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Aspergillus niger FS6中β-1,3-1,4-葡聚糖酶cDNA片段的克隆及序列测定

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科技通报 2001年第6期17卷 7-12页

作者：李卫芬孙建义许梓荣廖玉华浙江大学动物科学学院饲料科学研究所浙江杭州310029

通过 RT- PCR方法首次从真菌 Aspergillus niger FS6中扩增和克隆到 β- 1,3- 1,4 -葡聚糖酶 c DNA片段 .序列测定表明 :该片段全长 2 80 bp.经 Clustal W软件进行同源性分析后表明 ,该序列与枯草芽孢杆菌、水解淀粉芽孢杆菌、厌氧真菌... 详细信息

通过 RT- PCR方法首次从真菌 Aspergillus niger FS6中扩增和克隆到 β- 1,3- 1,4 -葡聚糖酶 c DNA片段 .序列测定表明 :该片段全长 2 80 bp.经 Clustal W软件进行同源性分析后表明 ,该序列与枯草芽孢杆菌、水解淀粉芽孢杆菌、厌氧真菌、牛链球菌和热纤维梭菌中 β- 1,3- 1,4 -葡聚糖酶基因同源性很高 ,分别为 91% ,90 % ,70 % ,6 7% ,6 5 %

关键词： Aspergillus niger β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆 cDNA片段序列测定真菌

添加复合酶制剂与麸皮对玉米秸、稻草青贮发酵品质和养分消化率的影响

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中国兽医学报 2004年第3期24卷 298-303页

作者：吴跃明刘建新刘丹吕建敏浙江大学动物科学学院奶业科学研究所浙江杭州310029 浙江中医学院浙江杭州310053

通过 2个试验研究了添加青贮专用酶制剂 (Strawzyme)与麸皮对玉米秸 (CS)和稻草 (RS)青贮的效果。试验 1,采用单因子设计 ,对 CS和 RS进行加酶青贮试验 ,每种原料均设 4个处理 ,分别添加酶制剂 0、0 .8、1.3、1.8g/ kgDM。结果表明 ,玉... 详细信息

通过 2个试验研究了添加青贮专用酶制剂 (Strawzyme)与麸皮对玉米秸 (CS)和稻草 (RS)青贮的效果。试验 1,采用单因子设计 ,对 CS和 RS进行加酶青贮试验 ,每种原料均设 4个处理 ,分别添加酶制剂 0、0 .8、1.3、1.8g/ kgDM。结果表明 ,玉米秸水溶性碳水化合物 (WSC)含量较高 (13% ) ,无酶青贮也能获得优良品质 ,加酶处理对其感官质量无明显影响 ;随着加酶量增加 ,青贮 CS的中性洗涤纤维 (NDF)、氨态氮 /总氮 (NH3- N/ TN)和 p H均呈显著下降趋势 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,而乳酸、总有机酸含量显著提高 (P<0 .0 1) ,并以加酶 1.8g/ kg时处理效果最佳 ,其 NH3-N/ TN和 p H分别比对照组降低 31% (P<0 .0 1)和 9% (P<0 .0 1) ,乳酸提高 33% (P<0 .0 1) ;青贮 CS的 4 8h干物质降解率 (DMD4 8)、有机物消化率 (OMD)和估测代谢能 (ME)也随加酶量增加呈现显著上升趋势 (P<0 .0 1) ,其中加酶组 OMD比对照组依次提高 7% (P<0 .0 1)、9% (P<0 .0 1)和 10 % (P<0 .0 1)。稻草 WSC含量很低 (3.5 % ) ,加酶处理只略微改善青贮 RS的气味和霉变程度 ,而对其评分等级无改良效果 ,但从显著降低的 NH3- N/ TN、p H及显著提高的乳酸衡量 ,加酶处理也能显著改善青贮 RS的发酵品质 (P<0 .0 1) ,且加酶量在 1.3g/ kg以上时处理效?

关键词：复合酶制剂麸皮玉米秸稻草青贮发酵品质养分消化率

绵羊成纤维细胞OAR-L1高效转染方法的探索

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2022年第1期48卷 96-105页

作者：吴飞吴杰陈学秋周静茹张惠黄艳时恒枝杨怡马光旭杜爱芳浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所杭州310058

