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基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS法分析曼地亚红豆杉炮制前后差异性化学成分

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中华中医药学刊 2024年

作者：李雅静王胜超张振凌朱建光院军吴亚宁郭幸张帅河南中医药大学药学院河南省中药特色炮制技术工程研究中心呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心河南省中药饮片炮制中医药重点实验室豫药全产业链研发河南省协同创新中心

目的：为探究曼地亚红豆杉炮制前后差异性化学成分。方法：采用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱高分辨质谱法（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS）对曼地亚红豆杉中化学成分进行鉴定，根据高分辨质谱精确分子量及碎片离子信息、对照品、文... 详细信息

目的：为探究曼地亚红豆杉炮制前后差异性化学成分。方法：采用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱高分辨质谱法（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS）对曼地亚红豆杉中化学成分进行鉴定，根据高分辨质谱精确分子量及碎片离子信息、对照品、文献、在线数据库等对化学成分进行鉴定，并以炮制前后各成分的离子峰面积比作为炮制前后的变化指数进行对比；利用SIMCA软件建立曼地亚红豆杉不同炮制品的主成分分析(principal component analysis， PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis， OPLS-DA)模型，获得PCA图、OPLS-DA图和变量重要性投影(variable importance in the projection， VIP)值，筛选曼地亚红豆杉炮制前后的差异性成分。结果：共鉴定出74个成分，曼地亚红豆杉生品74个成分、酒炙品70个成分、酒浸品70个成分、酒洗品71个成分、酒蒸品71个成分、醋浸品71个成分、醋炒品71个成分、醋蒸品71个成分、蜜炙品72个成分、姜炙品70个成分。其中，18个成分通过与对照品比对鉴定。经PCA，发现不同炮制方法对曼地亚红豆杉的化学成分具有明显的差异，OPLS-DA筛选出VIP值>1的38个化学成分作为不同炮制方法的主要差异性成分。结论：该方法快速准确，可用于测定曼地亚红豆杉炮制前后的化学成分差异，通过比较化学成分差异可为临床疗效研究提供重要参考。

关键词：曼地亚红豆杉炮制 UHPLC-Q-Orbitrap HRMS 化学成分多元统计分析

当归不同药用部位的本草考证、化学成分、药理作用研究概况

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中华中医药学刊 2024年第10期42卷 127-134页

作者：魏江霞李越峰杨秀娟李硕杨志军段国建郭晶晶甘肃中医药大学甘肃兰州730000 西北中藏药省部共建协同创新中心甘肃兰州730000

当归具有良好的药用价值和重要的生物活性,目前国内外就其化学成分、药理活性、作用机制及临床应用等方面开展了广泛研究。当归入药自古就有全归、归头、归身、归尾之分,且功效各有侧重,即“头止血、身养血、尾活血、归和血”。现代研... 详细信息

当归具有良好的药用价值和重要的生物活性,目前国内外就其化学成分、药理活性、作用机制及临床应用等方面开展了广泛研究。当归入药自古就有全归、归头、归身、归尾之分,且功效各有侧重,即“头止血、身养血、尾活血、归和血”。现代研究也从化学成分、药理活性、作用机制等方面揭示了这一理论的科学内涵。就当归不同药用部位的本草考证、化学成分、药理活性等方面的研究展开综述,以期为开展当归不同药用部位的深入研究提供参考和依据。

关键词：当归不同药用部位本草考证化学成分药理活性

月见草丙酮提取物对脑缺血再灌注损伤的干预作用

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中药药理与临床 2024年

作者：张妍袁培培陈祎郑亚娟李赛菲赵李蕊郑晓珂冯卫生河南中医药大学河南省中药开发工程技术研究中心呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心

目的：研究月见草提取物对脑缺血再灌注损伤的干预作用，为月见草进一步开发利用提供理论依据。方法：将雄性SD大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、月见草提取物0.088、0.175 g/kg组和阳性药尼莫地平组(0.01 g/kg)，每组10只。采用... 详细信息

