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非重型再生障碍性贫血大鼠模型的构建方法

甘肃科学学报 2022年第1期34卷 48-53页

作者：何丽梅孙立哲李媛媛周智辉李宏陕西中医药大学第二临床医学院陕西咸阳712046 陕西中医药大学第二附属医院陕西咸阳712000 陕西中医药大学制药厂陕西咸阳712000

构建成模较快,生存周期较长,生存率较高的稳定非重型再生障碍性贫血大鼠模型。选取18只雄性6~8周龄SD大鼠,适应性喂养一周后,随机分为对照组8只和模型组10只,模型组大鼠经2.5 Gy X射线全身照射后,分别于第4、6、8、15、17、19天腹腔注... 详细信息

构建成模较快,生存周期较长,生存率较高的稳定非重型再生障碍性贫血大鼠模型。选取18只雄性6~8周龄SD大鼠,适应性喂养一周后,随机分为对照组8只和模型组10只,模型组大鼠经2.5 Gy X射线全身照射后,分别于第4、6、8、15、17、19天腹腔注射环磷酰胺和氯霉素;对照组大鼠给予相同条件X射线实行假照射,于相同时间腹腔注射等量生理盐水;分别于第5、20天,经眼眶静脉采血,测血常规。给药期间观察大鼠一般活动状态、监测体重变化;第20天,麻醉后颈脱臼处死,取大鼠脾脏并称重,计算脾脏指数;取部分脾脏组织做脾脏病理切片,取双侧股骨做骨髓病理活检。与对照组相比,经X射线照射联合环磷酰胺和氯霉素腹腔注射的SD大鼠出现不同程度的眼、鼻、口腔出血,伴四肢脚爪红肿及出血点;血常规检测显示外周血全血细胞均显著减少,其中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)、血红蛋白(HCB)迅速减少;脾脏体积缩小,颜色变浅,脾脏指数减低;骨髓病理活检显示,骨髓造血细胞增生减低,有核细胞减少,内皮细胞、脂肪细胞等非造血细胞增多,可见脂肪空泡,骨髓增生程度减低。X射线联合环磷酰胺与氯霉素建立的大鼠模型符合非重型获得性再生障碍性贫血的临床特点,模型稳定,成模较快,死亡率低,存活时间较长,适用于再障机制及新型药物治疗的实验研究。

关键词：非重型再生障碍性贫血 SD大鼠 X射线环磷酰胺氯霉素

人牙周膜干细胞成骨分化相关lncRNAs的筛选及鉴定

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人牙周膜干细胞成骨分化相关lncRNAs的筛选及鉴定

作者：屈茜南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景牙齿功能及寿命与牙周组织的支持密不可分,其中牙周膜(periodontal ligament,PDL)是围绕牙根并连结牙根和牙槽骨内壁的致密结缔组织。它具有一定的自我更新及修复的能力,但这种修复能力是有限的,在炎症等情况下该能力会受到抑制... 详细信息

