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二甲双胍改善多囊卵巢综合征并激活雌性生殖干细胞

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生理学报 2022年第3期74卷 370-380页

作者：王春红王强强苏亚珊孙亚群孙苗刘心蕊马会明李广永杜小利何瑞宁夏医科大学基础医学院生育力保持教育部重点实验室银川750004 宁夏医科大学中医学院回医药现代化教育部重点实验室银川750004 宁夏医科大学总医院泌尿外科银川750004

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是生育年龄妇女常见的一种复杂的内分泌及代谢异常所致的疾病,是女性不孕的重要因素。二甲双胍是临床应用最广泛的经典口服降糖药物,近年来被应用于PCOS治疗,但其作用机制尚不明确。本... 详细信息

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是生育年龄妇女常见的一种复杂的内分泌及代谢异常所致的疾病,是女性不孕的重要因素。二甲双胍是临床应用最广泛的经典口服降糖药物,近年来被应用于PCOS治疗,但其作用机制尚不明确。本研究通过建立小鼠PCOS模型,论证二甲双胍对PCOS的改善作用及其机制。4~5周龄雌性C57BL/6J小鼠连续21天给予来曲唑(每天灌胃1 mg/kg)联合高脂饮食,建立PCOS模型。成模后灌胃给予二甲双胍(每天200 mg/kg),1个月后取材,期间检测体重并进行糖耐量试验。取材后行苏木素-伊红(H&E)染色检测卵巢病理改变;ELISA法测定血清中抗缪勒氏管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(E_(2))、睾酮等激素水平;免疫组织化学及免疫荧光染色法检测雌性生殖干细胞(female germline stem cells,FGSCs)标志物DDX4/MVH及PCNA表达及定位;Western blot检测小鼠卵巢中DDX4/MVH、PCNA、cyclin D2以及AMPK/mTOR通路蛋白。结果显示,PCOS小鼠在接受二甲双胍治疗后,体重逐渐恢复正常,糖耐量试验显示糖耐量明显改善,血清E 2水平升高,AMH、LH、睾酮水平及LH/FSH比值下降,卵巢多囊病变减轻,闭锁卵泡减少,且具有增殖性的FGSCs数目明显增多,卵巢组织PCNA、cyclin D2等增殖相关蛋白增加,p-mTOR、p-AMPK等蛋白明显上调。以上结果提示,二甲双胍在改善PCOS高雄激素血症、糖耐量异常及卵巢多囊病变的同时,还可以促进FGSCs增殖并激活其功能,其作用可能与AMPK、mTOR磷酸化有关。这些发现为二甲双胍治疗PCOS以及改善卵泡发育提供了新的科学依据和方向。

关键词：二甲双胍多囊卵巢综合征雌性生殖干细胞 AMPK/mTOR

基于蛋白组学技术探究六味地黄丸治疗卵巢储备减退小鼠的作用机制

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中国中药杂志 2023年第12期48卷 3224-3234页

作者：高婷仲佳雯秦岭王雪怡李晓荣罗玉雪宁夏医科大学中医学院宁夏银川750000 宁夏医科大学中医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学生育力保持重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学少数民族医药现代化教育部重点实验室宁夏银川750004 银川市中医医院宁夏银川750000

利用蛋白组学技术探究六味地黄丸对卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserve, DOR)的治疗效用和可能作用机制。首先采用环磷酰胺60 mg·kg^(-1)联合白消安6 mg·kg^(-1)一次性腹腔注射制备DOR模型小鼠,药物注射后连续观察小鼠动情... 详细信息

