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细粒棘球绦虫原头节抗原Eg-00512的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2022年第1期17卷 71-74,113页

作者：李莎莎陶佳吕咏雪朱亚洲赵殷奇赵嘉庆赵巍宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院宁夏常见传染病防治重点实验室宁夏医学科学研究所

目的分析细粒棘球绦虫原头节特异性抗原Eg-00512的生物信息学特征。方法通过NCBI数据库获取Eg-00512蛋白的氨基酸序列;使用ProtParam在线软件分析Eg-00512蛋白的理化性质;采用SOMPA在线软件分析蛋白的二级结构;使用IEDB在线软件预测Eg-0... 详细信息

目的分析细粒棘球绦虫原头节特异性抗原Eg-00512的生物信息学特征。方法通过NCBI数据库获取Eg-00512蛋白的氨基酸序列;使用ProtParam在线软件分析Eg-00512蛋白的理化性质;采用SOMPA在线软件分析蛋白的二级结构;使用IEDB在线软件预测Eg-00512蛋白的亲水性、柔韧性、表面可及性、β-转角;应用SWISS-MODEL在线服务器分析蛋白氨基酸序列并组合模板和Eg-00512蛋白的三级结构;B细胞表位采用在线软件IEDB及BcePred综合预测,T细胞表位采用在线预测软件SYFPEITHI分析确定。结果Eg-00512蛋白由1254个氨基酸组成,理论pI值6.15;归类于稳定蛋白质,属于亲水性蛋白。Eg-00512蛋白的二级结构中α螺旋占51.28%,延伸链占17.22%,β-转角占4.78%,无规卷曲占26.71%。Eg-00512蛋白B细胞表位数量各为8个;有13个CTL和14个Th细胞优势表位。结论生物信息学方法预测细粒棘球绦虫原头节含有多个优势B、T细胞抗原表位,为包虫病的诊断和疫苗的研究奠定了理论基础。

关键词：细粒棘球绦虫 Eg-00512蛋白生物信息学分析抗原表位

黄芩苷调节let-7i-3p/PI3K/Akt/NF-κB信号轴减轻类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞NLRP3炎性小体活化

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中国药理学通报 2023年第12期39卷 2313-2319页

作者：张炜王莉杨雨欣马锐王丽黄菱万巧凤宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院风湿科宁夏银川750003 宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004

目的研究黄芩苷减轻类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(human fibroblast like synoviocytes of rheumatoid arthritis,HFLS-RA)NLRP3炎性小体活化的作用及机制。方法为证实黄芩苷减轻HFLS-RA中NLRP3炎性小体活化,采用免疫荧光观察黄芩苷处... 详细信息

目的研究黄芩苷减轻类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(human fibroblast like synoviocytes of rheumatoid arthritis,HFLS-RA)NLRP3炎性小体活化的作用及机制。方法为证实黄芩苷减轻HFLS-RA中NLRP3炎性小体活化,采用免疫荧光观察黄芩苷处理前后NLRP3的表达;Western blot检测黄芩苷处理48 h后,p-PI3K、p-Akt、NF-κB p65、NLRP3、ASC及caspase-1蛋白的表达;ELISA检测细胞上清中IL-1及IL-18的含量。为探究黄芩苷减轻NLRP3炎性小体活化的机制,采用双荧光素酶及Western blot验证let-7i-3p与PIK3CA的对应关系;RT-qPCR检测黄芩苷干预前后let-7i-3p及PI3K的表达;采用let-7i-3p干扰,验证黄芩苷是否减轻了增强的NLRP3炎性小体的活化。结果50、100 mg·L^(-1)黄芩苷明显减轻了NLRP3炎性小体的活化,抑制p-PI3K、p-Akt、NF-κB p65、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白的表达,抑制IL-1、IL-18的分泌。let-7i-3p与PIK3CA存在靶向对应关系,黄芩苷上调了let-7i-3p的表达、下调了PIK3CA的表达;黄芩苷减轻了因let-7i-3p干扰而增强的NLRP3炎性小体的活化。结论黄芩苷经上调let-7i-3p表达、抑制PI3K/Akt/NF-κB信号转导,从而减轻NLRP3炎性小体的活化。