研究背景牙齿功能及寿命与牙周组织的支持密不可分,其中牙周膜(periodontal ligament,PDL)是围绕牙根并连结牙根和牙槽骨内壁的致密结缔组织。它具有一定的自我更新及修复的能力,但这种修复能力是有限的,在炎症等情况下该能力会受到抑制,针对牙周炎等情况所造成的牙周组织缺损最理想的治疗是获得一定程度上的牙周再生,其中种子细胞为牙周组织再生的研究重点。人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)被认为是牙周组织再生工程的关键细胞之一,具有多向分化以及自我更新潜能,是牙周组织再生最丰富、最直接的种子细胞,也是牙周缺损修复和基因治疗重要的细胞学基础。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类转录本长度超过200 nt(核苷酸单位)的功能性RNA分子,不编码蛋白质,但可调控基因表达。lncRNA作用范围广泛,可在染色质水平、表达水平和翻译水平发挥调控作用,参与生命体的胚胎发育、组织分化和器官形成等生命活动。研究发现,lncRNA在多种复杂疾病的发生发展过程中可发生特异性表达,且在干细胞的干性维持及多向分化中也发挥着重要作用。然而,目前在hPDLSCs成骨分化过程中有关lncRNA的研究尚鲜有报道。本研究旨在探索lncRNA对hPDLSCs成骨分化的作用,为将来牙周组织缺损修复和牙周组织再生工程提供新的思路。本论文主要包括以下四章内容：第一章人牙周膜干细胞的分离培养与鉴定本章实验采用改良酶组织块法及有限稀释法分离纯化hPDLSCs,CCK8法检测并绘制细胞生长曲线,利用流式细胞仪检测细胞表面分子标记物,采用单克隆形成实验和多向诱导实验分别检测细胞的克隆形成能力及多向分化潜能。第二章基因芯片检测人牙周膜干细胞成骨分化相关lncRNA汲其验证采用基因芯片技术对成骨诱导14 d及对照组hPDLSCs的RNA提取物进行检测,分析成骨诱导前后hPDLSCs中mRN A及ncRN A的表达水平变化情况,利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)技术对基因芯片的检测结果进行验证。第三章人牙周膜干细胞成骨诱导前后lncRNA-mRNA虻共表达谱的构建及关键IncRNA的筛选利用基因本体论(gene ontology,GO)、路径分析(pathway analysis)等生物信息学方法对基因芯片结果进行初步的分析,采用编码.非编码.基因共表达(coding-noncoding gene co-expression,CNC)网络分析技术构建lncRNA与mRNA之间的调控网络图谱,根据分析结果筛选出在hPDLSCs成骨分化过程中的关键In cRNA;qRT-PC滥测关键lncRNA在hPDLSCs成骨诱导前后及牙周膜组织中的表达水平。第四章抑制TCONS0007046表达对人牙周膜干细胞成骨分化的影响构建lncRNA TCONS0007046 shRNA’陵病毒并进行细胞转染,利用qRT-PCR检测慢病毒抑制效率,CCK8法检测抑锘TCONS0007046表达对hPDLSCs增殖能力的影响。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性染色及茜素红S染色检测成骨诱导14 d后检测抑制T℃ONS 00007046表达对hPDLSCs成骨分化的影响,并利用qRT-PC法检测成骨相关基因(***2. BMP2及BMP6)表达水平变化。材料方法组织获取及细胞培养实验中所用离体牙取自南方医院口腔颌面外科门诊18～25岁患者因阻生需要拔除的健康、完整的第三磨牙(经患者知情同意)。所选患者无其他系统性疾病史、吸烟或特殊用药史。牙齿拔除后迅速置于含双抗的a-MEM培养液中,放入冰盒内送入实验室。在超净台内轻轻刮取牙根中1/3的牙周膜组织,PBS缓冲液中反复漂洗。用眼科剪将组织小心地剪碎成1mm×11 mm×1 mm大小,置于3mg/mL的Ⅰ型胶原酶和4 mg/mL的中性蛋白酶混合液中,37℃水浴消化30min。加入适量完全培养基终止消化,800 rpm离心3 min,小心弃去上清,并加入少量完全培养基,用枪头轻轻吹打均匀,使细胞悬液与松散组织呈混匀状态,接种至6孔板内铺平,加盖玻片于组织块之上并加入适量含有10%胎牛血清、100μmol/L磷酸盐抗坏血酸、2 mmol/L谷氨酸盐、100 U/mL青霉素及100μg/mL链霉素的a-MEM培养液,于5%C02、37℃环境中培养,每2～3d换液。取第1代人牙周膜细胞,胰酶消化制成细胞悬液,并利用逐步稀释法将细胞浓度调整为10～15个/mL。按100 μL/孔的密度将细胞接

关键词：牙周膜干细胞长链非编码RNA 成骨分化

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武警某部基层官兵卫生服务研究

武警某部基层官兵卫生服务研究

作者：李三强河北医科大学

学位级别：硕士

背景:随着我国兵役制的改革,义务兵服役期缩短,征兵及军训时间由冬季转变为夏秋季,士官数量与比例改变,特招入伍大学生增加,官兵文化程度普遍提高,新兵入伍健康教育大力普及,都直接影响着基层官兵对卫生服务的需求与利用。目的:武警某... 详细信息