利用蛋白组学技术探究六味地黄丸对卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserve, DOR)的治疗效用和可能作用机制。首先采用环磷酰胺60 mg·kg^(-1)联合白消安6 mg·kg^(-1)一次性腹腔注射制备DOR模型小鼠,药物注射后连续观察小鼠动情周期,以动情周期紊乱判定造模是否成功。造模成功后,给予小鼠六味地黄丸混悬液连续灌胃28 d;结束后选取4只雌鼠按照2∶1与雄鼠进行合笼观察孕产率;剩余小鼠在灌胃结束后的次日采血、取卵巢。苏木素-伊红(HE)染色、透射电镜下观察卵巢形态及超微结构变化;ELISA检测血清激素和氧化水平变化;定量蛋白组学技术分析小鼠造模前后和六味地黄丸干预前后卵巢蛋白的差异表达情况。结果显示,六味地黄丸能够调节DOR小鼠动情周期,改善小鼠血清激素水平,提高血清抗氧化水平,促进卵泡发育,保护卵巢颗粒细胞线粒体形态,提高DOR小鼠产仔数和存活数;显著负调节DOR模型相关的12个差异表达蛋白,这些差异蛋白主要参与了脂质分解代谢、炎症反应、免疫调节、辅酶生物合成等生物过程,并在鞘脂代谢、花生四烯酸代谢、核糖体、细胞铁死亡、cGMP-PKG信号通路等显著富集。总之,DOR的发生和六味地黄丸对其的防治作用与多种生物途径有关,主要包括氧化应激、炎症反应和免疫调节;“线粒体-氧化应激-细胞凋亡”是六味地黄丸治疗DOR的关键;YY1、CYP4F3是引发线粒体功能障碍、ROS积累的关键上游靶点,花生四烯酸代谢通路是药物作用的主要信号通路。

关键词：卵巢储备功能减退六味地黄丸蛋白组学卵巢颗粒细胞线粒体氧化应激

一例13号环状染色体综合征患儿的临床及遗传学分析

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中国当代儿科杂志 2018年第6期20卷 485-489页

作者：范美荣王贵杰于辛酉宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室宁夏银川750004

患儿,女,5个月,因生长发育迟缓就诊,体格检查发现体格发育落后,特殊面容(小头畸形、眼距宽、耳位偏低、鼻梁扁平、短人中)以及一侧小阴唇缺失。外周血染色体核型为46,XX,r(13)(p11q33)[82]/45,XX,-13[10]/46,XX,r(13;13)(p11q33;p11q33)... 详细信息

患儿,女,5个月,因生长发育迟缓就诊,体格检查发现体格发育落后,特殊面容(小头畸形、眼距宽、耳位偏低、鼻梁扁平、短人中)以及一侧小阴唇缺失。外周血染色体核型为46,XX,r(13)(p11q33)[82]/45,XX,-13[10]/46,XX,r(13;13)(p11q33;p11q33)[8];微阵列比较基因组杂交(aCGH)检测显示13q11q33.2区域和13q33.2q34区域分别有87.5?Mb的重复和8.2?Mb的缺失;荧光原位杂交(FISH)显示13号环状染色体长臂末端缺失。诊断为13号环状染色体综合征。该综合征临床表型多变,主要与染色体区带中遗传物质丢失的数量、部位以及不同核型嵌合比例不同等密切相关。

关键词：染色体异常 13号环状染色体生殖器异常儿童

TNF-α通过激活PI3K/AKT通路促进SW620^Lgr5+结肠癌干细胞增殖

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细胞与分子免疫学杂志 2020年第1期36卷 33-41页

作者：戴璐赵晓鹏马璐李昕左娣李元杰魏波隋御徐方宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004

目的探讨炎症环境下磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K/AKT)通路对SW620^Lgr5+结肠癌干细胞(CSC)增殖的影响。方法以人结肠癌SW620、 SW480、 HT29、 HCT116细胞为材料, Western blot法检测四株细胞中干细胞标志物富含亮氨酸重复序列的G... 详细信息