关键词：黄芩苷类风湿关节炎类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 NLRP3炎性小体 miRNA 双荧光素酶

氧化苦参碱对坐骨神经结扎小鼠的镇痛作用及其对CaMKⅡ受体表达的影响

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中国药理学通报 2015年第12期31卷 1719-1724页

作者：杜娟张逢源许红霞王娅娜朱佳佳顿铃露余建强宁夏医学科学研究所宁夏医科大学基础医学院宁夏医科大学药学院宁夏银川750001

目的研究氧化苦参碱(OMT)对神经病理性疼痛小鼠的镇痛作用及其机制。方法采用坐骨神经结扎模型(CCI)机械缩足反射法观察OMT的镇痛作用,并分析其镇痛作用与Ca MKII受体的关系。结果 1给小鼠腹腔注射160、80 mg·kg^(-1)OMT可明显延长小... 详细信息

目的研究氧化苦参碱(OMT)对神经病理性疼痛小鼠的镇痛作用及其机制。方法采用坐骨神经结扎模型(CCI)机械缩足反射法观察OMT的镇痛作用,并分析其镇痛作用与Ca MKII受体的关系。结果 1给小鼠腹腔注射160、80 mg·kg^(-1)OMT可明显延长小鼠的机械缩足反射期(P<0.05)。2给小鼠腹腔注射160、80、40 mg·kg^(-1)OMT可明显降低小鼠的冷缩足反射次数(P<0.05)。3 OMT能够跟CaMKⅡ拮抗剂KN-93和AIP发挥协同作用。4模型组小鼠的pCaMKⅡ蛋白表达较假手术组明显升高(P<0.01);与模型组比较,OMT(160 mg·kg~(^(-1)))组可明显降低p CaMKⅡ蛋白的表达(P<0.01)。结论 OMT对神经病理性疼痛具有镇痛作用,其镇痛作用可能与CaMKⅡ有关。

关键词：氧化苦参碱神经病理性疼痛坐骨神经结扎镇痛作用 CaMKⅡ 小鼠

细粒棘球绦虫抗原Fis1T细胞表位肽缓解过敏性哮喘小鼠气道炎症的免疫学作用研究

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中国病原生物学杂志 2024年第1期19卷 47-51,55页

作者：辛云卓宋东谢笑多杨雪金海容赵嘉庆宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学科学技术研究中心宁夏常见传染病重点实验室宁夏医科大学总医院耳鼻咽喉头颈外科宁夏医科大学临床医学院

目的探讨细粒棘球绦虫Fis1蛋白的T细胞表位肽(Eg.Fis183-102)对过敏性哮喘小鼠气道炎症的缓解作用及免疫学作用机制。方法1)体内试验:将24只6~8周雌性BALB/C小鼠随机分为3组(每组8只),其中B组为对照组,C组为过敏性哮喘组(OVA),T组为干预... 详细信息

目的探讨细粒棘球绦虫Fis1蛋白的T细胞表位肽(Eg.Fis183-102)对过敏性哮喘小鼠气道炎症的缓解作用及免疫学作用机制。方法1)体内试验:将24只6~8周雌性BALB/C小鼠随机分为3组(每组8只),其中B组为对照组,C组为过敏性哮喘组(OVA),T组为干预组(OVA+Eg.Fis183-102)。采用ELISA法检测小鼠血清OVA特异性IgE水平;采用HE,PAS,MASSON组织染色检查小鼠肺组织病理变化;采用流式细胞术分析肺脏和脾脏组织中嗜酸性粒细胞比例、Th1和Th2的分群及比例。2)体外试验:采用裂红法分离小鼠脾脏单个核细胞,每孔以1×106个细胞铺板,分为3组(每组3个复孔),其中B组为对照组,C组为刀豆蛋白刺激组(ConA),T组为干预组(ConA+Eg.Fis183-102),培养3 d后收集上清,采用ELISA法检测IFN-γ和IL-4水平。结果1)体内试验:与C组相比,T组小鼠肺组织的炎细胞浸润、胶原沉积等病理损伤有所改善,血清OVA特异性IgE水平、肺组织嗜酸性粒细胞比例、肺脏和脾脏Th2细胞比例均显著下降(均P<0.05),肺和脾Th1细胞比例显著上升(均P<0.05)。2)体外试验:与B组相比,C组小鼠脾脏单个核细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平均显著上升(均P<0.05);与C组相比,T组脾脏单个核细胞培养上清中IFN-γ水平显著上升,IL-4水平显著下降(均P<0.01),与体内试验结果一致。结论Eg.Fis183-102可缓解过敏性哮喘小鼠肺组织炎症损伤,降低IgE的分泌,并可能通过纠正Th1/Th2免疫应答失衡抑制OVA诱导的过敏性哮喘小鼠的气道炎症。