背景:随着我国兵役制的改革,义务兵服役期缩短,征兵及军训时间由冬季转变为夏秋季,士官数量与比例改变,特招入伍大学生增加,官兵文化程度普遍提高,新兵入伍健康教育大力普及,都直接影响着基层官兵对卫生服务的需求与利用。目的:武警某部以中队为单位居住,部分基层官兵前往体系内支队卫生队、总队医院等部队卫生机构就诊不便,基层卫生服务可及性较不理想。本研究通过官兵健康调查问卷,调查当前武警某部基层官兵的健康状况、卫生服务需要和利用情况、就医意向和满意度以及对基层卫生工作的意见建议等,通过数据了解当前卫生服务能否满足基层官兵需要,分析存在的问题及可能的影响因素,最终为上级领导更合理高效的配置医疗卫生资源、构建与官兵不断增长的需求相适应的卫生服务体系、制定相关政策提供参考。方法:参照国家卫生服务调查内容,结合武警部队实际,自行设计“官兵健康调查问卷”,先对某武警院校8个学员队及某总队2个基层中队进行预调查,认真分析反馈意见及建议,修改完善问卷,并根据预调查结果计算正式调查样本量,采用分层整群随机抽样的方法,抽取武警某总队3个支队,由本支队卫生队军医协同研究人员开展正式调查。调查过程中,以中队为单位召集调查对象,在中队领导参与支持下研究人员解释调查目的和要求,请官兵按调查表内容认真填写。问卷主要内容有:基本情况、患病受伤情况、患病住院情况和其它健康有关情况等。其中涉及到的主要指标有:两周患病率、两周就诊率、两周患病未就诊率、两周二次就诊率、两周多次就诊率、两周患病持续天数、两周卧床率、两周缺勤率、慢性病患病率、住院率、人均住院天数、应住院而未住院率等。所列疾病基于第四次国家卫生服务调查疾病分类表分类。结果:1本次研究共调查37个基层中队,官兵共计1881人,其中26个中队驻地在市区,11个中队驻地在郊区。警卫中队16个,看押看守中队3个,机动中队13个,巡逻中队5个。官兵全部为男性,未婚者占95.2%,15-24岁占94.9%,25-34岁占5.1%,年龄呈偏态分布,M(R)=20(3)岁。文化程度上,初中及以下339人占18.5%,高中737人占40.3%,技工学校、中专及中技405人占22.2%,大学专科及本科348人占19%。1年兵776人占42.4%,2年兵600人占32.8%,1期士官323人占17.7%,2期及以上士官102人占5.5%,干部72人占4.0%。官兵原籍由高到低依次为湖北、河北、黑龙江、天津、江苏、内蒙古、辽宁、河南、山东、吉林等,占到95%,其他为安徽、浙江等。2官兵两周患病率为26.2%,高于第四次国家卫生服务调查中全国15-34岁年龄组的6.2%(χ2=729.184,P组织疾病(诸如鸡眼、脚气、疖子、湿疹等)、开放性血管损伤等,其累积患病率超过基层患病的60.0%。前5位两周患病疾病系统由高到低依次为肌肉骨骼结缔组织疾病、损伤、呼吸系统疾病、消化系统疾病和皮肤和皮下组织疾病。患病官兵中自觉病情不严重和一般的共占90%,患病严重程度总体较轻。此次调查显示软组织损伤(75.4%)和骨关节损伤(20.2%)为训练多发伤,提醒基层部队训练时应重视对软组织和骨关节的保护,训前热身活动显得尤为重要,尽量达到30分钟,以身体微微见汗为宜。就伤情而论,轻多重少,许多官兵存在带伤训练的情况,84.3%的官兵在训练时发生伤病后都未曾缺勤。3官兵慢性病患病率为6.4%,高于第四次国家卫生服务调查中全国15-34岁年龄组的3.5%(χ2=6.810,P组织疾病、皮肤及皮下组织疾病、损伤、消化系统疾病和循环系统疾病位列慢性病疾病系统前五位,其他运动系病、椎间盘疾病、皮肤和皮下组织疾病、脱位、扭伤和劳损、牙齿疾患,其他口腔疾病是目前影响官兵的最主要健康问题。4官兵两周就诊率为13.9%,高于第四次国家卫生服务调查中全国15-34岁年龄组的5.4%(χ2=244.782,P医院22.7%、中队卫生室18.4%、地方医院18.4%,根据官兵对就诊机构建议意见可知加强中队卫生室的诊治能力建设,增加支队卫生队药品和设备,提高总队医院为兵服务的质量,加大就地医疗的政策和经费支持是当前改善基层官兵就医条件、保障官兵健康的重点。5官兵调查前一年内住院率为7.4%,高于第四次国家卫生服务调查中15-34岁年龄组的5.7%(χ2=9.056,P<0.05)。住院患者平均住院天数M

关键词：武警基层官兵卫生服务需要利用影响因素

我国小学校口腔健康教育课程教学内容和教学方法研究

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我国小学校口腔健康教育课程教学内容和教学方法研究

作者：公文第四军医大学

学位级别：硕士

口腔疾病在当今社会已经成为困扰人们的一大疾病，严重影响人们的生活及工作。然而许多口腔疾病都是可以预防的，诸如龋病和牙周病等。而在诸多预防措施中最重要、最廉价、最有效的方法就是通过口腔健康教育获得口腔健康知识，增强口腔... 详细信息

