PI3K、AKT(丝氨酸磷酸化位点473)[p-AKT(S473)]、AKT(苏氨酸磷酸化位点308)[p-AKT(T308)]等。加入放线菌素D与各组周细胞共培养以抑制PI3K基因的转录,通过检测不同共培养时间残余PI3K mRNA表达量以计算PI3K mRNA半衰期。在Ang Ⅱ+sh-Mettl3组周细胞中加入AKT激动剂SC79,观察是否可逆转Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的作用。(2)动物实验中,分为假手术组(仅给予0.9%无菌生理盐水)、Ang Ⅱ组(泵入Ang Ⅱ溶液)、sh-Mettl3组(注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液)、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组(泵入Ang Ⅱ溶液+注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液)、Ang Ⅱ+sh-Mettl3+SC79组(Ang Ⅱ+sh-Mettl3组处理基础上注射SC79),每组6只。手术前后采用尾夹法测定血压,术后4周测定血清肌酐、尿素含量及尿液白蛋白含量。28 d后取肾脏组织,采用苏木精-伊红(HE)及Masson三色法对组织切片进行染色,检测肾脏纤维化程度。结果:(1)磁珠分选法可获得原代肾脏周细胞,以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ处理周细胞48 h可成功诱导其向肌成纤维细胞转分化。斑点印迹结果显示,Ang Ⅱ组总RNA的m6A修饰水平高于对照组( P<0.05),RT-qPCR及Western blot结果显示,与对照组相比,Ang Ⅱ组中Mettl3 mRNA及蛋白表达水平上调( P均<0.05)。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组细胞中的Mettl3蛋白表达水平低于Ang Ⅱ组,α-SMA、波形蛋白、肌间线蛋白、成纤维细胞激活蛋白a(FAPa)以及Ⅰ型胶原蛋白的表达水平亦低于Ang Ⅱ组( P均<0.05)。与对照组相比,Ang Ⅱ组的PI3K mRNA表达水平上调,且p-AKT(S473)和p-AKT(T308)蛋白高表达;Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的PI3K mRNA表达水平低于Ang Ⅱ组,p-AKT(S473)和p-AKT(T308)蛋白表达下调( P均<0.05)。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的半衰期短于Ang Ⅱ+sh-NC组(2.34 h比3.42 h)。而Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的改善作用可被SC79逆转。(2)动物实验结果显示,与假手术组比较,Ang Ⅱ组小鼠的血压更高,血清肌酐、尿素及24 h尿蛋白测量值更高,纤维化面积更大( P均<0.05);而Ang Ⅱ+sh-Mettle3组的纤维化面积小于Ang Ⅱ组( P<0.05),但在加入SC79后肾脏纤维化又加重。结论:Mettl3介导的RNA m6A表观遗传调控参与Ang Ⅱ诱导的肾脏周细胞-肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化,Mettl3可能通过影响PI3K的稳定性,进而影响PI3K/AKT信号通路发挥调控作用。

关键词：血管紧张素Ⅱ 周细胞肌成纤维细胞转分化 N6-甲基腺苷甲基转移酶3

miR-133a-3p修饰的间充质干细胞外泌体促进心肌梗死后大鼠心肌修复

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中华心血管病杂志 2024年第1期52卷 72-78页

作者：孙铃朱文武张健赵鹏程朱叶倩张凤祥南京医科大学第一附属医院、江苏省人民医院心血管内科南京210029 徐州市中心医院心血管内科徐州221000

目的探讨miR-133a-3p修饰的人源脐带血间充质干细胞(ucMSC)衍生的外泌体对急性心肌梗死(AMI)后大鼠心肌修复的作用。方法体外扩增培养ucMSC,将携带miR-133a-3p的慢病毒载体及阴性对照载体分别转染至ucMSC,分别提取其分泌的外泌体,命名为... 详细信息

目的探讨miR-133a-3p修饰的人源脐带血间充质干细胞(ucMSC)衍生的外泌体对急性心肌梗死(AMI)后大鼠心肌修复的作用。方法体外扩增培养ucMSC,将携带miR-133a-3p的慢病毒载体及阴性对照载体分别转染至ucMSC,分别提取其分泌的外泌体,命名为miR-133a-3p-Exo及miR-NC-Exo。采用冠状动脉左前降支结扎术构建大鼠AMI模型,分别于梗死区边缘原位注射miR-133a-3p-Exo或miR-NC-Exo进行干预。干预后28 d,采用超声心动图检测大鼠心功能;采用Masson染色检测大鼠梗死后心肌纤维化面积;采用TUNEL染色评估梗死后大鼠心肌凋亡情况;采用免疫荧光染色评估梗死后大鼠血管新生情况。结果与miR-NC-Exo组相比,miR-133a-3p-Exo组在AMI后28 d左心室射血分数较高[(64.2%±8.9%)比(47.4%±9.8%),P血管的数量均较多[CD31:(13.9±2.0)条比(2.9±0.9)条,α-SMA:(11.0±1.6)条比(3.5±0.9)条,P均血管新生,从而改善AMI后大鼠的心功能。