关键词：过敏性哮喘细粒棘球绦虫 Fis1蛋白T细胞表位肽

基于miRNA表达谱解析细粒棘球蚴病患者体内Th17/Treg失衡机制

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中国血吸虫病防治杂志 2022年第3期34卷 277-285页

作者：鲁迪宋佳卉马子建张鹏越许磊韦川陈颖周莎朱继峰李娅琳赵嘉庆朱明星赵瑞王海陈晓军赵巍苏川南京医科大学基础医学院江苏南京211166 南京医科大学公共卫生学院江苏南京211166 宁夏医科大学医学科学技术研究中心、宁夏医学科学研究所宁夏银川750004 江苏省南京亿科人群健康研究院宁夏常见传染病防治研究重点实验室、宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 宁夏回族自治区石嘴山市疾病预防控制中心南京医科大学国际教育学院

目的观察细粒棘球蚴病患者血清微小RNA(miRNA)表达水平、探讨miRNA对辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡的影响,以阐明细粒棘球蚴慢性感染并长期致病的机制。方法提取细粒棘球蚴病患者与健康对照者血清总RNA,采用Illumina测序... 详细信息

目的观察细粒棘球蚴病患者血清微小RNA(miRNA)表达水平、探讨miRNA对辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡的影响,以阐明细粒棘球蚴慢性感染并长期致病的机制。方法提取细粒棘球蚴病患者与健康对照者血清总RNA,采用Illumina测序平台进行高通量测序。分别采用miRBase数据库和miRDeep2工具进行已知miRNA注释和新miRNA预测,并进行差异分析。采用miRanda软件和TargetScan软件分别预测差异表达miRNA靶基因后取交集,进行基因本体(GO)富集分析以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析。在差异表达变化倍数居前20位的miRNA中,匹配可靶向决定Th17细胞和Treg细胞生成的关键转录因子(RORC和FOXP3)或重要调控通路(PI3K⁃Akt和mTOR通路)相关基因的miRNA。结果细粒棘球蚴病患者与健康对照血清中共有53个差异表达miRNA,其中47个上调表达miRNA、6个下调表达miRNA。GO富集分析显示,差异表达miRNA功能涉及DNA转录翻译、细胞成分、细胞形态、神经发育及代谢分解等过程。KEGG富集分析显示,这些差异表达miRNA靶基因涉及的主要信号通路包括MAPK、PI3K⁃Akt、mTOR等信号通路。在差异表达变化倍数居前20位的miRNA中,有3个潜在靶向调控RORC的miRNA、15个潜在靶向PI3K⁃Akt、mTOR信号通路的miRNA。结论细粒棘球蚴感染后可使患者血清miRNA表达谱出现明显改变,差异表达miRNA可能通过靶向Th17/Treg关键转录因子或PI3K⁃Akt、mTOR通路而导致Th17/Treg免疫失衡,进而利于细粒棘球蚴在宿主体内长期寄生并慢性致病。

关键词：细粒棘球蚴微小RNA 辅助性T细胞17 调节性T细胞免疫失衡

结核分枝杆菌Ag85B蛋白真核表达质粒构建及其对小鼠肺免疫功能影响

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中国病原生物学杂志 2023年第8期18卷 905-910页

作者：张炜李慧杨雨欣姚思王天松万巧凤宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系宁夏银川750004 宁夏医科大学临床医学院