口腔疾病在当今社会已经成为困扰人们的一大疾病，严重影响人们的生活及工作。然而许多口腔疾病都是可以预防的，诸如龋病和牙周病等。而在诸多预防措施中最重要、最廉价、最有效的方法就是通过口腔健康教育获得口腔健康知识，增强口腔健康意识，形成良好的口腔健康行为，终身拥有健康的口腔状况。小学生通常被认为是健康教育的重点目标人群，通过对小学生进行口腔健康教育通常可以形成能够维持一生的良好的口腔健康模式。发达国家非常重视小学校口腔健康教育，政府、牙科机构与学校、医院联合对小学生进行口腔健康检查和口腔健康教育，使小学生口腔保健目标得以落实。国内目前对小学生口腔健康教育的研究仅局限于口腔健康状况和健康行为的流行病学调查，缺乏系统的口腔健康教育政策法规，也未制定相应的教学大纲、教学内容以及较为明确的教学方法。越来越多的人已经意识到小学生口腔健康教育对口腔健康的重要意义，提倡在小学阶段开展口腔健康教育。目的：本研究通过口腔检查和问卷调查的形式掌握小学生对口腔健康知识的客观需求并通过问卷调查的形式了解小学生对口腔健康知识的主观需求;根据研究结果，制定阶梯式小学生口腔健康教育课程教学内容;并对教学内容的有效实施进行教学方法评价;提出我国开展小学校口腔健康教育的重点内容和发展策略。方法：本研究基线资料调查对象为山东省茌平县实验小学1226名1-6年级的小学生及其家长。采用世界卫生组织《口腔健康调查基本方法》口腔疾病诊断标准调查小学生患龋情况、牙龈炎情况以及错合畸形情况。采用问卷的形式评价小学生及其家长口腔健康知识的需求情况。根据调查分析结果结合网络调查及文献研究的方法设计阶梯式小学生口腔健康教育课程。采用现场示范教学法，对教学内容和教学方法进行专家评估，并通过分析课堂前后小学生口腔健康知识和行为的改变情况，对教学内容和教学方法进行客观评价。结果：第一部分实验，共发放1226份问卷，回收有效问卷1126份，合格率91.86%。小学生乳牙患龋率为46.80%，龋均为1.46（SD=±2.111），乳牙龋失补牙数为1643颗，乳牙龋齿充填牙数仅67颗，乳牙充填率为4.08%。恒牙患龋率为12.61%，恒牙龋均为0.21（SD=±0.630），恒牙龋失补牙数为236颗，龋充填牙数仅7颗，充填率为2.97%。每天早晚刷牙的小学生占44.1%，有刷牙出血情况的占74.6%，每次刷牙时间达到三分钟的占38.9%，2-3个月更换一次牙刷的占48.1%，餐后及零食后漱口的占45.1%，知道含氟牙膏能够预防龋齿的占30.1%，知道六龄牙的占21.4%，认为乳牙龋坏应该及时看医生的占76.0%。有69.5%的家长认为乳牙坏了不用治疗μ是错误的。赞同窝沟封闭能预防小学生龋齿μ的只有9.0%。赞同含氟牙膏能够预防龋齿μ的占12.9%。有62.8%的家长在过去的一年内有过牙龈出血或者经常牙龈出血。48.6%的家长认为自己需要口腔治疗（26.6%的家长认为自己需要补牙，17.8%的家长认为自己需要镶牙，4.2%的家长认为自己需要拔牙）。有10.7%的家长能够定期进行口腔检查。75.6%的家长不支持自己的孩子使用口香糖。家长受教育程度、过去的一年内孩子有过牙疼、家长对自己口腔健康状况的评估“认为自己是否需要治疗”、小学生的口腔保健知识“乳牙得了蛀牙是否需要看医生”是影响小学生患龋的相关因素。根据实验一至实验四的调查结果，我们总结小学生生长发育不同阶段及不同年龄所面临的口腔疾病和口腔问题，结合各年龄段小学生对口腔知识的主观需求情况，按照国家教育部对小学生课程设计的分组标准，将小学生口腔健康教育内容分配到三级水平，每学期一次课。三个不同水平互相衔接，形成阶梯式口腔健康教学内容，完成小学校口腔健康教育的教学大纲总体目标。小学生口腔健康教育阶梯式教学内容包括：龋齿、六龄牙、牙齿组成与生理功能、牙刷和牙膏、尽早戒除口腔不良习惯、牙外伤、食物和牙健康、唾液的功能、青少年牙龈炎、牙菌斑和牙石、口腔疾病与全身健康以及牙科发展史。对设计的口腔健康教育内容进行不同口腔健康教育教学方法的效果评估，结果显示课前三组学生之间知识、行为无差异，具有同质性（p>0.05），课后三组学生之间知识、行为也无差异（p>0.05）。但是课堂前后学生知识的改变均有差异。说明我们设计的口腔健康教育内容能够在相应年龄段的小学生课堂有效的开展实施，通过口腔健康教育可以提高小学生口腔健康知识并且改善小学生口腔健康行为，但不同教学方法之间没有差异性。结论：小学生口腔健康状况差，口腔健康知识及行为不理想，应该通过开展各种形式的口腔健康教育来促进小学生口腔健康水平。在开展小学生口腔健康教育的过程中应注意到小学生更乐于参与课堂。根据调查结果，我国小学生口腔健康教育课程的重点内容应该为有效刷牙、正确选用含氟牙膏、定期进行口腔健

关键词：口腔健康教育小学生典型调查教学内容教学方法

丝素蛋白/纳米羟基磷灰石/透明质酸复合支架的制备及性能研究

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丝素蛋白/纳米羟基磷灰石/透明质酸复合支架的制备及性能研究

作者：南晓茹山西医科大学

学位级别：硕士

目的:为了模拟组织细胞外基质(ECM)的组成成分,采用冷冻干燥法,以丝素蛋白(SF)、纳米羟基磷灰石(nHAp)和透明质酸(HA)为原材料,并加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)作为交联剂,制备了SF/nHAp/H... 详细信息