目的：研究月见草提取物对脑缺血再灌注损伤的干预作用，为月见草进一步开发利用提供理论依据。方法：将雄性SD大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、月见草提取物0.088、0.175 g/kg组和阳性药尼莫地平组(0.01 g/kg)，每组10只。采用动脉闭塞/再灌注模型(Middle cerebral artery occlusion/reperfusion， MCAO/R)建立脑缺血再灌注损伤体内实验模型，随后采用Longa 5评分法进行神经功能评分；2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评价脑梗死体积；苏木精-伊红(HE)染色观察大脑皮层神经细胞损伤；尼氏(Nissl)染色观察脑组织神经元损伤情况；黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分别测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)水平；紫外分光光度法和酶标法分别测定血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和过氧化氢酶(CAT)活力；流式细胞术检测脑细胞活性氧(ROS)和凋亡水平。结果：体内实验结果显示，与假手术对照组相比，模型对照组神经功能评分、大脑系数、脑梗死范围、MDA水平、ROS及凋亡水平显著升高(P<0.01)；SOD、GSH-Px和CAT活力显著降低(P<0.01)；大脑皮层细胞形态以及海马CA1区神经元细胞出现损伤；与模型对照组相比，月见草提取物给药组神经功能评分、大脑系数、脑梗死范围、MDA水平、ROS及凋亡水平显著降低(P<0.01)；SOD、GSH-Px和CAT活力显著升高(P<0.05或P<0.01)；大脑皮层细胞形态以及海马CA1区神经元细胞损伤显著改善。结论：月见草提取物通过改善氧化应激、降低细胞凋亡水平，保护神经功能，发挥对脑缺血再灌注损伤的干预作用。

关键词：月见草提取物脑缺血再灌注损伤神经保护氧化应激凋亡

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DNA甲基化测序技术研究进展

生物技术通报 2024年第5期40卷 58-65页

作者：袁明波叶国华杨丹宋冬雪山东中医药高等专科学校中药系烟台264199 山东省高等学校中药生产与质量控制新技术研发中心烟台264199 黄河流域道地药材产业高质量发展协同创新中心烟台264199

DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰,在动植物生长发育、疾病发生、基因表达调控等方面发挥着关键作用。临床上,DNA甲基化肿瘤标志物可以作为肿瘤的诊断、预后和治疗的生物标志物。DNA甲基化的准确检测对于阐明生物生长发育、疾病发生... 详细信息

DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰,在动植物生长发育、疾病发生、基因表达调控等方面发挥着关键作用。临床上,DNA甲基化肿瘤标志物可以作为肿瘤的诊断、预后和治疗的生物标志物。DNA甲基化的准确检测对于阐明生物生长发育、疾病发生等生命机理具有重要意义。DNA甲基化测序技术是研究DNA甲基化的有力工具,被广泛应用于DNA甲基化在基因组上的定位。近年来,为了更好地检测DNA甲基化位点信息,科学家提出了一系列DNA甲基化高通量测序技术方法,提高了测序检测灵敏度,降低了测序成本和实验花费,显著推动了表观基因组学的发展。本文综述了一系列DNA甲基化测序技术方法,重点介绍了WGBS、TAPS、EM-seq三种测序技术的技术原理及其应用场景,并介绍了在单细胞水平上定位DNA甲基化的测序方法,最后展望其未来发展的方向。

关键词： DNA甲基化 WGBS TAPS EM-seq 单细胞多组学

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文冠果的现代研究进展及质量标志物预测分析

中国新药杂志 2024年第13期33卷 1339-1349页

作者：张娟娟段明宇孙悦阳杨秀娟王明伟李硕王智勇郑贵森甘肃中医药大学兰州730000 西北中藏药省部共建协同创新中心兰州730000 陇药产业创新研究院兰州730000 甘肃省中药现代制药工程研究院有限公司兰州730000

文冠果是我国特有的药用植物和珍贵的木本油料植物,有较高的药用、食用、观赏等综合经济价值。研究发现文冠果化学成分主要包括三萜类、黄酮类、苯丙素类等,其药理作用为改善学习与记忆功能、抗氧化、促进神经生长因子(nerve growth fac... 详细信息