目的构建结核分枝杆菌Ag85B的真核表达质粒pcD-Ag85B,经肌肉免疫小鼠,观察其对小鼠肺免疫功能及下呼吸道菌群的影响。方法将信号肽基因及编码Ag85B的基因共963 bp核苷酸序列与pcDNA3.1^(+)连接,构建真核表达质粒pcD-Ag85B,经双酶切及测... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌Ag85B的真核表达质粒pcD-Ag85B,经肌肉免疫小鼠,观察其对小鼠肺免疫功能及下呼吸道菌群的影响。方法将信号肽基因及编码Ag85B的基因共963 bp核苷酸序列与pcDNA3.1^(+)连接,构建真核表达质粒pcD-Ag85B,经双酶切及测序鉴定后体外转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),并验证其表达;用该质粒经肌肉注射免疫C57BL/6J小鼠,42 d时收集小鼠呼吸道灌洗液,采用间接ELISA法测定SIgA及IgG特异性抗体效价。取小鼠右肺,分离淋巴细胞,采用流式术检测分泌IFN-γ的CD4^(+)T及CD8^(+)T细胞比例;取小鼠左肺,提取核酸进行16S RNA高通量测序及菌群结构分析。结果成功构建真核表达质粒pcD-Ag85B并检测到Ag85B蛋白的表达。ELISA检测pcD-Ag85B免疫C57BL/6J小鼠呼吸道灌洗液SIgA及特异性IgG抗体效价分别为1∶640和1∶400;流式细胞术检测Ag85B能诱导分泌IFN-γ的CD4^(+)T及CD8^(+)T细胞增殖,所占百分比分别为0.72%和0.57%;16S RNA高通量测序分析显示免疫鼠呼吸道菌群多样性增加,厚壁菌门-乳杆菌属丰富度增高(P基础。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B 真核表达载体适应性免疫益生菌

枸杞叶多糖对小鼠代谢、抗氧化、免疫功能及肠道微生物的影响

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食品工业科技 2023年第17期44卷 413-419页

作者：白敏张颖李泉积姬锦金亚婷王琦赵嘉庆宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学公共卫生与管理学院宁夏银川750004 宁夏医科大学医学科学技术研究中心宁夏银川750004 宁夏常见传染病防控重点实验室宁夏银川750004 宁夏回族自治区医学科学研究所宁夏银川750004

目的:以C57BL/6雌性小鼠为研究对象,连续灌胃7周不同剂量(50、100、150 mg/kg)枸杞叶多糖,探究未灌胃枸杞叶多糖的正常组与灌胃不同剂量枸杞叶多糖组对小鼠代谢、抗氧化、免疫功能及肠道微生物的影响。方法:扫描电镜观察各组小鼠肠粘膜... 详细信息

目的:以C57BL/6雌性小鼠为研究对象,连续灌胃7周不同剂量(50、100、150 mg/kg)枸杞叶多糖,探究未灌胃枸杞叶多糖的正常组与灌胃不同剂量枸杞叶多糖组对小鼠代谢、抗氧化、免疫功能及肠道微生物的影响。方法:扫描电镜观察各组小鼠肠粘膜超微结构,检测血清丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性来评价不同剂量枸杞叶多糖的抗氧化能力,采用流式细胞术检测脾脏中T、B、树突状细胞(DC)的数量,全自动生化分析仪检测小鼠血清中的生化指标,通过16S RNA测序检测小鼠粪便样本中肠道菌群的变化。结果:各组小鼠肠粘膜超微结构无差异。高剂量枸杞叶多糖可升高T-SOD(45.27±2.73 U/g)和GSH-Px(1585.76±33.69 U/g)的活性,降低MDA(6.15±1.03 nmol/g)水平。高剂量组枸杞叶多糖可显著提高T、DC细胞数量(P基础和参考依据。

关键词：枸杞叶多糖代谢抗氧化免疫功能肠道菌群

黄卡瓦胡椒素B促进EGFR的降解进而抑制H1975肺癌细胞的增殖和迁移

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现代肿瘤医学 2023年第1期31卷 17-24页

作者：唐颖李金玲王科江杨忠云李雪森西南医科大学基础医学院肿瘤研究所四川泸州646000

目的:研究黄卡瓦胡椒素B对肺癌细胞H1975增殖及迁移的影响并探讨其机制。方法:培养H1975肺癌细胞株,用不同浓度的黄卡瓦胡椒素B处理细胞24、48和72 h后,采用CCK-8法检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞增殖的影响。Transwell实验检测黄卡瓦胡... 详细信息