目的:为了模拟组织细胞外基质(ECM)的组成成分,采用冷冻干燥法,以丝素蛋白(SF)、纳米羟基磷灰石(nHAp)和透明质酸(HA)为原材料,并加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)作为交联剂,制备了SF/nHAp/HA多孔复合支架材料。对其理化性能、体外细胞生物相容性以及对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响进行研究,从而为临床中修复骨缺损相关材料提供新思路。方法:1.采用共混、交联、冷冻干燥等方法制备了不同透明质酸(HA)比例的丝素蛋白/纳米羟基磷灰石/透明质酸(SF/nHAp/HA)多孔复合支架材料。分别得到五组样品材料:SF/nHAp、SF/nHAp/1.5wt%HA、SF/nHAp/2.5wt%HA、SF/nHAp/5.0wt%HA和SF/nHAp/7.5wt%HA。采用扫描电镜(SEM)、X射线衍射(XRD)、傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)、X射线光电子能谱(XPS)、万能材料试验机和降解实验等分析技术,对支架的形貌、二级结构、孔径、孔隙率、吸水能力、力学及降解性能进行测量和分析,探讨HA对多孔支架性能的影响。2.大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)原代培养并做流式鉴定后,将BMSCs接种于各组支架材料上,评价材料的体外细胞相容性。培养7 d后,利用SEM观察细胞的分布情况及形态。培养1、3和7 d后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况。活/死细胞染色(living/dead staining)后,使用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察细胞活力。3.为了评价材料的体外成骨分化能力,将BMSCs接种于各组材料上成骨诱导4、7和14 d后,用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒进行定量测定。成骨诱导7、14和21 d后,进行茜素红染液染色及钙(Ca)沉积的半定量分析。结果:1.通过SEM观察显示所有多孔支架均具有典型的三维多孔结构,孔隙连续且相互连通。这就说明复合支架中SF、nHAp和HA之间具有良好的相容性且没有明显的团聚和析出现象。SF/nHAp多孔支架中引入HA之后,由于HA的粘度较高,抑制冰核的生长,所以SF/nHAp/HA多孔支架的平均孔径逐渐减小(SF/nHAp组109.6±0.57μm,SF/nHAp/1.5wt%HA组108.8±0.51μm,SF/nHAp/2.5wt%HA组107.1±0.37μm,SF/nHAp/5.0wt%HA组106.3±0.46μm,SF/nHAp/7.5wt%HA组103.0±0.51μm)。相反,多孔支架的孔隙率有所增加(87.5～94.2%)。XRD、FT-IR和XPS结果显示,所有多孔支架都主要由Silk I和少量Silk II结构组成,且复合支架中的HA得到了有效交联。水溶性和力学性能测试结果表明,当HA含量为7.5wt%时,由于Silk I含量不足以包覆高含量HA,使得SF/nHAp/HA多孔支架在水中趋于不稳定。然而当HA的加入量小于5.0wt%,尤其是比例为5.0wt%的SF/nHAp/HA支架具有最高的吸水性和力学性能。降解实验结果表明,HA的加入降低了复合支架的降解速率。2.根据SEM、LSCM及CCK-8等体外细胞实验结果表明,在7d的细胞培养过程中,五组支架材料的细胞数量都呈现出增加趋势,均显示出良好的细胞相容性。然而,BMSCs在SF/nHAp/5.0wt%HA多孔支架上增殖最快,说明适量的HA可以支持细胞的黏附和增殖。3.体外成骨诱导分化实验结果显示,ALP的活性随时间的延长而逐渐增加,且在每个时间点SF/nHAp/5.0wt%HA多孔支架上细胞的ALP活性表达和钙盐沉积量均高于SF/nHAp、SF/nHAp/1.5wt%HA、SF/nHAp/2.5wt%H和SF/nHAp/7.5wt%HA组多孔支架,显示出良好的细胞成骨诱导能力。结论:本研究采用冷冻干燥与化学接枝法合成一种SF/nHAp/HA多孔支架材料,通过控制HA的含量,能有效地调节支架的整体理化性能。通过细胞粘附、活力和增殖实验反映了SF/nHAp/5.0wt%HA相比其他四组材料具有良好的体外细胞相容性;另外,体外成骨诱导分化实验也反映了SF/nHAp/5.0wt%HA具有更好的体外成骨能力。总之,HA提高了复合材料的体外细胞相容性和生物活性,有望为骨组织的修复重建提供了一种新的材料。

关键词：丝素蛋白纳米羟基磷灰石透明质酸多孔支架骨组织修复

人牙周成纤维细胞诱导形成结合上皮样细胞的研究

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人牙周成纤维细胞诱导形成结合上皮样细胞的研究

作者：何颖河北医科大学

学位级别：硕士

目的:口腔结合上皮(junctional epithelium, JE)是附着在牙颈部连接结缔组织与牙面的特殊上皮结构,形成龈-牙结合部。结合上皮来自于缩余釉上皮,是一种无角化无钉突的上皮组织,也是口腔生理上的一个薄弱环节。在牙周炎发生时,结合上皮... 详细信息