文冠果是我国特有的药用植物和珍贵的木本油料植物,有较高的药用、食用、观赏等综合经济价值。研究发现文冠果化学成分主要包括三萜类、黄酮类、苯丙素类等,其药理作用为改善学习与记忆功能、抗氧化、促进神经生长因子(nerve growth factor,NGF)介导的神经突触生长等。本文在对文冠果化学成分和药理作用概述的基础上,根据中药质量标志物(quality marker,Q-marker)概念,从传统药性、功效、化学成分可测性、产地等方面对其质量标志物进行预测分析,得出文冠果皂苷B和E、芦丁、槲皮素、表没食子儿茶素、没食子儿茶素等可作为文冠果质量标志物的主要备选化合物,从而为文冠果质量评价体系的建立和资源综合利用提供参考。

关键词：文冠果质量标志物三萜类化学成分药理作用

毛冬青片对脑缺血再灌注损伤大鼠的作用及对GFAP、NF-κBp65、VEGFA蛋白表达的影响

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中药药理与临床 2024年第4期40卷 61-68页

作者：冯永岗刘福宇唐寅博单凯欣苗明三方晓艳河南中医药大学药学院郑州450046 豫药全产业链研发河南省协同创新中心郑州450046

目的:观察毛冬青片对脑缺血再灌注损伤大鼠的治疗作用及对GFAP、NF-κB p65、VEGFA蛋白表达的影响,探讨毛冬青片的促血管新生及神经保护作用。方法:线栓法复制MCAO/R大鼠模型,60只SD大鼠随机分为:正常对照组、模型对照组、银杏叶提取物2... 详细信息

目的:观察毛冬青片对脑缺血再灌注损伤大鼠的治疗作用及对GFAP、NF-κB p65、VEGFA蛋白表达的影响,探讨毛冬青片的促血管新生及神经保护作用。方法:线栓法复制MCAO/R大鼠模型,60只SD大鼠随机分为:正常对照组、模型对照组、银杏叶提取物20 mg/kg组、毛冬青片100、200 mg/kg组;造模后第24 h、3 d、7 d采用Longa评分和平衡木评分评估大鼠神经功能;HE染色观察组织病理学改变;免疫荧光染色法观察梗死灶周围脑组织CD31、VEGFA阳性表达情况;免疫荧光双染法观察GFAP/NeuN、NF-κB p65/NeuN阳性共表达情况;Western blot法检测梗死灶周围脑组织GFAP、NF-κB p65、Phospho-NF-κB p65、VEGF-R2蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠造模后各时间点Longa评分和平衡木评分显著升高(P<0.01);脑组织缺血核心区出现坏死性改变,神经元数目明显减少且排列紊乱,细胞呈空泡样改变;梗死灶周围脑组织NF-κB p65阳性细胞总数和核易位数、GFAP阳性细胞数、CD31和VEGFA阳性血管数明显增加(P<0.05或P<0.01),NeuN阳性细胞数显著减少(P<0.01);NF-κB p65、Phospho-NF-κB p65、GFAP、VEGF-R2蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,毛冬青片200 mg/kg组能显著降低造模后第3、7 d的Longa评分和平衡木评分(P<0.01);明显减轻脑缺血再灌注大鼠的组织病理学损伤;明显降低NF-κB p65阳性细胞总数和核易位数、GFAP阳性细胞数和蛋白表达、Phospho-NF-κB p65蛋白表达(P<0.05或P<0.01),明显增加NeuN细胞数、CD31和VEGFA阳性血管数,明显上调VEGF-R2蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:毛冬青片通过下调GFAP蛋白表达抑制星形胶质细胞过度活化;下调NF-κB p65的核易位和磷酸化表达减轻炎症反应;上调梗死灶脑组织CD31、VEGFA、VEGF-R2蛋白表达,促进血管新生,从而减轻脑缺血再灌注损伤和组织病理学损伤,发挥神经保护作用。