目的探讨炎症环境下磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K/AKT)通路对SW620^Lgr5+结肠癌干细胞(CSC)增殖的影响。方法以人结肠癌SW620、 SW480、 HT29、 HCT116细胞为材料, Western blot法检测四株细胞中干细胞标志物富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)的表达水平;选用Lgr5表达量最高的SW620细胞,采用荧光激活细胞分选技术(FACS)分析Lgr5^+细胞的比例;无血清悬浮培养得到结肠癌球细胞, FACS分选获得结肠癌Lgr5^+ CSC,集落形成实验、 5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药实验鉴定分选得到的结肠癌Lgr5^+CSC生物学特征的变化;肿瘤坏死因子α(TNF-α)处理Lgr5^+ CSC建立炎症模型, CCK-8法筛选TNF-α的最适作用浓度及最佳作用时间;采用PI3K/AKT通路抑制剂MK2206处理Lgr5^+ CSC,分为空白对照组、 MK2206组、 TNF-α组、 MK2206联合TNF-α组;集落形成实验检测细胞增殖情况,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot法检测AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化的GSK-3β(p-GSK-3β)蛋白水平。结果 SW620细胞中Lgr5的蛋白表达量显著高于其他细胞系;FACS分析得到SW620细胞中Lgr5^+细胞比例为6.9%,无血清培养基悬浮培养后,分选得到SW620^Lgr5+ CSC的比例为34.5%;与SW620细胞相比, SW620^Lgr5+ CSC的增殖能力与耐药性显著提高;1 ng/mL TNF-α作用24 h时,SW620^Lgr5+ CSC具有最高的细胞活力;与对照组相比, TNF-α显著增加SW620^Lgr5+ CSC的集落形成能力,但MK2206显著性降低SW620^Lgr5+ CSC的集落形成能力,增加SW620^Lgr5+ CSC的凋亡率;同时MK2206显著降低TNF-α诱导的SW620^Lgr5+ CSC的集落形成能力,增加其凋亡比例。TNF-α处理增加SW620^Lgr5+ CSC中AKT和GSK-3β的磷酸化水平,但MK2206可抑制TNF-α诱导的AKT和GSK-3β的磷酸化水平。结论 TNF-α通过激活PI3K/AKT信号通路促进SW620^Lgr5+ CSC增殖。

关键词：结直肠癌(CRC) 癌症干细胞(CSC) TNF-α PI3K/AKT信号通路细胞增殖

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聚苯乙烯纳米塑料导致小鼠卵巢纤维化的研究

聚苯乙烯纳米塑料导致小鼠卵巢纤维化的研究

MEHP通过Keap1-Nrf2信号通路诱导卵巢颗粒细胞过度自噬的研究

中国毒理学会第十次全国毒理学大会

作者：代文杰许博刘玲杨宏裴秀英付旭锋宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室

目的塑料由于使用方便和价格便宜等特点被广泛使用于日常生活,其进入环境后会在各种条件下被降解为微塑料(MPs,<5 mm)和纳米塑料(NPs,≤100 nm)。NPs因其极小的尺寸且易富集在生物体表面并穿透细胞膜,而且已有研究表明容易通过消化系统...

目的塑料由于使用方便和价格便宜等特点被广泛使用于日常生活,其进入环境后会在各种条件下被降解为微塑料(MPs,<5 mm)和纳米塑料(NPs,≤100 nm)。NPs因其极小的尺寸且易富集在生物体表面并穿透细胞膜,而且已有研究表明容易通过消化系统、呼吸系统和皮肤屏障进入人体。目前,已在海水、空气、食物,甚至人体组织中检测到NPs,并且已有大量的毒理学研究表明NPs会导致多器官的损害。据统计,人类通过多种暴露途径平均每周会摄入0.1-5 g塑料微粒,并且女性广泛使用各类化妆品增加了纳米塑料的暴露机会。目前,关于环境中NPs的毒性研究大多集中在水生生物上,但对哺乳动物的生殖毒性尤其是雌性生殖系统的影响仍然不明确。因此,了解NPs对哺乳动物雌性生殖系统的影响以及明确其潜在的毒理机制具有重要意义。材料和方法本研究以雌性ICR小鼠为动物模型,以10 mg/kg/d剂量的50 nm聚苯乙烯纳米塑料颗粒(PS-NPs)连续灌胃30天,通过检测动物动情周期、卵巢病理切片、卵泡计数、血清雌激素(E2)、促黄体生成素(FSH)水平、产仔率和卵巢颗粒细胞相关功能基因FSHR、CYP19A1的表达来评价卵巢形态结构和功能的变化;检测卵巢组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和过氧化物歧化酶(SOD)水平以评价卵巢氧化应激程度;ELISA和WB检测血清和卵巢中IL-6、IL-1β和TNF-α等炎性因子水平;Masson染色、天狼星红染色以及通过免疫组化与Western Blotting检测了卵巢中胶原酶-I(Collagen I)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达评价卵巢纤维化指标。结果研究发现PS-NPs暴露后导致小鼠动情周期紊乱、雌激素(E2)水平降低,促黄体生成素(FSH)水平升高、卵巢中生长卵泡数量的减少、闭锁卵泡与黄体数目增加和小鼠产仔率降低,并且引起卵巢颗粒细胞功能相关基因FSHR和CYP19A1表达降低。此外,发现PS-NP暴露会导致卵巢氧化应激和炎症水平增加,并且明显促进了卵巢间质的的纤维化。结论 PS-NPs暴露可引起小鼠卵巢氧化应激和炎症反应的增加并导致卵巢纤维化,提示PS-NPs的潜在雌性生殖毒性效应,为进一步探究NPs对女性生殖健康的影响提供基础。

