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山东省滨州畜牧兽医研究院、山东绿都生物科技有限公司8个项目通过省级鉴定验收

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水禽世界 2012年第1期 42-42页

作者：于智慧山东省滨州畜牧兽医研究院

2011年12月23日、25日，受山东省科技厅委托，滨州市科技局邀请中国农业大学、中国兽医药品监察所、中国农科院、农业部饲料质量监督检验中心、山东农业大学、山东农科院、青岛农业大学、

关键词：山东省滨州市畜牧兽医鉴定验收生物科技研究院中国兽医药品监察所质量监督检验中心

山东省滨州畜牧兽医研究院被纳入2012年度国家科技计划“小型猪疾病模型建立以及小型猪新品系培育”项目组

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山东畜牧兽医 2012年第11期33卷 39-39页

作者：于智慧山东省滨州畜牧兽医研究院

近日,2012年度科研条件领域国家科技计划＂小型猪疾病模型建立以及小型猪新品系培育＂项目工作会议在北京召开。山东省滨州畜牧兽医研究院与广西大学、贵阳中医学院、解放军总医院、军事医学科学院、北京大学等高校及科研单位作为项目... 详细信息

近日,2012年度科研条件领域国家科技计划＂小型猪疾病模型建立以及小型猪新品系培育＂项目工作会议在北京召开。山东省滨州畜牧兽医研究院与广西大学、贵阳中医学院、解放军总医院、军事医学科学院、北京大学等高校及科研单位作为项目组成单位参加项目工作会议。

关键词：国家科技计划品系培育疾病模型畜牧兽医小型猪研究院山东省滨州

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猪增生性肠炎实验室诊断方法研究进展

养猪 2022年第6期 121-128页

作者：庄金秋梅建国姚春阳张颖李峰山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

猪增生性肠炎(PPE)是由胞内劳森氏菌(LI)感染引起的一种以回肠和结肠隐窝内未成熟的肠细胞发生腺瘤样增生为特征的肠道传染病。PPE常引起猪只生长发育阻滞,饲料报酬率严重降低。该病已在全球范围内猪场流行,且其发病率呈上升趋势,给养... 详细信息

猪增生性肠炎(PPE)是由胞内劳森氏菌(LI)感染引起的一种以回肠和结肠隐窝内未成熟的肠细胞发生腺瘤样增生为特征的肠道传染病。PPE常引起猪只生长发育阻滞,饲料报酬率严重降低。该病已在全球范围内猪场流行,且其发病率呈上升趋势,给养猪业造成了严重的危害和巨大的经济损失,是影响世界养猪业发展的重要疾病之一。目前国内对该病的研究比较薄弱,应引起足够的重视。文章从组织病理学、细菌分离与鉴定、血清免疫学和分子生物学等方面综述了LI的最新诊断方法研究进展,分析了各种方法的优缺点与实用性,以期为LI感染的鉴定和PPE的有效防控提供参考。

关键词：猪增生性肠炎诊断研究进展

猪用疫苗中牛病毒性腹泻病毒和非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2023年

作者：于新友李天芝张松林沈志强山东绿都生物科技有限公司山东省滨州畜牧兽医研究院

目的建立同时检测猪用疫苗中牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）和非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）2种病原的双重荧光PCR方法，并进行验证及初步应用。方法根据NCBI中收录的BVDV5’UTR和ASFV VP7... 详细信息

目的建立同时检测猪用疫苗中牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）和非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）2种病原的双重荧光PCR方法，并进行验证及初步应用。方法根据NCBI中收录的BVDV5’UTR和ASFV VP72基因序列，分别设计1对特异性引物和1条TaqMan探针，建立一种能同时检测BVDV和ASFV的双重荧光PCR方法。对建立的方法进行灵敏度、特异性和精密性验证。采用建立的方法分别检测猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）活疫苗和猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）活疫苗（76批次）以及添加BVDV和重组质粒pMD-VP72的猪PRV活疫苗（各5瓶）中的BVDV和ASFV，并按照《中华人民共和国兽药典》三部（2020版）和中华人民共和国农业农村部公告第172号规定的方法分别对BVDV和ASFV进行复核检测。结果建立的双重荧光PCR法最低可检测浓度为4.2拷贝/μL的BVDV重组质粒和浓度为8.7拷贝/μL的ASFV重组质粒；不与其他常见病原体发生交叉反应；重复性和试验间精密性检测的变异系数（CV）均不高于2%。结论本实验建立的双重荧光PCR方法灵敏度高，特异性强，精密性好，可用于猪用疫苗中外源病毒的快速检测及猪用疫苗等生物制品的质量控制。