目的:口腔结合上皮(junctional epithelium, JE)是附着在牙颈部连接结缔组织与牙面的特殊上皮结构,形成龈-牙结合部。结合上皮来自于缩余釉上皮,是一种无角化无钉突的上皮组织,也是口腔生理上的一个薄弱环节。在牙周炎发生时,结合上皮首先被破坏,是牙周炎的始发部位。由于结合上皮的摧毁,导致牙周袋形成和牙槽骨吸收,牙周炎进入进展期和活动期,成为严重破坏口腔咀嚼功能的疾病。当牙周炎静止后,结合上皮所构成的龈-牙结合修复缓慢,正常牙周结构重建困难。因此,研究结合上皮的再生和诱导是研究牙周炎治疗后牙周功能结构重建的难点和重点。本研究拟通过对人牙周成纤维细胞的体外培养,诱导形成结合上皮样细胞,生长在脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix, ADM)支架和小肠黏膜下层(small intestinal submucosa, SIS)支架组织上,探讨诱导形成的结合上皮样细胞及其形成的组织结构,为龈-牙结合部的形成提供上皮细胞来源的理论依据和实验室数据。牙周膜又称牙周韧带(Periodontal ligament),是牙根与牙槽骨之间的一层结缔组织,是重要的牙周支持组织,主要由成纤维细胞组成。许多研究已证明牙周成纤维细胞具有干细胞的特性[1～4]。正常情况下,牙周组织具有极强的修复能力,其修复活动是通过牙周膜中的不同细胞亚群的定向迁移和分化实现的[5、6]。本实验拟采用牙周成纤维细胞,诱导成为上皮样细胞,揭示牙周成纤维细胞具备多向分化的干细胞特征。随着组织工程技术的发展,选择适合的支架材料是组织工程研究的又一重要内容。目前,常用的支架材料有猪小肠粘膜下层支架、引导组织再生胶原膜、脱细胞真皮基质,纳米羟基磷灰石等。这些材料多具有良好的生物相容性、多孔性结构和高孔隙率及生物可降解性[7]。本实验选用脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix, ADM)和小肠黏膜下层(small intestinal submucosa, SIS)两种支架材料作为结合上皮样细胞附着的支架组织,探讨结合上皮样细胞对支架组织的附着能力及相容性,并探讨结合上皮样细胞在支架组织上生长的免疫特性和超微结构。方法:1人牙周成纤维细胞的培养和鉴定收集河北医大口腔医院正畸拔除的健康完整双尖牙(患者12～30岁),刮下其根中1/3牙周膜组织。采用组织块培养法,培养液选用含20%胎牛血清的低糖DMEM,0.25%胰酶消化,传代至第3代,采用抗波形蛋白vimentin和抗细胞角蛋白CK的免疫细胞化学进行细胞鉴定。2人牙周成纤维细胞的诱导培养采用K-SFM培养液,对第3代人牙周成细胞进行诱导培养7～10天,采用抗波形蛋白vimentin和抗细胞角蛋白CK的免疫细胞化学进行细胞鉴定。3小肠黏膜下层(small intestinal submucosa, SIS)支架组织的制备留取猪空肠组织50 cm,去除其浆膜层和肌层,在含有双抗(青霉素、链霉素)的PBS溶液中浸泡3 h;0.25 %胰酶中浸泡24 h;双蒸水漂洗,0.5% SDS 24 h;双蒸水漂洗。在含0.1 %过氧乙酸的20 %乙醇溶液中浸泡10 h,双蒸水漂洗;冻干后环氧乙烷消毒备用。4人牙周成纤维细胞接种及诱导培养将人牙周成纤维细胞分别接种到小肠黏膜下层(small intestinal submucosa, SIS)和脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix, ADM)上,K-SFM诱导培养3～5天。石蜡包埋,组织切片角蛋白CK免疫组织化学染色。扫描电镜观察细胞在支架上的生长状态。结果:1原代培养及其鉴定牙周组织原代培养7～10天,细胞爬出,获得的成纤维细胞呈梭形、胞体大,核大,圆形或椭圆形,有1～3个核仁。采用第3代细胞进行免疫细胞化学染色鉴定,成纤维细胞对抗波形蛋白vimentin呈阳性反应,抗角蛋白CK阴性反应。2人牙周成纤维细胞诱导及鉴定经K-SFM诱导后细胞爬片,免疫细胞化学染色,抗角蛋白CK阳性表达,表明牙周成纤维细胞诱导培养后,具备上皮细胞的免疫特性。3小肠黏膜下层(small intestinal submucosa, SIS)支架组织的电镜观察制备所得SIS经扫描电镜观察为无细胞的胶原束。4人牙周成纤维细胞接种及诱导培养牙周成纤维细胞在支架组织上诱导培养后,石蜡包埋切片,免疫组织化学染色,抗角蛋白CK阳性表达。扫描电镜观察发现,细胞在支架上生长良好,成片生长,细胞多边形,扁平样,核圆形或椭圆,核仁1～2个。形成结合上皮样细胞结构。结论:1牙周成纤维细胞能诱导分化为结合上皮样细胞。