关键词：微RNAs 间充质干细胞外泌体急性心肌梗死心肌修复

心力衰竭患者心理资源损耗与恢复过程的质性研究

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中华护理杂志 2024年第6期59卷 706-712页

作者：孙姝怡孙国珍高敏王洁于甜栖刘沈馨雨汤志杰温高芹南京医科大学护理学院南京市211166 南京医科大学第一附属医院心血管内科

目的探索心力衰竭患者心理资源损耗与恢复过程的特征。方法基于自我损耗理论,采用描述性现象学研究方法,于2022年9月—11月,对南京市某三级甲等综合医院心血管内科16例心力衰竭患者进行半结构式深度访谈,采用Colaizzi七步法对资料进行... 详细信息

目的探索心力衰竭患者心理资源损耗与恢复过程的特征。方法基于自我损耗理论,采用描述性现象学研究方法,于2022年9月—11月,对南京市某三级甲等综合医院心血管内科16例心力衰竭患者进行半结构式深度访谈,采用Colaizzi七步法对资料进行分析、提炼。结果共提炼出急性心理损耗源(角色转换导致心理应激、生理痛苦引发心理资源危机),慢性心理损耗源(躯体症状导致原有行为习惯改变、持续的不适症状令患者备受煎熬、不确定性使患者深陷反刍思维、治疗费用加重经济负担),自我损耗表现(消极思维模式与浅层认知加工、复杂交织的负性情绪、行为执行力弱化),心理资源恢复(激发个人成长,实现自我疗愈;多方资源支持,营造复愈性环境)4个主题,11个亚主题。结论心力衰竭患者病程中存在急、慢性损耗源,可导致多种自我损耗表现,损耗与恢复并存且动态变化。医护人员应密切关注心理损耗源对患者的影响,判断自我损耗的表现及严重程度,及时采取恢复措施,维持患者心理资源平衡,提高自我调节能力。

关键词：自我损耗自我调节心理资源心力衰竭质性研究心理护理

累积液体平衡量对心力衰竭患者容量状态影响的研究

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中华护理杂志 2024年第14期59卷 1691-1698页

作者：王蔚云刘长红孙国珍汤一帆李珍宇苏子雯顾则娟南京医科大学第一附属医院心脏大血管外科南京市210029 南京医科大学第一附属医院心血管内科南京市210029 南京医科大学第一附属医院老年心血管内科南京市210029 南京医科大学第一附属医院手术室南京市210029 南京医科大学第一附属医院护理部南京市210029

目的分析心力衰竭患者入院1~7 d累积液体平衡量与血浆容量升高、淤血症状加重的相关性,探讨累积液体平衡量对预测心力衰竭患者容量负荷过重的应用价值。方法采用便利抽样法,选取江苏省南京市、连云港市以及河南省驻马店市3所三级甲等综... 详细信息

目的分析心力衰竭患者入院1~7 d累积液体平衡量与血浆容量升高、淤血症状加重的相关性,探讨累积液体平衡量对预测心力衰竭患者容量负荷过重的应用价值。方法采用便利抽样法,选取江苏省南京市、连云港市以及河南省驻马店市3所三级甲等综合医院2022年10月至2023年2月住院治疗的235例心力衰竭患者,根据血浆容量和淤血症状,将患者分为血浆容量降低组、血浆容量升高组以及淤血症状减轻组、淤血症状加重组。收集研究对象的一般资料、临床特征及1~7 d累积液体平衡量,比较各组累积液体平衡量的差异。采用Logistic回归分析比较累积液体平衡量对患者血浆容量和淤血症状的影响。采用受试者操作特征曲线分析累积液体平衡量预测血浆容量升高、淤血症状加重的最佳截断值。结果剔除15例提前出院和3例液体出入量记录不准确的患者,共纳入患者217例,累积1 d液体正平衡发生率最低,为65.90%,累积量最少,为(0.235±0.983)L;累积6 d液体正平衡发生率最高,为75.58%,累积量最多,为(2.444±5.445)L。血浆容量升高组累积4~7 d的液体平衡量高于血浆容量降低组,差异具有统计学意义(P<0.05);累积4~7 d的液体平衡量是血浆容量升高的独立影响因素,累积4~7 d的液体平衡量分别达到2.308、3.361、3.518、3.702 L时,可预测血浆容量升高,受试者操作特征曲线下面积分别为0.686、0.721、0.647、0.766。淤血症状加重组累积4~7 d的液体平衡量均高于淤血症状减轻组,差异具有统计学意义(P<0.05);累积4~7 d的液体平衡量是淤血症状加重的独立影响因素,累积4~7 d的液体平衡量分别达到2.574、3.383、4.995、4.235 L时,可预测淤血症状加重,受试者操作特征曲线下面积分别为0.640、0.693、0.654、0.720。结论心力衰竭患者累积液体正平衡发生率高,累积液体平衡量能够较好地预测容量负荷加重的发生,血浆容量增加先于淤血症状的出现。建议临床护理人员密切关注累积液体正平衡3 d以上的心力衰竭患者,当累积液体正平衡量超过2.308 L时,及时采取措施排出过多的液体,避免容量负荷过重的发生。

