PKR基因表达高效阻断MarcG145细胞系建立及其对PRRSV增殖的影响

作     者：肖跃强 杨慧 于雪 王文秀 孙培姣 魏凤 唐娜 沈志强 

作者机构：山东省滨州畜牧兽医研究院 山东绿都生物科技有限公司 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2022年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：山东省自然科学基金资助项目(ZR2014CM047) 山东省重大科技创新工程资助项目(2019JZZY010720) 山东省外专双百计划资助项目(WST2018014) 

摘      要：研究猪繁殖与呼吸障碍综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）在Marc-145细胞蛋白激酶R（interferon-induced,double-stranded RNA-activated kinase,PKR）下调表达状态下的感染特性。以Macr-145细胞PKR基因序列设计3个shRNA,并设阳性对照,合成后插入pSilencer;2.1-U6载体构建重组质粒,然后与Macr-145细胞PKR+EGFP标签融合表达的重组质粒共转染HEK293细胞,以筛选能下调表达PKR的shRNA,并将该shRNA重组质粒转染Marc-145细胞,潮霉素B抗性筛选并克隆纯化获得PKR下调表达的细胞系,感染重组病毒PRRSV XZ06a-EGFP,通过检测病毒结构蛋白M与EGFP表达、观察细胞病变等,研究此状态下感染特性。筛选获得致使PKR下调表达的shRNA,以及稳定表达shRNA、PKR表达降低90%以上的Marc-145细胞系,重组病毒感染后48 h,M蛋白与EGFP表达均受到抑制,且与对照相比,感染后72～96 h,未观察到典型的CPE,说明在PKR表达受到抑制时,病毒增殖受到明显抑制。本研究通过建立PKR下调表达细胞系与PRRSV感染试验,初步阐明PKR在PRRSV增殖时所发挥的作用,为进一步开展PRRSV与细胞抗病毒固有免疫互作机制研究奠定了基础。