关键词：

来源： cnki会议评论

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MEHP通过Keap1-Nrf2信号通路诱导卵巢颗粒细胞过度自噬的研究

二甲双胍调节自噬保护亚急性衰老大鼠睾丸功能的作用

中国毒理学会第十次全国毒理学大会

作者：许博代文杰刘玲杨宏裴秀英付旭锋宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室

目的邻苯二甲酸单-2-乙基己酯(MEHP)是常见的环境内分泌干扰物塑化剂邻苯二甲酸二-(2-乙基己酯)(DEHP)的主要体内活性代谢产物。目前已有研究表明DEHP的雌性生殖毒性是通过MEHP影响卵巢功能所致。我们前期研究发现DEHP暴露可能通过影响...

目的邻苯二甲酸单-2-乙基己酯(MEHP)是常见的环境内分泌干扰物塑化剂邻苯二甲酸二-(2-乙基己酯)(DEHP)的主要体内活性代谢产物。目前已有研究表明DEHP的雌性生殖毒性是通过MEHP影响卵巢功能所致。我们前期研究发现DEHP暴露可能通过影响肠道菌群结构及其代谢产物影响卵巢功能,并且伴随卵巢中自噬相关基因Beclin-1/LC3-B在卵巢颗粒细胞中的表达,这些结果提示卵巢颗粒细胞的自噬可能是MEHP损伤卵巢功能的主要过程,但具体的调控机理尚不清楚。本研究通过体外实验深入探讨MEHP导致卵巢颗粒细胞自噬的分子机制,为进一步了解DEHP及其体内代谢产物MEHP的生殖毒理机制提供依据。材料和方法本研究选取了3周龄小鼠卵巢原代颗粒细胞(GCs)和人卵巢颗粒细胞系KGN,经MEHP体外诱导后,CCK-8检测颗粒细胞活力,免疫印迹(WB)及免疫荧光(IF)检测自噬发生相关蛋白表达情况,利用自噬相关抑制剂和mCherry-GFP-LC3慢病毒转染KGN细胞探究对自噬流的影响,利用核质分离和Co-IP检测氧化应激及其关键调控转录因子Nrf2的上下游调控情况,并通过干预Nrf2的方式阐明MEHP诱导卵巢颗粒细胞损伤的分子调控机制;最后通过体外卵巢培养进一步验证相关机制。结果MEHP(200μM)处理颗粒细胞KGN和GCs 24h后细胞活力下降,自噬相关基因(Beclin-1、LC3B)表达改变,自噬流发生明显改变受到影响,并且MEHP导致颗粒细胞自噬的这一现象被自噬抑制剂氯喹所逆转。此外,结果还显示MEHP会导致线粒体结构紊乱、ROS水平升高,并且抗氧化剂NAC能够逆转这一现象且降低细胞自噬。进一步发现抗氧化关键因子Nrf2及其上游调控因子Keap1在MEHP导致的颗粒细胞自噬过程中发挥重要作用,并且干预Nrf2后会加重MEHP诱导的自噬。最后,进一步通过卵巢离体培养证实了MEHP通过调控Keap1-Nrf2导致卵巢颗粒细胞过度自噬。结论 Keap1-Nrf2在MEHP诱导卵巢颗粒细胞过度自噬过程中发挥重要作用,为了解DEHP的雌性生殖毒性提供依据。

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国新药杂志 2022年第17期31卷 1752-1760页

作者：王静陈冬梅陈苗虎娜刘文钊何瑞崔瑞琴马会明宁夏医科大学中医学院银川750004 宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室银川750004 宁夏医科大学总医院宁夏干细胞与再生医学重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院银川750004