关键词：心力衰竭容量状态累积液体平衡量血浆容量临床淤血评分护理

尿酸/高密度脂蛋白胆固醇比值与房颤射频消融术后复发的相关性

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安徽医科大学学报 2024年第7期59卷 1269-1274页

作者：王保龙王昌会安徽医科大学第一附属医院心血管内科合肥230022

目的探讨尿酸/高密度脂蛋白胆固醇比值(UHR)与非瓣膜性房颤患者射频消融术后晚期复发的相关性。方法选取2018年1月—2022年1月首次接受经导管心脏射频消融治疗的586例非瓣膜性房颤患者的临床资料,根据UHR值三分位法,把研究人群分为低值... 详细信息

目的探讨尿酸/高密度脂蛋白胆固醇比值(UHR)与非瓣膜性房颤患者射频消融术后晚期复发的相关性。方法选取2018年1月—2022年1月首次接受经导管心脏射频消融治疗的586例非瓣膜性房颤患者的临床资料,根据UHR值三分位法,把研究人群分为低值组(n=196)、中值组(n=195)和高值组(n=195),房颤晚期复发为随访终点事件。比较三组间一般资料和实验室检查指标,采用Kaplan-Meier法估计并绘制生存曲线,采用多因素COX回归分析评价UHR与消融术后房颤复发的独立相关性并进行亚组分析。结果随访时间内共记录了182例(31.1%)房颤患者的晚期复发。Kaplan-Meier生存曲线显示UHR低值组、中值组、高值组三组间窦性心律维持率逐渐降低(Log-rank检验,P<0.001)。在完全校正模型中,与低值组的患者比较,中值组和高值组消融术后房颤晚期复发的HR(95%CI,P)分别为1.56(0.99~2.42,P=0.057)和2.03(1.28~3.23,P=0.003)。亚组分析显示,在年龄≥60岁、体质量指数≥25 kg/m^(2)、持续性房颤、左心房内径≥4.3 cm、高血压病、无心力衰竭及无高脂血症的患者中,观察到UHR与消融术后房颤晚期复发的相关性显著。结论非瓣膜性房颤患者较高的UHR值与射频消融术后房颤晚期复发风险增加独立相关。

关键词：尿酸高密度脂蛋白胆固醇心房颤动射频消融术晚期复发

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肌集钙蛋白2与室性心律失常的研究进展

中华心血管病杂志 2024年第2期52卷 199-204页

作者：陈佳翊武立达王如兴南京医科大学附属无锡人民医院心血管内科无锡214023

室性心律失常是一种常见的心律失常,是导致患者心原性猝死的重要原因。肌集钙蛋白2(Casq2)是Casq家族中的一种,广泛存在于哺乳动物肌肉细胞内质网中。近年来,Casq2通过基因突变和翻译后异常修饰等方式在室性心律失常发生发展中的作用逐... 详细信息

室性心律失常是一种常见的心律失常,是导致患者心原性猝死的重要原因。肌集钙蛋白2(Casq2)是Casq家族中的一种,广泛存在于哺乳动物肌肉细胞内质网中。近年来,Casq2通过基因突变和翻译后异常修饰等方式在室性心律失常发生发展中的作用逐渐为人所知。该文主要综述Casq2的在室性心律失常发生中的作用及机制,为临床室性心律失常的治疗提供潜在新靶点。