关键词：人牙周膜成纤维细胞结合上皮组织工程支架

阻生下颌第三磨牙拔除三种切口设计对毗邻第二磨牙牙周参数的影响

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阻生下颌第三磨牙拔除三种切口设计对毗邻第二磨牙牙周参数的影响

作者：张媛山西医科大学

学位级别：硕士

目的:比较阻生下颌第三磨牙(Impacted lower third molar,ILTM)拔除时,不同切口设计——封套切口、角形切口和改良角形切口对相邻第二磨牙(Adjacent second molar,ASM)临床牙周状况的影响,为临床实践提供理论指导。方法:本实验纳入2021... 详细信息

目的:比较阻生下颌第三磨牙(Impacted lower third molar,ILTM)拔除时,不同切口设计——封套切口、角形切口和改良角形切口对相邻第二磨牙(Adjacent second molar,ASM)临床牙周状况的影响,为临床实践提供理论指导。方法:本实验纳入2021年5月1日至2021年7月31日于山西医科大学口腔医院口腔颌面外科就诊的诊断为完全粘膜下阻生下颌第三磨牙的160名患者,年龄18～25岁,男女不限。根据纳入排除标准,最终120名患者纳入研究,将其随机分为封套瓣组,角形瓣组和改良角形瓣组,术中分别给予封套切口、角形切口和改良角形切口。术者为同一高年资主任医师进行完全粘膜下阻生下颌第三磨牙拔除,除切口设计外,其他手术条件相同。术前拍摄曲面体层片了解完全阻生下颌第三磨牙与邻牙的关系、阻力情况等,采集三组患者的基本情况,并与术前、术后1周、4周和12周分别测量并记录相邻第二磨牙6个位点(近颊,颊正中,远颊,远舌,舌正中,近舌)牙周探诊深度(probing pocket depth,PPD)、附着丧失(attachment loss,AL)、菌斑指数(plaque index,PLI)和探诊后出血(bleeding on probing,BOP)。所有数据利用Graph Pad Prism 8.***.2.263软件进行统计分析。结果:1、一般情况:90例完成随访的样本中,封套瓣组30例,角形瓣组32例,改良角形瓣组28例。三组患者术前的人口学特点分布情况无统计学差异(P>0.05)。2、牙周情况:三组术前第二磨牙各牙周指标无统计学差异(P>0.05)。术后除了第二磨牙远颊、远舌位点,其余位点PPD和AL与术前无明显差异。为了进一步明确ILTM拔除对ASM远中临床牙周参数的影响,将远颊和远舌各测量指标的平均值作为第二磨牙远中的探诊深度(d PPD)、附着丧失(d AL)、菌斑指数(d PLI)和探诊后出血(d BOP)的最终测量值。术后1周、4周,三组第二磨牙d PPD、d AL、d PLI和d BOP均较术前增加,术后1周增加更为显著。而相较于封套瓣组和角形瓣组,改良角形瓣组d PPD、d AL、d PLI和d BOP显著降低(P0.05)。结论:阻生下颌第三磨牙拔除三种切口设计对毗邻第二磨牙牙周产生不同程度影响。术后三种切口均导致相邻第二磨牙d PPD、d AL、d PLI、d BOP增加,但是相比于封套切口和角形切口,改良角形切口对牙周参数影响较小。

关键词：阻生下颌第三磨牙相邻第二磨牙切口设计牙周组织

氧化铈仿生骨膜调控免疫-神经血管微环境促骨缺损修复的研究

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氧化铈仿生骨膜调控免疫-神经血管微环境促骨缺损修复的研究

作者：万千千中国人民解放军空军军医大学

学位级别：硕士

近年来创伤、炎症、肿瘤等原因导致骨缺损发生率一直居高不下,如何优化骨缺损修复治疗方案是亟待解决的难题。其中,改善缺损局部微环境,协调免疫活动、神经血管长入等局部反应和组织再生过程对于进一步促进骨缺损修复具有重要意义。骨... 详细信息