目的:研究二甲双胍(Met)对D-半乳糖构建的亚急性衰老模型大鼠睾丸功能的影响及其分子调控机制。方法:颈部皮下注射D-半乳糖制备亚急性衰老大鼠模型。次月予以Met溶液灌胃治疗,每周监测大鼠的体重,测定大鼠睾丸重量、睾丸指数;ELISA法检... 详细信息

目的:研究二甲双胍(Met)对D-半乳糖构建的亚急性衰老模型大鼠睾丸功能的影响及其分子调控机制。方法:颈部皮下注射D-半乳糖制备亚急性衰老大鼠模型。次月予以Met溶液灌胃治疗,每周监测大鼠的体重,测定大鼠睾丸重量、睾丸指数;ELISA法检测大鼠血清睾酮(testosterone,T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二醇(E)水平;HE染色法观察睾丸形态;免疫组化染色检测衰老相关蛋白[β-半乳糖苷酶(β-gal)、p16和p21]、睾丸自噬相关蛋白[磷酸酶张力蛋白同源物诱导激酶1(PINK1)、Parkin、自噬效应蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和p62]和睾酮合成关键酶[类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素侧链裂解酶(CYP11A1)和17-β-羟基类固醇脱氢酶3(HSD17β3)]的表达情况,并用Western blot检测上述蛋白的表达量。结果:与对照组相比,衰老模型组和Met组大鼠体重整体呈下降趋势;衰老模型组睾丸重量及指数下降(P<0.01),Met干预后显著上升(P<0.001)。衰老模型组中T,FSH和E水平均显著下降(P<0.05),LH水平明显升高(P<0.01)。模型组衰老相关蛋白β-gal,p16和p21在睾丸细胞质中有明显阳性表达;与衰老模型组相比,Met干预后睾酮合成关键酶StAR,CYP11A1和HSD17β3的表达水平均显著性上升(P<0.05),自噬相关蛋白PINK1,Parkin,Beclin-1和LC3蛋白表达显著升高(P<0.05),p62蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论:二甲双胍能激活睾丸自噬水平,增加睾酮合成关键酶的水平,从而预防亚急性衰老大鼠睾丸功能减退。

关键词：二甲双胍自噬亚急性衰老大鼠睾丸功能

黄芪甲苷减轻环磷酰胺诱导的早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢炎症反应

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中国病理生理杂志 2023年第4期39卷 684-693页

作者：邢莎莎虎娜田瑞莹罗斌锁小娟刘文钊罗嘉琦陈苗杨丽陈冬梅马会明宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学中医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学实验动物中心宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院宁夏干细胞与再生医学重点实验室宁夏银川750004

目的:研究黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AS-IV)是否通过抑制核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路降低环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)诱导的早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)模型大鼠炎症反应。方法:动情周期正常的雌性SD大鼠80只,选取12只为正常对照组,其余68只大鼠用CTX腹腔注射诱导建立POI模型。将模型制备成功的60只大鼠随机分为5组,每组12只,分别为POI模型组、芬吗通组、低剂量AS-IV组、中剂量AS-IV组和高剂量AS-IV组,干预28 d后取样。采用ELISA法测定血清中17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)、抗缪勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平;转录组测序筛选差异表达基因及功能富集;HE染色法观察卵巢组织病理变化并进行卵泡计数;免疫组织化学染色法和Western blot法分别进行p65(胞核)、p-p65和p-IκBα及下游促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α及IL-8的定位表达和相对表达水平检测。结果:用CTX诱导15 d建立的POI模型大鼠动情周期紊乱;与正常对照组相比,POI模型大鼠血清17β-E2和AMH显著降低、FSH和LH显著升高(P<0.01)。经各组相应干预28 d后,与POI模型组相比,中剂量AS-IV组大鼠血清17β-E2和AMH水平升高、FSH和LH水平降低,差异显著(P<0.01)。基于转录组测序结果发现,POI模型组与中剂量AS-IV组有274个差异表达基因,富集在炎症相关功能基因簇。HE染色显示,与正常对照组相比,POI模型组大鼠卵巢组织结构紊乱,初级卵泡和成熟卵泡数目减少,闭锁卵泡数目增多(P<0.01);与POI模型组相比,中剂量AS-IV组大鼠卵巢组织初级卵泡和成熟卵泡数目增多(P<0.01)。芬吗通治疗后初级卵泡数量较模型组没有差异,可见的有腔卵泡数量较模型组增多,但多为闭锁卵泡。与正常对照组相比,POI模型组p65(胞核)、p-p65、p-IκBα、IL-6、IL-1β、TNF-α及IL-8的蛋白表达量显著升高(P<0.05);与POI模型组相比,芬吗通组和中剂量AS-IV组p65(胞核)、p-p65/p65、p-IκBα、IL-6、IL-1β、TNF-α及IL-8的蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:AS-IV可能通过介导NF-κB信号通路抑制卵巢炎症反应,从而改善CTX诱导的POI模型大鼠的卵巢形态结构和功能。