关键词：牛病毒性腹泻病毒非洲猪瘟病毒荧光PCR TaqMan探针

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同方期刊数据库

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非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测方法的建立

中国兽医科学 2022年第6期52卷 698-703页

作者：于新友李天芝肖跃强曲光刚沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600

为建立快速、敏感、特异的非洲猪瘟病毒(ASFV)双重荧光PCR检测方法,本研究根据NCBI中登录的ASFV P72基因序列,设计了1对特异性引物和2条探针,通过优化反应条件,建立了ASFV双重荧光PCR检测方法。结果显示,该方法特异性好,不与其他常见猪... 详细信息

为建立快速、敏感、特异的非洲猪瘟病毒(ASFV)双重荧光PCR检测方法,本研究根据NCBI中登录的ASFV P72基因序列,设计了1对特异性引物和2条探针,通过优化反应条件,建立了ASFV双重荧光PCR检测方法。结果显示,该方法特异性好,不与其他常见猪病病原体发生交叉反应,FAM和HEX荧光通道对质粒标准品的最低检测限度均为9.5 copies/μL。上述结果表明,本研究建立的ASFV双重荧光PCR检测方法可对ASFV进行快速诊断,这为该病的防控工作奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒双重荧光PCR 检测

PKR基因表达高效阻断Marc-145细胞系建立及其对PRRSV增殖的影响

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中国兽医学报 2022年第8期42卷 1535-1540页

作者：肖跃强杨慧于雪王文秀孙培姣魏凤唐娜沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600

研究猪繁殖与呼吸障碍综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)在Marc-145细胞蛋白激酶R(interferon-induced,double-stranded RNA-activated kinase,PKR)下调表达状态下的感染特性。以Macr-145细胞PKR基因序列设计3个shRNA,并设阳性对照,合成后插入pSilencer^(TM)2.1-U6载体构建重组质粒,与Macr-145细胞PKR+EGFP标签融合表达的重组质粒共转染HEK293细胞,以筛选能下调表达PKR的shRNA,并将该shRNA重组质粒转染Marc-145细胞,潮霉素B抗性筛选并克隆纯化获得PKR下调表达的细胞系,感染重组病毒PRRSV XZ06a-EGFP,通过检测病毒结构蛋白M与EGFP表达、观察细胞病变等,研究此状态下感染特性。结果显示筛选获得致使PKR下调表达的shRNA,以及稳定表达shRNA、PKR表达降低90%以上的Marc-145细胞系,重组病毒感染后48h,M蛋白与EGFP表达均受到抑制,且与对照相比,感染后72~96 h,未观察到典型的细胞病变效应,说明在PKR表达受到抑制时,病毒增殖受到明显抑制。本研究通过建立PKR下调表达细胞系与PRRSV感染试验,初步阐明PKR在PRRSV增殖时所发挥的作用,为进一步开展PRRSV与细胞抗病毒固有免疫互作机制研究莫定了基础。

关键词： Marc-145细胞 PKR下调表达shRNA PRRSV

PCV2感染对猪淋巴细胞NF-κB信号通路及炎性细胞因子表达的动态影响

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中国兽医学报 2022年第6期42卷 1115-1121页

作者：董林王艳萍唐娜徐倩倩苗立中王金良沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600

研究PCV2感染猪淋巴细胞对核因子NF-κB信号通路的影响,探索其在NF-κB信号通路中调控炎性细胞因子生成作用机制。选取10头28日龄PCV2抗原、抗体双阴性仔猪,无菌采集、分离脾淋巴细胞,制成单细胞悬液,分PCV2感染组和对照组进行体外培养... 详细信息