为了在绵羊肺成纤维细胞OAR-L1中高效表达外源蛋白,探索适合该细胞的转染方法,本研究比较了聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)、脂质体2000转染试剂(Lipofectamine^(TM) 2000 transfection reagent,Lipo 2000)、成纤维细胞转染试剂盒(Cytofect^(TM) fibroblast transfection kit,CF2)以及慢病毒介导的细胞转染方法在OAR-L1细胞中表达外源蛋白的效果。结果显示:以pLentiCMV-EGFP-Puro或pLentiCMV-mCherry-Puro荧光质粒转染OAR-L1细胞时,细胞密度和转染试剂用量均可影响PEI、Lipo 2000和CF2介导的细胞转染效率,且三者最佳转染效率均不超过30%,而慢病毒介导的细胞侵染不受细胞密度和病毒液用量的限制,获得的荧光细胞数目也显著高于前三者。包装好的病毒液可以在4或-80℃条件下至少保存15 d而侵染效果不受影响。在OAR-L1细胞中共表达2种外源蛋白时,包装获得的2种慢病毒液等比例混合后再侵染的方式能获得更高的共转率。综上所述,慢病毒侵染是一种能够实现在OAR-L1细胞中高效表达外源蛋白的细胞转染方式,本研究结果为其他难转染细胞系转染方式的选择提供了一定的参考。

关键词：成纤维细胞OAR-L1 转染方法慢病毒绵羊

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一系列新型三环二萜的合成与抗肿瘤活性研究

高等学校化学学报 2006年第11期27卷 2101-2105页

作者：熊轶王奎武潘远江孙红祥浙江大学化学系杭州310027 浙江大学动物科学学院杭州310027

对活性天然产物(+)-7-deoxyn imb id iol非对映异构体的外消旋体cis-(±)-7-deoxyn imb id iol进行了合成和衍生,共得到了8个新型三环二萜化合物;对合成的新化合物进行了抗肿瘤活性的实验研究,其中化合物5d对人体乳腺癌瘤株MCF7表现出... 详细信息

对活性天然产物(+)-7-deoxyn imb id iol非对映异构体的外消旋体cis-(±)-7-deoxyn imb id iol进行了合成和衍生,共得到了8个新型三环二萜化合物;对合成的新化合物进行了抗肿瘤活性的实验研究,其中化合物5d对人体乳腺癌瘤株MCF7表现出了较强的抑制作用(IC50=7.49μg/mL),可能作为新型抗肿瘤药物先导化合物.

关键词：三环二萜合成抗肿瘤活性

捻转血矛线虫锌金属蛋白酶NAS-31的表达特性及功能初步研究

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2021年第6期47卷 805-814页

作者：黄艳张惠童丹妮周静茹吴飞陈学秋杨怡马光旭杜爱芳浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所杭州310058

捻转血矛线虫病由捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生于反刍动物皱胃之中引起。为探究捻转血矛线虫锌金属蛋白酶NAS-31基因(Hc-nas-31)在虫体自由生活时期(特别是3期幼虫)中发挥的功能,本研究通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-ti... 详细信息

捻转血矛线虫病由捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生于反刍动物皱胃之中引起。为探究捻转血矛线虫锌金属蛋白酶NAS-31基因(Hc-nas-31)在虫体自由生活时期(特别是3期幼虫)中发挥的功能,本研究通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测目的基因在捻转血矛线虫各发育阶段的转录水平,利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)、基因步移及融合PCR方法扩增并分析其基因结构;构建原核表达载体后转化至BL21感受态细胞中进行诱导表达;将纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体;通过虫体间接免疫荧光分析Hc-NAS-31在捻转血矛线虫体内的表达特性并预测其功能。结果表明:Hc-nas-31在各时期虫体中均有转录,其中在3期幼虫中的转录水平最高;蛋白质印迹结果显示,制备的抗体能特异性结合Hc-NAS-31天然蛋白;间接免疫荧光分析发现,Hc-NAS-31蛋白主要表达于3期幼虫的上皮细胞合胞体内,在成虫中则分布于肠道、生殖腺(性腺)、肌肉组织及早期虫卵中。本实验明确了NAS-31在捻转血矛线虫中的表达特性,为进一步研究Hc-nas-31的生物学功能奠定了基础。

关键词：捻转血矛线虫捻转血矛线虫锌金属蛋白酶NAS-31基因转录水平表达特性

关键转录因子调节反刍动物乳腺脂肪酸代谢的研究进展

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农业生物技术学报 2020年第5期28卷 918-924页

作者：辛慧杰刘建新石恒波浙江理工大学生命科学与医药学院浙江大学动物科学学院奶业科学研究所

脂肪含量是乳品质的重要评价指标。除了作为能量供应,反刍动物乳中脂肪对于人类的健康有着重要的生理作用,而反刍动物乳腺中脂肪的代谢受到核转录因子的调控。近年来,核转录因子调节反刍动物乳腺脂肪酸代谢的研究取得了重要进展,尤其是... 详细信息