目的:研究黄卡瓦胡椒素B对肺癌细胞H1975增殖及迁移的影响并探讨其机制。方法:培养H1975肺癌细胞株,用不同浓度的黄卡瓦胡椒素B处理细胞24、48和72 h后,采用CCK-8法检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞增殖的影响。Transwell实验检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞迁移能力的影响。Western blotting检测20μmol/L和40μmol/L黄卡瓦胡椒素B处理16 h后对H1975细胞EGFR-AKT信号通路相关蛋白表达的影响。采用qPCR技术检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞EGFR mRNA水平的影响。Western blotting检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达的影响。CCK-8实验和Transwell实验分别检测黄卡瓦胡椒素B与EGFR小分子抑制剂联用对H1975细胞增殖和迁移的影响。结果:黄卡瓦胡椒素B在体外能抑制H1975细胞的增殖,且抑制作用呈浓度依赖性。黄卡瓦胡椒素B处理组细胞迁移数明显减少(P<0.05)。Western blotting结果显示,使用黄卡瓦胡椒素B处理16 h后,H1975肺癌细胞的EGFR、p-AKT和AKT蛋白表达水平明显降低(P<0.05),但EGFR mRNA水平无显著改变。当巴佛洛霉素A1(Bafilomycin A1,BAF)或氯喹(Chloroquine,CQ)阻断自噬时,黄卡瓦胡椒素B诱导的对EGFR蛋白的抑制作用被逆转,并且10、20和40μmol/L黄卡瓦胡椒素B可促进H1975细胞LC3-Ⅱ蛋白表达。黄卡瓦胡椒素B与EGFR小分子抑制剂联用能够抑制H1975细胞的增殖和迁移以及p-EGFR和p-AKT的表达。结论:黄卡瓦胡椒素B通过促进EGFR的降解进而抑制H1975肺癌细胞的增殖和迁移。

关键词：肺癌黄卡瓦胡椒素B EGFR-AKT信号通路

基于高通量测序技术分析3种羊肉混合基因组序列的短片段重复序列

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中国食品学报 2020年第9期20卷 275-285页

作者：耿多罗瑞明王丽娟高爽宋亚倩宁夏大学农学院银川750021 宁夏医科大学基础医学院银川750021

为研究易混淆绵羊品种的种内多态性与遗传多样性,甄别滩羊、小尾寒羊和滩寒杂交羊,采用宏基因组学的方法,以混合羊肉样品(滩羊、小尾寒羊、滩寒杂交羊)为试验对象,通过高通量测序技术对混合样本全基因组进行测序。利用MISA查找拼接序列... 详细信息

为研究易混淆绵羊品种的种内多态性与遗传多样性,甄别滩羊、小尾寒羊和滩寒杂交羊,采用宏基因组学的方法,以混合羊肉样品(滩羊、小尾寒羊、滩寒杂交羊)为试验对象,通过高通量测序技术对混合样本全基因组进行测序。利用MISA查找拼接序列SSR位点,分析SSR序列特征并使用PRIMER3 Input(version 2.3.7)设计荧光标记引物,以多态性SSR分子标记分析滩羊、小尾寒羊、滩寒杂交羊群体遗传多样性。结果显示,SSR位点分布结果广泛,多态率为46%,平均PIC值为0.358,表明多态性水平处于中等水平。绵羊属3种羊肉以及混合羊肉样本分别聚为一类,呈单系性,STR峰图分型清晰,表明可实现3种绵羊的区分。成功建立了3种绵羊的SSR分子身份证。通过SSR序列多态性可对3种绵羊及其混合样本进行鉴定,为混合绵羊肉的基源鉴定提供新思路和技术指导,对绵羊全基因组工程研究,绵羊种属间的分子标记开发和种质资源鉴定保护具有一定参考价值。

关键词：混合羊肉样本全基因组测序短片段重复序列亚种鉴别