关键词：早发性卵巢功能不全黄芪甲苷核因子κB 环磷酰胺

益脾补肾方改善肥胖2型糖尿病小鼠生精功能障碍作用及机制

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中国中西医结合杂志 2023年第4期43卷 482-488页

作者：王强强于普光彭庆杰任帅王春红苏亚珊梁晓霞孙苗陈小江杜小利李广永何瑞宁夏医科大学基础医学院生育力保持教育部重点实验室银川750004 宁夏医科大学中医学院宁夏少数民族医药现代化教育部重点实验室银川750004 宁夏医科大学总医院泌尿外科银川750004

目的观察益脾补肾方改善肥胖2型糖尿病小鼠生精功能障碍的作用,并探讨其作用机制。方法将30只4周龄健康C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组、益脾补肾方低剂量组(低剂量组)、益脾补肾方高剂量组(高剂量组)、二甲双胍组,每组6只。... 详细信息

目的观察益脾补肾方改善肥胖2型糖尿病小鼠生精功能障碍的作用,并探讨其作用机制。方法将30只4周龄健康C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组、益脾补肾方低剂量组(低剂量组)、益脾补肾方高剂量组(高剂量组)、二甲双胍组,每组6只。对照组给予普通饲料,其余各组给予高脂饲料喂养16周,建立肥胖2型糖尿病小鼠模型。低、高剂量组给予益脾补肾方2、4 g/(kg·d),二甲双胍组给予二甲双胍200 mg/(kg·d)灌胃,模型组和对照组灌胃等量的生理盐水,连续灌胃30天。干预前后进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)和胰岛素耐量试验(ITT),计算曲线下面积(AUC);观察睾丸形态,测量小鼠重量并计算睾丸脏体比;HE染色观察睾丸形态变化;检测精子参数以及空腹血糖(FBG);ELISA法检测血清中睾酮(T)水平;比色法检测血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的变化;Western Blot检测脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达。结果对照组小鼠睾丸组织结构清晰,生精小管内各级生精细胞排列整齐;模型组小鼠睾丸组织结构混乱,各级生精细胞排列混乱,且数量显著减少,腔内出现大面积空洞;干预组出现不同程度改善。与对照组比较,模型组体重、体重AUC、FBG、OGTT-AUC、ITT-AUC、精子畸形率、血清MDA水平增加(P<0.05,P<0.01),睾丸系数、附睾系数、精囊腺系数、精子数量、精子活力、精子活率、血清T、血清T-SOD、GSH-Px水平、睾丸PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组同期比较,干预组体重AUC、体重、OGTT-AUC、ITT-AUC、精子畸形率、血清MDA水平下降(P<0.05,P<0.01),睾丸系数、附睾系数、精囊腺系数、精子数量、精子活力、血清T-SOD、GSH-Px水平、睾丸Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05);二甲双胍组精子活率、血清T、睾丸PI3K表达增加(P<0.05);低剂量组睾丸p-Akt蛋白表达升高(P<0.05);高剂量组精子活率、血清T、睾丸PI3K、p-Akt蛋白增加(P<0.05)。与二甲双胍组同期比较,低剂量组干预后体重AUC、体重增加(P<0.05);高剂量组干预后体重AUC、精子活力、血清T增加(P<0.05),ITT-AUC降低(P<0.05)。结论益脾补肾方可能通过调节PI3K/Akt/Bcl-2通路调节糖代谢来改善肥胖2型糖尿病小鼠生精功能。

关键词： 2型糖尿病生精功能障碍精液参数睾丸功能益脾补肾方中药