近年来创伤、炎症、肿瘤等原因导致骨缺损发生率一直居高不下,如何优化骨缺损修复治疗方案是亟待解决的难题。其中,改善缺损局部微环境,协调免疫活动、神经血管长入等局部反应和组织再生过程对于进一步促进骨缺损修复具有重要意义。骨膜在骨日常代谢以及骨缺损修复过程中发挥关键的调控作用:(1)骨膜内丰富分布的神经血管为骨组织提供神经血管支配来源;(2)骨膜含有丰富的局部免疫细胞和干细胞储备,在条件刺激下积极响应调节骨代谢和骨再生;(3)骨膜具有对细胞的选择性屏障能力,可为骨缺损修复维持良好的修复空间。针对天然骨膜的结构和功能,构建仿生膜材料,覆盖于缺损表面以调节骨缺损修复微环境,配合具备骨诱导性和骨传导性的骨缺损填充材料,有望进一步促进骨缺损修复。目前已有研究设计出针对促进血管化或调节巨噬细胞极化的仿骨膜类材料。然而,现有材料对神经生长及局部复杂免疫微环境的调控能力不足,改善骨缺损修复效果有限。氧化铈具有调控微环境的运用潜力,相关研究报道氧化铈纳米颗粒能够促进骨组织再生与血管再生,也有研究报道其具有免疫调节与神经保护作用。利用氧化铈构建仿生骨膜调控骨缺损修复局部微环境,可能是进一步改善骨缺损修复治疗效果的潜在方案。然而传统氧化铈纳米颗粒在体内降解代谢问题上存在争议,且构建材料需要依靠复杂的纳米颗粒制备技术,这大大掣肘其相关生物材料的发展。仿生矿化是在体外利用生物矿化的原理,以有机支架为模板诱导无机元素在其内有序沉积,形成具有精美有序结构的有机-无机复合材料。氧化铈作为无机成分,具备作为矿化基材的潜力,有望在天然膜材料鸡蛋膜内形成氧化铈仿生矿化。这种仿生矿化方案在简化材料制备方式的同时,能够制备出独特状态的氧化铈矿化成分,作为负载于鸡蛋膜有机支架上的生物活性成分,发挥调节骨缺损修复微环境的作用。本研究借鉴仿生矿化领域前沿研究成果,首次提出了利用聚丙烯酸(High molecular weight polyacrylic acid,HPAA)预处理有机支架材料,诱导乙酰丙酮铈缓慢水解形成无定形氧化铈,实现鸡蛋膜纤维内部仿生矿化的方案。氧化铈仿生骨膜是以无定形氧化铈(III价,IV价组成)无机矿物在鸡蛋膜有机支架(胶原成分和糖胺聚糖成分)内部有序沉积为特征的氧化铈仿生矿化鸡蛋膜材料,具有良好的生物安全性。利用于小鼠颅骨缺损模型,将仿生骨膜与骨缺损填充材料Bio-Oss配合使用,探索仿生骨膜调节缺损局部免疫反应、神经血管长入以及改善骨再生和骨膜再生的效果。随后,通过氯膦酸盐脂质体注射构建小鼠体内单核巨噬细胞清除模型,研究单核巨噬细胞在骨缺损修复过程中的作用。并结合体外细胞实验和共培养技术探索氧化铈仿生骨膜对巨噬细胞早期破骨分化和分泌功能的影响及作用机制,初步探讨巨噬细胞分化形成的破骨前体细胞在组织再生过程中的调节作用。本实验构建的仿生骨膜有望作为骨缺损修复治疗方案的辅助手段改善骨缺损修复效果,同时破骨前体细胞促组织再生作用机制有望为新型骨缺损修复材料的设计提供新思路和新作用靶点。1.研究方法在第一部分实验中,通过以鸡蛋膜为矿化模板、氧化铈为矿化基材、胶原酶和聚丙烯酸为支架预处理剂的氧化铈仿生矿化方案,以由下而上的方式实现氧化铈在鸡蛋膜纤维胶原及糖胺聚糖内的均匀有序沉积,构建氧化铈仿生矿化的鸡蛋膜材料。随后,我们对材料性能进行系列评价:采用透射电子显微镜(Transmission electron microscopy,TEM)、扫描电子显微镜(Scanning electron microscopy,SEM)、扫描透射电子显微镜能谱分析技术(Scanning transmission electron microscopy-energy dispersed X-ray analysis,STEM-EDX)观察氧化铈仿生矿化后鸡蛋膜显微结构特点和矿化分布特征;运用衰减全反射-傅里叶变换红外光谱仪(Attenuated total reflection–fourier transform infrared spectroscopy,ATR-FTIR)、Raman光谱、X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)、热重分析(Thermogravimetric analysis,TGA)判断矿化前后鸡蛋膜支架内的矿物成分及矿化程度,并初步分析矿化原理;结合X射线光电子能谱(X-ray photoelectron spectroscopy,XPS)分析矿化材料内铈元素的价态分布;原子力显微镜(Atomic force microscope,AFM)评价分析鸡蛋膜矿化前后弹性性能变化;采用人来源口腔黏膜成纤维细胞(Human oral mucosa fibroblast cells,h OMFs)模拟结缔组织细胞对膜的穿透过程,结合鬼笔环肽染色评价材

关键词：仿生矿化仿生骨膜氧化铈骨缺损修复微环境破骨前体细胞免疫-神经血管耦联