研究PCV2感染猪淋巴细胞对核因子NF-κB信号通路的影响,探索其在NF-κB信号通路中调控炎性细胞因子生成作用机制。选取10头28日龄PCV2抗原、抗体双阴性仔猪,无菌采集、分离脾淋巴细胞,制成单细胞悬液,分PCV2感染组和对照组进行体外培养。感染组PCV2病毒添加剂量250μL/100 mL细胞悬液,对照组加入同体积细胞培养液,培养后0,6,12,24,48 h收集淋巴细胞和上清液。共聚焦电镜检测NF-κB核移位,Western blot检测NF-κB/P65核蛋白、磷酸化抑制性κBα蛋白含量,EMSA检测NF-κB与DNA的结合率,ELISA试剂盒检测上清液中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、IL-17和TGF-β1的含量。结果显示,NF-κB/P65蛋白在淋巴细胞核中移位程度随着PCV2感染时间增加而增强,6 h后试验组显著高于对照组(P0.05)。淋巴细胞质中p-IκBα蛋白表达在PCV2感染后24 h达到峰值,且在整个检测期间相对对照组差异极显著(P0.05),24 h有所升高,48 h感染组IL-1β和IL-6含量显著高于对照组(P<0.05)。IL-17和TNF-α随着PCV2感染时间延长含量不断增多,6 h显著高于对照组(P<0.05),24 h达到峰值,48 h极显著高于对照组(P<0.01)。IL-10含量呈现明显的先升高后降低的趋势,PCV2感染组6 h开始升高,12 h显著高于对照组(P<0.05),24 h开始降低,48 h与对照组基本一致。TGF-β1含量呈现先降低后升高的趋势,感染组6~12 h含量显著低于对照组(P<0.05),24~48 h明显升高。结果表明,PCV2通过磷酸化降解途径显著激活淋巴细胞中NF-κB信号通路,使其核移位和DNA结合率显著增强,调控炎性细胞因子的表达。通过IL-10和TGF-β1的升高或降低调控机体在感染早期表现免疫抑制,后期出现全身炎症反应的病理特征,并通过TNF-α和IL-17的高表达加重机体全身炎症反应综合征。

关键词： PCV2 淋巴细胞 NF-κB 信号通路细胞因子

滨州畜牧兽医研究院被纳入山东省现代农业产业技术体系

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水禽世界 2011年第4期 20-20页

作者：于智慧山东省滨州畜牧兽医研究院

近日,山东省现代农业产业技术体系生猪产业创新团队建设启动会在青岛农业大学召开。从大会获悉滨州畜牧兽医研究院入选生猪产业体系综合试验站。近年来,该院结合实际,

关键词：产业技术现代农业畜牧兽医山东省研究院滨州生猪产业农业大学

PKR基因表达高效阻断MarcG145细胞系建立及其对PRRSV增殖的影响

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中国兽医学报 2022年

作者：肖跃强杨慧于雪王文秀孙培姣魏凤唐娜沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东绿都生物科技有限公司

研究猪繁殖与呼吸障碍综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）在Marc-145细胞蛋白激酶R（interferon-induced,double-stranded RNA-activated kinase,PKR）下调表达状态下的感染特性。以Macr-145细胞PKR基因序列设计3个shRNA,并设阳性对照,合成后插入pSilencer;2.1-U6载体构建重组质粒,然后与Macr-145细胞PKR+EGFP标签融合表达的重组质粒共转染HEK293细胞,以筛选能下调表达PKR的shRNA,并将该shRNA重组质粒转染Marc-145细胞,潮霉素B抗性筛选并克隆纯化获得PKR下调表达的细胞系,感染重组病毒PRRSV XZ06a-EGFP,通过检测病毒结构蛋白M与EGFP表达、观察细胞病变等,研究此状态下感染特性。筛选获得致使PKR下调表达的shRNA,以及稳定表达shRNA、PKR表达降低90%以上的Marc-145细胞系,重组病毒感染后48 h,M蛋白与EGFP表达均受到抑制,且与对照相比,感染后72～96 h,未观察到典型的CPE,说明在PKR表达受到抑制时,病毒增殖受到明显抑制。本研究通过建立PKR下调表达细胞系与PRRSV感染试验,初步阐明PKR在PRRSV增殖时所发挥的作用,为进一步开展PRRSV与细胞抗病毒固有免疫互作机制研究奠定了基础。

关键词：