关键词：毛冬青片脑缺血再灌注损伤炎症反应星形胶质细胞血管新生神经保护

基于数据挖掘和网络药理学的栀子防治前列腺增生的用药规律和作用机制及实验验证

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中国医院药学杂志 2024年

作者：杨晶莹胡毅龙赵怡楠岳璐任翔苗明三河南中医药大学药学院豫药全产业链研发河南省协同创新中心

目的：本研究基于数据挖掘和网络药理学探索栀子防治前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）的用药规律与作用机制，并进行实验验证。方法：基于数据挖掘筛选古籍记载的含栀子组方，分析组方中与栀子配伍高频中药的用药规律... 详细信息

目的：本研究基于数据挖掘和网络药理学探索栀子防治前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）的用药规律与作用机制，并进行实验验证。方法：基于数据挖掘筛选古籍记载的含栀子组方，分析组方中与栀子配伍高频中药的用药规律。检索数据库获得栀子的活性成分靶点与BPH的疾病靶点，进行“活性成分-疾病”靶点关联分析。采用雄性昆明小鼠连续28 d颈背部皮下注射丙酸睾酮油溶液(12.5 mg·kg-1)复制BPH模型，自造模第8天起阳性对照组，栀子高、中、低剂量组连续灌胃给药21 d。ELISA法检测小鼠血清中E2、T、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平，HE法观察各组小鼠前列腺组织病理变化。结果：符合标准的中药组方中，含栀子的有893首，与栀子配伍的中药频次达9 056次，其中高频中药21味（频数≥90）；高频中药药性多为寒、微寒，药味主要有苦、辛、甘，多归肺经、脾经、肝经，多为清热药、补虚药、解表药。栀子主要活性成分为槲皮素、异欧前胡素、山奈酚、β-谷甾醇等，核心靶点为SRC、HSP90AA1、AKT1、EGFR等，涉及花生四烯酸代谢、NF-κB信号通路等。动物实验结果表明，栀子可显著降低BPH小鼠血清中E2、IL-1β、IL-6、TNF-α含量（P<0.01），增加IL-10、T水平，减轻前列腺组织病变。结论：本研究的开展证实了栀子具备改善BPH的理论基础、物质基础及药理活性，为栀子改善“淋证涩通”的核心功效提供了现代研究支撑。

关键词：栀子前列腺增生数据挖掘网络药理学作用机制

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穿心莲纳米银制备及抗氧化和抑菌活性研究

中草药 2024年第19期55卷 6508-6518页

作者：魏思敏刘强苏思琪王英辉陕西中医药大学陕西中药资源产业化省部共建协同创新中心秦药特色资源研究开发国家重点实验室(培育) 长安大学理学院

目的使用穿心莲Andrographis paniculata（AP）绿色合成纳米银（AP@silver nanoparticles,AP@AgNPs），确定最佳合成工艺；研究AP@AgNPs理化性质、抗氧化和抑菌活性及杀菌机制。方法使用穿心莲提取液在超声加热条件下合成AP@AgNPs，以... 详细信息

目的使用穿心莲Andrographis paniculata（AP）绿色合成纳米银（AP@silver nanoparticles,AP@AgNPs），确定最佳合成工艺；研究AP@AgNPs理化性质、抗氧化和抑菌活性及杀菌机制。方法使用穿心莲提取液在超声加热条件下合成AP@AgNPs，以AP@AgNPs粒径、还原反应效率及多分散性为指标，通过评价生物合成参数确定最佳合成工艺，激光粒度仪、透射电子显微镜（transmission electron microscope,TEM）、X射线晶体衍射（X-ray crystal diffraction,XRD）和傅里叶变换红外光谱（Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR）表征AP@AgNPs粒径、多分散性、表面性质、形貌、晶型和还原机制，计算1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine,DPPH）自由基捕获率评价抗氧化能力，测量细菌生长动力学评价抑菌活性，流式细胞术评价AP@AgNPs内吞作用，初步揭示杀菌机制。结果穿心莲提取液pH 10.0、AgNO3浓度10.0 mmol/L、50℃反应6.0 h可得近球形、分散均匀、表面带负电荷、粒径在30～40 nm、晶型为面心立方、至少2个月内稳定的AP@AgNPs。合成的AP@AgNPs对DPPH自由基具有很强的捕获能力，150.0μg/mL时捕获率为95.1%；对大肠杆菌Escherichia coli的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）为20.0μg/mL，而金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的MIC大于100.0μg/mL;AP@AgNPs可被2种细菌内吞，其中大肠杆菌可能通过细胞内机制死亡，而金黄色葡萄球菌的细胞膜会被损伤导致细胞内物质流出。结论使用穿心莲可绿色制备性质稳定、具有抗氧化和选择性抑制大肠杆菌活性的AP@AgNPs，其可被大肠杆菌和金黄色葡萄球菌内吞。