脂肪含量是乳品质的重要评价指标。除了作为能量供应,反刍动物乳中脂肪对于人类的健康有着重要的生理作用,而反刍动物乳腺中脂肪的代谢受到核转录因子的调控。近年来,核转录因子调节反刍动物乳腺脂肪酸代谢的研究取得了重要进展,尤其是配体依赖性转录因子过氧化物酶增殖物激活受体家族(peroxisome proliferator-activated receptor family, PPAR)和肝X受体(liver X receptor, LXR)对乳腺脂肪酸合成的决定性作用得到证实。PPAR和LXR均能形成转录复合体,结合下游靶基因的启动子上游,继而影响乳脂代谢相关通路的活性。PPAR和LXR不同的基因亚型的生理功能存在较大差异。胆固醇应答元件结合蛋白1(sterol regulatory element-binding protein 1, SREBP1)是调节乳腺脂肪酸合成的典型转录因子,主要影响脂肪酸的重头合成等。本文对这些关键转录因子调节乳腺脂肪酸合成的最新研究进展进行综述,旨在为调控乳脂成分提供参考资料。

关键词：转录因子脂肪酸乳腺调控

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抗冻蛋白的特性和作用机制

生理科学进展 2003年第3期34卷 238-240页

作者：彭淑红姚鹏程徐宁迎浙江大学动物科学学院浙江310029 浙江大学应用昆虫研究所浙江310029

抗冻蛋白是非常热门的研究领域 ,具有广阔的应用前景。本文结合最新的报道 ,从抗冻蛋白的多样性、热带活性和改变冰的生长 ,综述了抗冻蛋白的特性 ,阐释了抗冻蛋白的作用机制的三种假说 :“偶极子偶极子”假说。

关键词：抗冻蛋白作用机制偶极子氢原子结合模型假说刚体能量学说热滞活性冰核

矿化柞蚕丝胶膜表面粗糙度的调控及其对骨髓间充质干细胞生长行为的影响

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复合材料学报 2015年第5期32卷 1527-1535页

作者：帅亚俊张璨邓连霞朱良均杨明英浙江大学动物科学学院杭州310058 浙江大学医学院杭州310058

生物材料表面的粗糙度是影响细胞行为的重要因素之一。为了调控丝蛋白生物材料表面的粗糙度，并评价材料表面粗糙度对细胞生长行为的影响，首先，通过湿化学共沉淀法，以柞蚕丝胶（AS）溶液为模板，诱导了羟基磷灰石（HAp）晶体成核，... 详细信息

生物材料表面的粗糙度是影响细胞行为的重要因素之一。为了调控丝蛋白生物材料表面的粗糙度，并评价材料表面粗糙度对细胞生长行为的影响，首先，通过湿化学共沉淀法，以柞蚕丝胶（AS）溶液为模板，诱导了羟基磷灰石（HAp）晶体成核，进而调控了AS膜表面的粗糙度。然后，采用SEM、粗糙仪、FTIR及EDX等对HAp／AS复合膜表面形貌、粗糙度及成分进行了表征。最后，通过SEM和CellTiter96@AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒（MTS）检测了骨髓间充质干细胞（BMSCs）在HAp／AS复合膜表面的形貌及增殖率。结果表明：纯AS膜的表面粗糙度为0．15μm，矿化1、8及24h后，表面粗糙度分别为0．38、0．46和1．20μm；矿化24h后，在HAp／AS复合膜表面可观察到直径为30～80nm的球状复合物，生成的矿化物为HAp；HAp／AS复合膜具有良好的细胞相容性，表面粗糙度为1．20btm的复合膜能够显著促进BMSCs的增殖，粗糙度对BMSCs在HAp／AS复合膜表面的粘附和形貌有着重要的影响。因此，可通过矿化的方法在生物大分子表面诱导HAp晶体的成核与生长，从而调控材料的表面粗糙度，研究材料界面上的细胞行为。

关键词：柞蚕丝胶表面粗糙度生物矿化组织工程骨髓间充质干细胞细胞相容性

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由粉煤灰水热合成方钠石及其表征

中国有色金属学报 2009年第2期19卷 366-371页

作者：姚志通李海晏夏枚生叶瑛张路浙江大学理学院杭州310027 浙江大学动物科学学院杭州310029

利用粉煤灰通过水热合成反应合成了单一方钠石,并对其进行了表征。经XRD分析,合成产物为单一方钠石,理想的结构式为Na8Al6Si6O24Cl24,晶胞参数为a0=0.889nm,z=1。经SEM观察,合成产物为规则球形,球形颗粒表面粗糙,紧密连接;合成的方钠石... 详细信息

利用粉煤灰通过水热合成反应合成了单一方钠石,并对其进行了表征。经XRD分析,合成产物为单一方钠石,理想的结构式为Na8Al6Si6O24Cl24,晶胞参数为a0=0.889nm,z=1。经SEM观察,合成产物为规则球形,球形颗粒表面粗糙,紧密连接;合成的方钠石与原料粉煤灰化学组成最明显的变化是硅含量减少,S/A(SiO2与Al2O3质量比)由2.3降低至2.0。红外光谱和差热分析均显示了合成产物中自由水的存在。

关键词：粉煤灰方钠石水热合成模板剂表征