关键词：肌集钙蛋白2 兰尼碱受体室性心律失常基因转染

长新冠综合征对心血管系统的影响:临床表现、机制与诊治原则

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中国全科医学 2024年第27期27卷 3325-3330页

作者：钟旻珊孙伟孔祥清南京医科大学第一附属医院心血管内科江苏省南京市210029

新型冠状病毒感染传播在全球造成了巨大的影响。在急性期感染结束后,有相当一部分感染者受到了后遗症的影响,目前暂将这一组涉及症状广泛、异质性强的临床症候群称为长新冠综合征。新型冠状病毒感染急性期相关的心血管并发症因其严重性... 详细信息

新型冠状病毒感染传播在全球造成了巨大的影响。在急性期感染结束后,有相当一部分感染者受到了后遗症的影响,目前暂将这一组涉及症状广泛、异质性强的临床症候群称为长新冠综合征。新型冠状病毒感染急性期相关的心血管并发症因其严重性已受到学界广泛的关注,但急性期感染结束后的心血管受累情况亟需被重视。本文就长新冠综合征心血管系统的常见临床表现、发生机制和诊治原则进行综述,意在提高人们对于长新冠综合征心血管系统并发症的认识,从而更加科学合理地应对和降低疾病带来的危害。

关键词：新型冠状病毒感染长新冠综合征心血管疾病综述

扩张型心肌病患者心内血栓形成危险因素及预测模型研究

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安徽医科大学学报 2024年第4期59卷 708-714页

作者：李军胡泽平朱学涛安徽医科大学第一附属医院心血管内科合肥230022

目的探究扩张型心肌病(DCM)患者心内血栓形成的危险因素,基于此构建列线图预测模型并进行验证及评价。方法该研究纳入诊断为DCM的88例合并心内血栓患者和544例无心内血栓患者,并将研究对象按7∶3比例随机分为训练集和验证集。通过单因... 详细信息

目的探究扩张型心肌病(DCM)患者心内血栓形成的危险因素,基于此构建列线图预测模型并进行验证及评价。方法该研究纳入诊断为DCM的88例合并心内血栓患者和544例无心内血栓患者,并将研究对象按7∶3比例随机分为训练集和验证集。通过单因素及多因素Logistic回归分析筛选出DCM患者心内血栓形成的独立危险因素,借助R软件构建列线图预测模型。应用受试者工作特征曲线(ROC)、Hosmer-Lemeshow拟合优度检验和校准曲线、决策曲线对模型进行验证及评价。结果二元Logistic回归分析显示:年龄、心房颤动(房颤)、左心室舒张末内径(LVEDD)、脑钠肽(BNP)和β受体阻滞剂与DCM患者心内血栓形成独立相关。基于此5项因素构建列线图预测模型并进行验证,结果显示训练集和验证集的ROC曲线下面积分别为0.823(95%CI:0.760~0.887)、0.803(95%CI:0.705~0.901),表明模型具有良好的鉴别能力;校准曲线的Hosmer-Lemeshow检验结果分别为^(χ2)=6.679、P=0.572和^(χ2)=2.588、P=0.958,显示预测结果与实际结果具有良好的一致性;决策曲线显示阈值在0.05~0.92区间内,临床净获益较高。结论基于年龄、房颤、LVEDD、BNP和β受体阻滞剂5项因素构建的列线图预测模型,具有良好的鉴别能力、校准能力和临床获益,能有效指导临床医师进行早期危险因素干预,降低心内血栓发生的风险。

关键词：扩张型心肌病心内血栓列线图危险因素左心室舒张末内径脑钠肽 β受体阻滞剂

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RUNX1在心血管疾病中的研究进展

中国医学前沿杂志(电子版) 2024年 19-26页

作者：徐可张彬张红松田乃亮南京医科大学附属南京医院(南京市第一医院)心血管内科南京雨花医院心血管内科

Runt相关转录因子1 (runt-related transcription factor 1,RUNX1)是一种转录因子,它广泛地参与到生物体细胞的增殖,分化等过程中,既往对它的研究主要集中在造血、肿瘤等方面。近年来,人们越来越关注到它在心血管发育和心血管疾病中的... 详细信息

Runt相关转录因子1 (runt-related transcription factor 1,RUNX1)是一种转录因子,它广泛地参与到生物体细胞的增殖,分化等过程中,既往对它的研究主要集中在造血、肿瘤等方面。近年来,人们越来越关注到它在心血管发育和心血管疾病中的潜在作用。本文将回顾近年来在心血管领域对RUNX1的研究,探讨它可能的作用机制,为今后的研究提供线索。

关键词： RUNX1 心脏重构心血管疾病