关键词：穿心莲纳米银绿色合成生物合成参数抑菌活性抗氧化

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基于主成分分析研究青翘、老翘对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的作用差异

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中国中药杂志 2024年第15期49卷 4128-4138页

作者：张钦钦张贝贝杨帆王茜薛淑娟布晨希吴给给陈随清河南中医药大学河南郑州450046 河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心河南郑州450046 河南中医药大学豫药全产业链研发河南省协同创新中心河南郑州450046

从药效相关性和成分差异阐释青翘与老翘改善博来霉素(BLM)诱导肺纤维化小鼠的作用差异。小鼠随机分为正常组,模型组,吡非尼酮组(50 mg·kg^(-1)),青翘低、高剂量组(1.3、2.6 g·kg^(-1)),老翘低、高剂量组(1.3、2.6 g·kg^(-1))。采用... 详细信息

从药效相关性和成分差异阐释青翘与老翘改善博来霉素(BLM)诱导肺纤维化小鼠的作用差异。小鼠随机分为正常组,模型组,吡非尼酮组(50 mg·kg^(-1)),青翘低、高剂量组(1.3、2.6 g·kg^(-1)),老翘低、高剂量组(1.3、2.6 g·kg^(-1))。采用气管滴注BLM制备肺纤维化模型,统计小鼠存活率及体质量变化;给药完成后计算肺指数,HE染色、Masson染色和天狼星红染色评价肺组织病理变化;透射电子显微镜观察肺组织超微结构;生化法测定肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏着蛋白(E-cadherin)、羟脯氨酸(HYP)及肺泡灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;RT-qPCR、Western blot法检测肺组织中基质金属蛋白酶7(MMP7)、胶原蛋白Ⅰ型(collagenⅠ)、E-cadherin、TNF-α、波形蛋白(vimentin)、TGF-β1、α-SMA表达;免疫荧光检测肺组织中α-SMA的表达;主成分分析法评价老翘与青翘改善肺纤维化的作用差异;分子对接技术分析老翘中含量高的化合物与TGF-β1受体之间的相互作用,CCK-8法检测其对TGF-β1诱导BEAS-2B和HFL1细胞模型的影响。结果显示,青翘、老翘可提高肺纤维化小鼠存活率,降低肺指数,改善肺组织病理损伤与胶原纤维沉积水平,改善小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞板层小体受损情况,降低肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α水平,下调肺组织中HYP、MMP7、vi-mentin、collagenⅠ、TGF-β1、α-SMA的表达,上调E-cadherin的表达。通过主成分分析综合评价胶原纤维沉积水平,其改善程度为老翘高剂量>老翘低剂量>青翘高剂量>青翘低剂量。分子对接显示羟基酪醇、咖啡酸、连翘脂素、落叶松脂素与TGF-β1受体有较好的结合活性,且可显著减轻TGF-β1诱导BEAS-2B细胞损伤,抑制TGF-β1诱导HFL1细胞增殖。综上,青翘、老翘均可有效改善BLM诱导的肺纤维化小鼠损伤,老翘在减少胶原沉积方面优于青翘,可能与老翘中羟基酪醇、咖啡酸、连翘脂素、落叶松脂素含量高于青翘有关。

关键词：老翘青翘肺纤维化主成分分析